BOJENJE HEMATOKSILINOM-EOZINOM: KARAKTERISTIKE, UPOTREBE, TEHNIKE - KEMIJA - 2026

Hematoksilin - eozinom je bojenje tehnika koristi kombinaciju bojila hematoksilinom i eozinom. Ovaj par boja čini savršen dvojac, jer hematoksilin djeluje kao osnovna boja, a eozin je kiselo bojilo.

Označavanje bazičnih ili kiselih boja ne odnosi se na pH dobiven u otopini, već govori o prevladavajućem omjeru u pogledu anionskih ili kationskih naboja koje imaju ili prema lokaciji kromoforne skupine.

Izvor: Todd Straus i Vladimir Osipov obojeni hematoksilinom - eozinom (HE) ciliated columnar epitel

U tom smislu, hematoksilin se smatra osnovnim (kationskim) bojom i zbog toga ima afinitet prema kiselinskim strukturama, kao što je jezgra stanica. Dok eozin, kao kiselo (anionsko) bojilo, ima afinitet prema alkalnim ili osnovnim strukturama, poput stanične citoplazme.

Iz tog razloga, ova kombinacija boja koristi se široko za obojenje tkiva, jer omogućava jasno razlikovanje jezgara i citoplazmi. Jezgre oboje tamno plavu ili ljubičastu boju, a citoplazma je ružičasta.

Bojenje na hematoksilin-eozinu jedna je od najčešće korištenih tehnika bojenja na području histologije i citologije, zbog jednostavnog rukovanja i niskih troškova. Koristi se za vizualizaciju stanica, debelih živčanih vlakana i prisutnost određenih mikroorganizama u tkivima, poput: parazita, gljivica i bakterija, između ostalih.

karakteristike

hematoksilin

Hematoksilin je neutralno bojilo. Međutim, komponenta koja daje boju (kromofor) nalazi se u kationskom ili osnovnom središtu molekule. Otuda i njegov afinitet prema kiselinskim strukturama. Njegova kemijska formula je C ₁₆ H ₁₄ O ₆ i njegov Znanstveno ime je 7,11b-dihidro-kromen-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol.

Uglavnom obojava jezgre stanica, budući da su vrlo bogate nukleinskim kiselinama. Može obojati i citoplazmatske inkluzije virusnog porijekla.

Da bi se hematoksilin mogao mrljati, mora biti u oksidiranom stanju i vezan na metal. Potonji će služiti fiksaciji na tkivo, to jest, djelovat će kao mordant.

Kada se hematoksilin oksidira naziva se hematein. Oksidacija se postiže izlaganjem kisiku (starenjem) reagensa ili tvarima koje pomažu u njegovoj oksidaciji (kemijskoj oksidaciji).

eozin

Eosin je boja koja oboji crvenu ili ružičastu boju. U vodi je netopljiv iako postoji verzija topiva u vodi. Općenito, eozin se priprema otapanjem u alkoholu (95 ° etanol).

Boji citoplazme, mišićna vlakna, citoplazmatske organele i kolagen, ali ne mrlja stanične jezgre. To je zato što je negativno nabijena, dakle, ima afinitet prema pozitivno nabijenim strukturama.

Postoje dvije vrste eozina "Y" i "B". Eozin "Y" poznat je kao žuti eozin. Njegov Znanstveno ime je Tetrabrom f uorescein a njegova je kemijska formula je C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅.

S druge strane, eozin "B" se ponekad naziva plavkast eritrosin B. Njegov Znanstveno ime je dibromodynitro f uorescein a formula C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉. Oboje su vrlo slični i razlika između korištenja jednog ili drugog nije baš uočljiva. Međutim, najpopularniji je eozin "Y".

Eosin ima svojstvo razlikovanja žive i mrtve stanice jer je sposoban da pređe preko membrane da bi obojao svoju citoplazmu kad su stanice mrtve, a citoplazmu ćelije ostavile bezbojnu ako ostane živa.

Prijave

Bojenje živčanih vlakana

Gusta živčana vlakna mogu se obojati i identificirati s hematoksilin-eozinom. Međutim, nije korisno za bojenje tankih živčanih vlakana, jer je za vizualizaciju ovih stadija potrebno srebrno bojenje.

Histološke mrlje na koži

U bojenju rožnog sloja kože boja koja djeluje je eozin, jer na ovoj razini stanice nemaju jezgru.

U zrnatom sloju kože hematoksilin snažno mrlja keratohijalinske granule u stanicama granula. Suprotno tome, spinozni sloj kože slabo je obojen hematoksilinom, dok je bazalni ili germinalni sloj prilično obojen.

Eosin mrlja citoplazmu svih stanica i intenzitet boje može varirati od sloja do sloja.

Bojenje hematoksilinom-eozinom uzoraka stolice

Gómez i sur., 2005. pokazali su da je obojenje hematoksilin-eozinom djelotvornije u identificiranju slučajeva amebijaze zbog Entamoeba histolytica i Entamoeba disparha nego metoda svježe vizualizacije (fiziološka otopina i lugol) u bolesnika s akutnom proljevnom bolešću.

