KRVNI BRIS: KARAKTERISTIKE, VRSTE, TEHNIKE I HISTOLOGIJA - BIOLOGIJA - 2025

Premazati krv je periferne krvi mrlja koji se koristi za analizu komponenata prisutnih u krvotok. Promatranje krvnog mrlja pruža hematološke podatke koji su vrlo korisni za dijagnozu i praćenje mnogih patologija.

Krvni pregled omogućuje kvantificiranje broja različitih vrsta bijelih krvnih stanica (leukocitna formula), kao i analizu morfologije i oblika eritrocita, leukocita i trombocita.

Priprema razmaza krvi. Izvor: Krv u laboratorijskoj čaši. Public DomainPictures.net

U njemu se mogu otkriti abnormalnosti u broju stanica, poput: leukocitoza ili leukopenije, limfocitoza ili limfopenija, neutrofilija ili neutropenija, trombocitoza ili trombocitopenije i eozinofilija. Također se mogu vidjeti nepravilnosti u veličini stanice i obliku.

Uz to, moguće je otkriti razne vrste anemija, leukemije i bakterijske ili krvne parazite.

Za to postoje različite vrste brisa koji se izvode ovisno o svrsi studije. Postoje tanke mrlje i guste mrlje. Ti se mrlje razlikuju u tehnici izvođenja i svrsi studije.

Oni s finim kapi koriste se kao dodatak kompletnoj hematologiji. To daje podatke o leukocitnoj formuli, uz analizu oblika i morfologije tri ćelijske stanice koje čine krv: crvena serija, bijela serija i trombociti. Iako služe i kao nadopuna proučavanju debelog krvnog filma.

Debeli film koristi se za dijagnozu bolesti uzrokovanih hemoparazitima, kao što su malarija ili malarija, toksoplazmoza, lešmanijoza, Chagasova bolest, babesioza i mikrofilarijaza.

Karakteristike brisa krvi

Dobar bris krvi mora zadovoljiti određene karakteristike. Među njima možemo spomenuti:

-Uzorak mora udovoljavati minimalnim zahtjevima kvalitete da bi bio reprezentativan.

-Uzorkovanje mora biti dobro izvršeno.

- Pravovremeno izvršenje razmaza.

-Ako se radi s venskom krvlju, upotrijebite antikoagulant koji ne deformira stanice i miješajte epruvetu prije nego što napravite bris.

-Ako se radi kapilarnom krvlju, odbacite prvu kap.

- Širenje mora biti homogeno. To osigurava ravnomjernu raspodjelu stanica i krvne stanice da se mogu dobro analizirati oblik i broj.

- Strane razmaza trebaju biti glatke od početka do kraja.

-Mozište mora odgovarati razmaku od 1 do 2 mm u odnosu na strane klizača.

-Strošeni sloj treba postupno smanjivati ​​debljinu od početka do kraja (razmazati sitne kapi kliznom metodom).

-To mora biti pravilno označeno kako bi se izbjegla zbrka uzoraka.

-Očvrstite i mrlje pravilno očistite promatranje krvnih elemenata.

-Ostavite da se razmaz dobro osuši prije nego što pripremite pripravak pod mikroskop. Stavljanje uronjenog ulja na vlažni razmaz uzrokovat će stvaranje micela koje sprečavaju vidljivost stanica.

Vrste razmaza krvi

Razmazi periferne krvi mogu se svrstati u tanke i guste. Oni s tankim slojem koriste se za proučavanje formule leukocita i morfološko promatranje krvnih stanica. Između ostalih mogu se vidjeti i vanćelijske bakterije kao što su borelija i intracelularni hemoparaziti, poput plazmodija.

U finoj mrlji mogu se prepoznati vrste parazita, dakle, specifičnija je tehnika od guste mrlje, ali gusta mrlja je osjetljivija jer je to metoda koncentracije koja se koristi za iscrpnu potragu za izvanstaničnim hemoparazitima.

Postoje dvije vrste sitnih kapljica: one na mikroskopskim slajdovima i one na poklopcima. Gusti razmazi izvode se na dijapozitivima.

Tehnike uzimanja uzoraka krvi

Krvni mrlje mogu se napraviti iz kapilarne punkcije ili venskog uzorka uzetom antikoagulansom. Ako se vrši krvlju s antikoagulansom, razmaz se može pripremiti do 2 sata nakon uzimanja uzorka.

S oprezom treba koristiti antikoagulanse koji ne deformiraju krvne stanice. Najbolja opcija je EDTA. Suprotno tome, treba izbjegavati uporabu antikoagulansa poput triatrijevog citrata.

