VODA OD PEPTONA: OBRAZLOŽENJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2025

Voda s peptonom je tekući medij za obogaćivanje, neselektivno, koji se uglavnom koristi kao uzorci hrane za razrjeđivanje ili drugih materijala. S kemijskog stajališta ovaj je medij vrlo jednostavan, sadrži mesni pepton, natrijev klorid i vodu.

Ima određenu hranjivu vrijednost, omogućava obogaćivanje uzorka. Ako postoje zloupotrijebljene bakterije, ovaj medij ima moć popraviti održivost. Posebno je korisna u oporavku bakterija koje pripadaju obitelji Enterobacteriaceae.

Peptone voda u bocama. Izvor: MSc Marielsa gil

U slučaju oporavka salmonela, preporučuje se uporaba varijante vode sa natopljenom peptonom; To služi kao sredstvo za pred obogaćivanje uzorka, u ovom slučaju sadrži druge elemente kao što su dinatrijev fosfat i dikalij-fosfat.

Obično se peptonska voda priprema pri neutralnom pH, no postoje i druge varijante u kojima je potrebno da pH bude 8,5 ± 0,2 (alkalna), jer je bakterija koju treba izolirati alkalna, kao što je npr. Vibrio kolere.

Nadalje, ovaj medij se može koristiti kao osnovni medij za testove fermentacije ugljikohidrata.

osnova

Peptoni osiguravaju hranjive tvari potrebne za rast bakterija, posebno dušik i aminokiseline kratkog lanca, dok natrijev klorid održava osmotsku ravnotežu.

Nadalje, medij omogućuje raspršivanje, homogenizaciju i popravak bakterijskih stanica koje su oštećene industrijskim procesima.

Kao razrjeđivač je idealan, učinkovito zamjenjujući fiziološku otopinu (SSF) ili otopinu fosfatnog pufera (PBS).

Rast bakterija vidljiv je promatranjem njegove zamućenosti.

priprema

Domaća priprema (nije komercijalna)

Odmjeriti 1 g peptona i 8,5 g natrijevog klorida, otopiti u 1 litri destilirane vode. PH treba prilagoditi na 7,0. Za to se može koristiti 1N natrijev klorid.

Priprema pomoću komercijalnog medija

Odvažite 15 g dehidriranog medija i otopite u litri destilirane vode. Homogenizirati smjesu. Ako je potrebno, smjesa se kuha 1 minutu da se postigne potpuno otapanje. Poslužite u bočicama od 100 ml ili epruvetama od 10 ml po potrebi. Autoklavite na 121 ° C 15 minuta.

Ohladite i koristite ili čuvajte u hladnjaku. Konačni pH medija je 7,2 ± 0,2.

Boja dehidriranog medija je svijetlo bež, a pripremljeni medij svijetlo je jantarna.

Priprema za fermentacijske testove

Prethodnom pripravku - prije sterilizacije - ugljikohidrat mora se dodati u konačnoj koncentraciji od 1%, plus Andrade indikator (kiseli fuksin) ili fenol crveni (0,018 g / L). Cijevi trebaju biti opremljene zvonom Durham kako bi se promatralo stvaranje plina.

Ostale varijante vode s peptonom

Puferirana ili puferirana peptonska voda

Sadrži enzimski hidrolat kazeina, natrijevog klorida, dihidrogen kalijev fosfat i natrijev hidrogen fosfat dodekahidrat. Konačni pH je 7,0 ± 0,2.

Za njegovu pripremu izvažite 20 g dehidriranog medija i otopite u 1 litri destilirane vode. Ostavite da odstoji oko 5 minuta. Grijati 1 minutu dok se potpuno ne otopi.

Izlijte u odgovarajuće staklenke po potrebi. Sterilizirajte pomoću autoklava na 121 ° C 15 minuta.

-Alkalna peptonska voda

Odvažite 25 g dehidriranog medija i otopite u 1 litri vode. Postupak kao što je gore opisano. PH se kreće od 8,3 do 8,7.