Također se pokazalo da je visoko osjetljiva u otkrivanju eritrofagocitoze (ameje koje su zahvatale eritrocite).

Bojenje histoloških odjeljaka za dijagnozu infekcije

Walwyn i sur., 2004. predložili su upotrebu histoloških mrlja za otkrivanje mikroorganizama koji uzrokuju infekciju.

Pomoću bojenja hematoksilin-eozinom, oni su mogli vizualizirati infekcije uzrokovane Clostridium, Actinomyces, spirillae ili Candida. Oni su također mogli primijetiti prisutnost parazita Sarcoptes escabiei u kožnim odjeljcima i virusnih inkluzija citomegalovirusom i herpesom u odjeljcima različitih tkiva.

Tehnike

Za histološke uzorke

Histološko obojenje presjeka prolazi kroz niz koraka. Prvo je dobiti histološki rez. Ovo se mora namotati da bi se kasnije dobili mikrotomi (ultrafini). Tehnika se sastoji od sljedećih koraka:

1-Eliminacija viška parafina: za to možete koristiti ksilol ili Heme-D, uroniti na 3-5 minuta.

2-Rehidracija uzorka: to se postiže uranjanjem uzorka u različite koncentracije alkohola (etanol) u silaznom redoslijedu (100 °, 90 °, 70 °). U svim slučajevima 7 minuta.

3-eliminacija viška alkohola: za to se uranja u vodu na 7 minuta.

4-Bojenje hematoksilinom: uzorak je uronjen na 6-10 minuta u pladanj koji sadrži hematoksilin. Vrijeme izloženosti ovisi o veličini i debljini uzorka.

5-Eliminacija viška hematoksilina: ispere se vodom 5 minuta, a zatim se provodi brzi prolaz (10-20 sekundi) kroz kiseli alkohol. Kasnije se opere vodom 5 minuta. Potom se uroni u etanol na 96 °.

6-obojenje s eozinom: za to je uzorak uronjen na 5 minuta u pladanj eozina.

7-dehidracija uzorka: da biste to učinili, ide kroz posude s alkoholom (etanol), ali ovaj put uzlaznim redoslijedom. (70 °, 90 °, 100 °). (U trajanju od 5 sekundi, 5 sekundi, 1 minutu).

8 - Razjašnjenje uzorka: za to se izlaže ksilolu 5-10 minuta i suši da se trajno zavari kanadskim balzamom ili drugim sličnim materijalom.

Za uzorke stolice u potrazi

Na sloju bolesničke stolice nanosi se mrlja i fiksira se 80% alkoholom tijekom 5 minuta. List je uronjen u hematoksilin na 5 minuta i odmah ispran vodom.

Nakon toga, brzo se uranja u kiseli alkohol, a potom u vodu s amonijakom. Ispire se vodom. Obojeno je 5 minuta u eozinu. Uzorak se dehidrira kako je objašnjeno u struci i na kraju se ispere s ksilenom.

Priprema reagensa

- Hematoksilin

U jednoj litri destilirane vode otopite 50 grama kalijevog ili amonijevog aluminij-sulfata. Kad se potpuno otopi, dodajte 1 gram kristaliziranog hematoksilina. Kad se potpuno otopi, dodaje se 1 g limunske kiseline zajedno s 50 g kloral hidrata i 0,2 g natrijevog jodata.

Smjesa se kuha 5 minuta, zatim se ostavi da se ohladi i filtrira kako bi se uklonile preostale čvrste čestice. Tako pripremljen reagens može se odmah upotrijebiti.

- Eosin

Može se pripremiti s alkoholnom ili sa vodenom bazom.

Alkoholni eozin

U 100 ml etanola na 95 ° otopi se 0,5 grama eozina "Y". Zatim dodajte nekoliko kapi ledene octene kiseline.

2% vodeni eozin

U 1250 ml destilirane vode otopi se 25 grama vodotopljivog eozina "Y". Zatim dodajte nekoliko kapi ledene octene kiseline.

Kiseli alkohol

Izmjerite 0,5 ml koncentrirane klorovodične kiseline i dopunite do 100 ml apsolutnog alkohola.

Amonijačna voda

Izmjerite 0,5 ml koncentriranog amonijaka i dodajte destiliranu vodu do 100 ml.

Reference

1. Navarrete, G. Histologija kože. Rev Fac Med UNAM 2003.; 46 (4): 130-133. Dostupno na: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Identifikacija Entamoeba histolytica / E. Odvojite se tehnikom svježe amebe i njenim mrljanjem hematoksilinom-eozinom u akutnoj proljevu. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Dostupno na: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Korisnost histoloških tehnika za dijagnozu infekcije u anatomskim uzorcima. Rev Cub Med Mil, 2004.; 33 (2). Dostupno na: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW reagensi. Mrlja od hematoksilin-eozina. 2017, Španjolska. Dostupno na: itwreagents.com
6. Eozinom. Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 7 stu 2018, 08:18 UTC 4. kolovoza 2019, 22:13 en.wikipedia.org
7. „Hematoksilinom.” Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 3. svibnja 2019., 11:23 UTC. 4 kolovoza 2019, 22:48 wikipedia.org