Ako se uzorak uzme kapilarnom punkcijom, razmaz treba produžiti odmah, prije stvaranja krvnih ugrušaka.

Prvu kap treba odbaciti, kako bi sljedeća kap mogla spontano pobjeći kako bi se izbjeglo razrjeđivanje uzorka tekućinom iz tkiva. To je najviše preporučena tehnika za promatranje morfologije stanica jer u krvi nema nikakvih aditiva.

Za promatranje hemoparazita, Solari i suradnici zaključili su u svom istraživačkom radu da su obje tehnike (venepunkcija i kapilara) jednako učinkovite.

Vrste uzorkovanja krvi: A. Kapilarna punkcija. B. Punkcija vena. Izvor: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Tehnike pripreme brisa krvi

Krv krvi može se obaviti ručno na dijapozitivima mikroskopa ili na poklopcu ili dijapozitivu. Moguće je i putem automatizirane opreme.

-Klizne mrlje

To je tehnika koju preferira većina laboratorija zbog jednostavnog rukovanja.

Pomoću Pasterove pipete, u sredinu jednog i čistog tobogana stavite ne baš gustu ili vrlo finu kap krvi.

Razmaz se izrađuje uz pomoć drugog klizača s prizemnim krajem. Klizač za brušenje stakla postavljen je okomito na suprotni kraj mjesta gdje se kap nalazi.

Naginje se do kuta između 30 - 45 ° i klizi prema padu; Kad se dodirne, linearno se širi preko ruba klizača i stalnim i definiranim pokretom lista se vraća; prije nego što dođete do kraja klizač se podiže.

Na taj se način homogeni sloj raspoređuje po površini prijemnog tobogana.

Mrlja se ostavi da se osuši. Zatim se fiksira i oboji preferiranom mrljom. Ostavite da se dobro osuši prije gledanja pod mikroskopom. Kap ulja stavi se na lice koje pokazuje mrlje i promatra se pod svjetlosnim mikroskopom.

Krv na slide. Gornja slika: neuređeni razmaz. Donja slika: mrlje razmaženo. Izvor: Coinmac

Dijelovi razmaza napravljeni na slajdovima

Kod ove vrste brisa mogu se razlikovati tri definirana područja: glava, tijelo i rep. Glava odgovara području na kojem počinje bris, to je najdeblje područje i nije ga dobro promatrati.

Tijelo je središnji ili srednji dio brisa, najbolje je promatrati područje pod mikroskopom, jer su tamo stanice ravnomjerno raspoređene i njihova morfologija je sačuvana.

Rep odgovara završnom dijelu brisa; ovdje raspodjela više nije jednolika i morfologija eritrocita ima tendenciju gubitka.

Kontrola kvalitete u tehnici slajda

U ovoj tehnici igra temeljnu ulogu:

-Čišćenje i odmašćivanje klizača: jamči dobro klizanje uzorka.

-Veličina kapljica: s vrlo velikim kapi dobit će se gušći i duži razmaz, s vrlo malim kapljicama namaz će biti kraći i izuzetno fin.

- Brzina koja se primjenjuje u produžetku: što je manja brzina, razmaz će biti tanji, što je veća brzina to će biti deblji.

-Kut izvršavanja: manji je kut što je finiji razmaz, veći je i kut deblji.

-Zatvorite pokrivač

Ne koristi se široko jer je rukovanje krhkim poklopcima glomazno, ali nudi velike prednosti s obzirom na to da se postiže bolja raspodjela stanica kroz razmazivanje.

U sredini pokrivača nije postavljen ne baš gust, niti vrlo fini kapi. Povrh toga se postavlja drugi pokrivač na takav način da se vrhovi oba pokrivača izboče, tvoreći zvijezdu.

Kap će se spontano raširiti po površini oba pokrivača. Na kraju produžetka svaki se klizač brzo pomiče na suprotnu stranu (jedan s desne strane, a drugi s lijeve strane).

Tehnika daje dva razmaza umjesto jednog.

Stavljaju se da se osuše s raširenom stranom prema gore. Nakon što se osuši, fiksira se i mrlja tehnikom izbora. Ostavite da se osuši. Kapljica uranjajućeg ulja stavi se na klizač, smjesu se stavi okrenutom prema dolje i pregledava se pod mikroskopom.

Kontrola kvalitete u tehnici pokrivanja

Za postizanje dobrog razmaza ove tehnike važno je:

-Čišćenje pokrivača (pomaže da se uzorak glatko klizi).

-Veličina kapljica (utječe na debljinu mrlje).

- Brzina kojom se odvajaju pokrivači (utječe na homogenost posipavanja).

-S automatiziranom opremom

To se može učiniti preko bilo kojeg od ovih timova: Spinnera i Autoslidea.