Koristiti

Inokulum se vrši postavljanjem uzorka izravno.

Koristi se za razrjeđivanje uzoraka, posebno kad se sumnja da može doći do oštećenja bakterija. Obično su razrjeđenja 1:10 i 1: 100.

Inkubirajte 24 sata u aerobiozi na 35-37 ° C.

Uzorci stolica

Za uzorke stolice za salmonelu preporučuje se upotreba puferirane ili puferirane vode kao sredstva za obogaćivanje.

Da biste to učinili, postupite na sljedeći način:

Ako se formira stolica, uzmite 1 g uzorka. Ako su tekuće, uzmite 1 ml izmeta i suspendirajte u epruveti s 10 ml vode natopljene peptona. U slučaju rektalnih brisa, materijal koji se nalazi u tamponu ispustite u puferiranu peptonsku vodu.

U svim slučajevima se uzorak jako dobro promiješa i homogenizira.

Inkubirajte 18 do 24 sata na 37 ° C. Zatim se subkultura u bujon za obogaćivanje, kao što je juha selenitnog cistina ili tetrationati juha na 37 ° C u trajanju od 18-24 sata više. Konačno, kultivirajte u selektivnom mediju za salmonelu, poput SS agar, XLD agar, Hektoen agar, između ostalih.

Uzorci hrane

Peptonska voda koristi se kao sredstvo za obogaćivanje ili kao jednostavno sredstvo za razrjeđivanje, ali ako se traže vrste salmonele, koristi se kao sredstvo za pred obogaćivanje, kao što je već opisano.

U hrani postupite kako slijedi:

Za čvrstu hranu vrijedi 25 g uzorka, a za tekuću hranu 25 ml. Navedeni dio stavite u tikvice koje sadrže 225 ml vode peptona. Pomiješajte i homogenizirajte uzorak.

Ako se sumnja da je opterećenje mikroba veliko, može se izvršiti serijska ili decimalna razrjeđenja kako bi se olakšalo brojanje jedinica koje formiraju koloniju (CFU).

Broj razrjeđenja ovisit će o vrsti uzorka i iskustvu analitičara.

Ako se naprotiv sumnja da je opterećenje mikroba vrlo malo, nije potrebno provoditi razrjeđenja. Nakon toga, subkultura na selektivnim medijima.

U slučaju morske hrane, poput školjkaša, riba, između ostalog, u potrazi za kolericama Vibrio ili drugim vrstama Vibrio, treba koristiti vodu s peptonom prilagođenom na pH 8,5 (alkalna peptonska voda).

QA

Iz svake pripremljene šarže treba inkubirati jednu do dvije epruvete 24 sata u aerobiozi pri 37 ° C bez inokulacije. Na kraju vremena ne treba primijetiti zamućivanje ili promjenu boje.

Poznati kontrolni sojevi se također mogu koristiti za procjenu njihove učinkovitosti:

Za to se mogu koristiti sljedeći bakterijski sojevi: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

U svim slučajevima se očekuje zadovoljavajući razvoj mikroba, što se promatra mutnoćom medija.

Ograničenja

-Dehidrirani medij je vrlo higroskopan, pa ga treba držati dalje od vlage.

- Medij se ne smije koristiti ako se opazi bilo kakvo pogoršanje.

- Dehidrirani medij za kulturu treba skladištiti na temperaturi od 10 do 35 ° C

-Pripremljeni medij mora se čuvati u hladnjaku (2-8 ° C).

Reference

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B i Velázquez O. Tehnike mikrobiološke analize hrane. 2009, 2. izd. Kemijski fakultet, UNAM. Meksiko. Verzija za administratore priručnika i dokumenata (AMyD) Kemijskog fakulteta, UNAM 1. Dostupno na:
2. Britannia Laboratories. Buftirana peptonska voda. 2015. Dostupno na: britanialab.com
3. Neogeni laboratoriji. Peptone vode. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Peptone vode. 2015. Dostupno na: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Buficirana peptonska voda. Dostupno na: merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratories. Alkalna voda peptona. Dostupno na: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.