Spinner se sastoji od postavljanja tobogana s kapljicom krvi na posebnu pločicu centrifuge. Uzorak se centrifugira velikom brzinom; na taj se način formira homogena i fina mrlja uzorka. Ima nedostatak mogućnosti hemolize uzorka.

Autoslide je instrument koji mehanički izvodi pokrete za izvođenje brisa na dijapozitivima. Također možete popraviti i obojati mrlje. Može se prilagoditi i nekim automatskim brojačima hematologije.

Tehnika gustog razmazivanja

Za pretragu hemoparazita preporučuju se dva brisa: jedan s finom kapi i jedan s gustom kapljicom.

Izvršite kapilarnu punkciju, očistite prvu kap. Stavite finu kap na slajd i razmažite kako je ranije objašnjeno. Za debelu kuglu stavite veliku perlu na drugi slajd i raširite je na 1,55 mm kvadrat. Ostavite da se dva mirisa osuše.

Bojenje mrlja

Mrlje od Giemsa ili Wright, među ostalim, mogu se koristiti za fine kapi. Za guste mrlje preporuča se mrlja Giemsa ili May-Grunwald Giemsa.

Mrlja od Giemsa

Smeća se fiksira 3 minute s metanolom, isuši i ostavi da se ponovo osuši. Nakon toga se razmaz pokriva Giemsa mrljama 10-15 minuta. Ispere se destiliranom vodom i ostavi da se osuši. Za promatranje pod mikroskopom stavlja se kap potopljenog ulja.

Wright je mrlja

Smrad je prekriven Wright-ovom mrljama 5 minuta. Odbacite i stavite otopinu pufera na pH 6,8 na 6 minuta. Izdubite pripravak da se homogenizira. Operite destiliranom vodom i ostavite da se osuši. Promatrajte pod mikroskopom.

Vrste neispravnih mrlja

Javlja se kod vježbenika u tehnici finog ispuštanja s dijapozitivima.

Mast s područjima različite debljine (tanki i debeli isprepleteni)

To je zato što pokretani pokreti nisu bili konstantni tijekom širenja, pa su se zaustavljali i ponovno pokretali.

Vrlo kratki razmazivanje

Imaju 2 uzroka: jedan je zbog činjenice da je klizač za tlo podignut prije nego što je došao do drugog kraja klizača. U ovom je slučaju izuzetno gusta i kratka.

S druge strane, ako je mrlja kratka, ali tanka, to je zato što je veličina kapi bila vrlo mala.

Razmažite pobrašnjenim dijelom prema kraju namaza

Ima nekoliko uzroka: jedan je da je rub tla neispravan, da se pritisak na prijamnom klizaču povećao u vrijeme širenja ili da se istrošen osnovni rub klizača.

Razmažite se formiranjem vakuole ili jasnim zaobljenim ili eliptičnim područjima

Nastaju zbog upotrebe masnih mrlja (slabo ispranih i odmašćenih).

Jako guste ili vrlo tanke mrlje

Kapi koje su prevelike stvorit će vrlo guste mrlje od početka do kraja i vrlo male kapi stvorit će vrlo fine mrlje.

Histologija

Krvne stanice se mogu vidjeti u krvnom brisu. Među njima su:

-Eritrociti ili crvene krvne stanice

Ljudska krv, eritrociti ili crvene krvne stanice i dvije bijele krvne stanice. Preuzeto i uređeno iz: Viascos. Vaše je promatranje od najveće važnosti. Na ovoj se razini mogu otkriti anemija, talasemija, bolest koštane srži itd.

Broj eritrocita ili crvenih krvnih stanica je približno 5 x 10 ⁶ mm3 kod muškaraca i 4,5 x 10 ⁶ u žena. Crvena krvna zrnca su u obliku bikonkavnih diskova, sa središnjom fiziološkom blijedošću. Mogu se vidjeti odvojeno (normalno) ili formirati rouleaux hrpe (nenormalno).

U razmazu se pokazuju i poikilocitoza (crvene krvne stanice različitog oblika), anizocitoza (crvena krvna zrnca različitih veličina), anisopoikilocitoza (različitih oblika i veličina), anisokromija (različitih boja), eritroblasti (nezrele crvene krvne stanice), mikrocitoza (manja crvena krvna zrnca)) i makrociti (veći eritrociti).

Kad predstavljaju manju količinu hemoglobina i povećava se središnja blijeda, kaže se da postoji hipohromija. Kada se primijeti normalna crvena serija, prijavit će se kao normocitna i normokromna.

-Bijele krvne stanice ili leukociti

bijele krvne stanice

Normalna količina kreće se od 5 000 do 10 000 mm ³. Izmijenjene su u zaraznim procesima, u alergijama i u leukemiji. U razmazu krvi može se razlikovati nekoliko vrsta koje su objašnjene u nastavku.

Segmentirani neutrofili

Oni predstavljaju 55-65% ukupnih leukocita. Oni mjere između 10-15 µm. Imaju segmentirano ili lobedovo jezgro koje usvaja različite morfologije, stoga se naziva polimorfonuklearno.

Imaju obilne neutrofilne granule u svojoj citoplazmi i nešto azurofila. Povećavaju bakterijske infekcije (neutrofilija), smanjuju virusne infekcije (neutropenija).

Mogu se primijetiti morfološke abnormalnosti poput pleokariocitoze (hiper-segmentirane jezgre), lukova (nezrele stanice) ili makropolisa (ovalnog oblika i velikih).

Ostale izmjene:

-Toksične granulacije

-Pseudo Pelgerovi neutrofili (jezgra ne predstavlja lobulacije ili su bilobede).

-Döhle tijela: tamnoplava citoplazmatska uključenja.

-Pojačana citoplazmatska bazofilija.

-Intratoplazmatske vakuole.

-Celijska picnoza (gubitak međunuklearnih mostova).

Segmentirani eozinofili

Predstavljaju 1-3% ukupnih bijelih krvnih zrnaca. Oni mjere 9-10 µm. Karakterizira ih prisutnost obilnih acidofilnih citoplazmatskih granula i nekoliko azurofila. Njegovo jezgro ima dvije lobulacije. Njihov se broj povećava kod alergija i bolesti parazitskog podrijetla.

Segmentirani bazofili

Izuzetno su rijetki, predstavljaju 0-1% leukocita. Oni mjere 10-12µm. Jezgro je obično nepravilnih granica i može biti bilobeno, ali ne vidi se zbog velikog broja grubih bazofilnih granulacija u svojoj citoplazmi. Vrlo rijetko se može vidjeti bazofilija.

limfociti

Oni su male stanice s bazofilnom citoplazmom, s jezgrom, dobro definirane, okrugle, s kondenziranim kromatinom. Jezgro obuhvaća gotovo cijelu stanicu. Predstavljaju 26-40% leukocita u krvi. Povećavaju se virusne infekcije (limfocitoza). Mogu se vidjeti reaktivni limfociti.

monociti

Stanice su veće od limfocita, s većom citoplazmom i labavijim, ovalnim jezgrama kromatina. Oni mjere 9-12µm. Citoplazma je obilna i obično se pojavljuje blijedo sivkasto plava sa standardnim tehnikama bojenja. Među promjene mogu se primijetiti vakuolizirani monociti i monocitoza.

-Platelets

Oni mjere između 1,5-3 µm. Oblik mu je okrugli ili ovalni. Normalna vrijednost kreće se od 150 000 do 350 000 trombocita / mm3. Oni se mogu smanjiti kod nekih virusnih infekcija. Nemaju jezgru i obojeni su ljubičasto. U ovoj seriji mogu primijetiti nepravilnosti, poput makro ili mikro trombocita, trombocitoza ili trombocitopenija i fragmenti trombocita.

Patološki elementi

Krvni paraziti

Hemoparaziti, poput uzročnika malarije ili malarije (paraziti roda Plasmodium), mogu se vidjeti u krvnim mrljama. Iz tog je razloga važno da se razmaz analizira ručno, jer automatizirana oprema propušta ovaj nalaz.

bakterije

U patologijama kao što su recidivna groznica ili lajmska bolest može se primijetiti njezin uzročnik. U ovom slučaju, to odgovara Borrelia recurrenti spirochetes i Borrelia burgdorferi u krvi.

Nezrele stanice

Teški slučajevi zabilježeni su među leukemijama, leukemoidnim reakcijama i leukoeritroblastičkim reakcijama. Kod bakterijskih infekcija mogu postojati mala odstupanja ulijevo (prisutnost lopova). Eritroblasti se mogu vidjeti i kod nekih anemija.

Reference

1. Krvo i hematopoetsko tkivo. Dostupno na: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Anđeo. Klinička laboratorijska interpretacija. 8. izdanje. Uredništvo Médica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Računi Llanosa A. Usporedba gustoća parazita u gustom padu venske krvi s akupresurom u dijagnozi Malaria vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. Dostupno na: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Važnost proučavanja razmaza periferne krvi u starijih osoba. Medisur 2017; 15 (3): 362-382. Dostupno na: scielo.sld
5. Grinspan S. Istraživanje razmaza periferne krvi. Kontinuirano medicinsko obrazovanje. Dostupno na: bvs.hn/RMH