KSANTOPROTEINSKA REAKCIJA: OBRAZLOŽENJE, POSTUPAK, UPORABA - KEMIJA - 2024

Reakcija xanthoprotein je kemijski postupak koristi za određivanje prisutnosti ili odsutnosti aromatskih amino kiselina, kao što su tirozin i triptofan, koji mogu biti u slobodnom obliku ili tvori topljive proteine, peptide ili polipeptide.

Također se koristi za otkrivanje otrovnih tvari u krvi koje u svom sastavu sadrže grupu benzena. Ovaj test je također poznat kao ksantoprotein Becherova reakcija.

Pozitivna reakcija ksantoproteina Izvor: preuzeto iz videa:

Ksantoproteinska reakcija koristi koncentriranu dušičnu kiselinu, toplinu i neutralizirajući lužinu. Ako se otopina nakon neutralizacije reakcije pretvori iz žute u narančastu, test se smatra pozitivnim. Promatrano obojenje nastalo je stvaranjem dušičnih spojeva dobivenih nitrifikacijom benzenskih skupina.

Ako količinu ukupnog proteina treba kvantificirati, potrebno je koristiti druge metode određivanja proteina, poput Biureta.

Reakcija ksantoproteina uglavnom se koristi kada se analiziraju tvari čiji kemijski sastav nije poznat. Ova je reakcija obično dio skupa testova koji će pomoći u određivanju kemijskog sastava određene tvari ili ekstrakta. Zbog toga ga istraživači široko koriste.

S druge strane, Becherova ksantoproteinska reakcija koristi se za otkrivanje fenolnih i indonskih tvari u krvi, što omogućuje predviđanje pojave nefropatije, prije nego što se povećaju drugi kasniji parametri.

osnova

Reakcijom se u osnovi otkriva prisutnost benzen skupine, kako u aminokiselinama, tako i u proteinima i peptidima. Dušična kiselina djeluje na benzenski prsten aminokiselina koje je posjeduju, formirajući fenolne nitro spojeve.

Za reakciju je potrebno provesti toplinu, obično se stvara talog koji zamućuje medij, pretvarajući ga u mliječno. Talog može biti bijel ili žut. Na kraju, potreban je korak alkalizacije koji naglašava boju. Za to se koristi baza poput 40% natrijevog hidroksida ili amonijaka.

Reakcija će se protumačiti kao pozitivna ako se primijeti jaka žuta boja tijekom postupka grijanja ili tamno narančasta kada se reakcija alkalizira. Aminokiseline koje otkriva uglavnom su tirozin i triptofan.

Ksantoproteinska reakcija. Izvor:

U slučaju fenilalanina, iako je aromatična aminokiselina, jezgro benzena ove aminokiseline teško je nitrirati u jednostavnoj reakciji, stoga će emitirati ili negativnu ili slabu pozitivnu reakciju.

Općenito, ksantoproteinski test može se nadopuniti Hopkins-Coleovim testom koji se koristi za specifičnu identifikaciju triptofana. Ako je ksantoproteinski test pozitivan, a Hopkins-Coleov test negativan, isključuje se prisutnost triptofana u toj otopini, što ukazuje uglavnom na prisutnost tirozina. Isto tako, može se, između ostalog, nadopuniti i Millonovom reakcijom na otkrivanje tirozina.

Ova se reakcija može koristiti i na uzorcima krvi, plazme ili desalbuminiranog seruma za dijagnozu uremije ili zatajenja bubrega. U ovom slučaju, traži se otkrivanje otrovnih tvari (fenolnih i indola) koje nastaju uslijed crijevne truleži.

Ove tvari imaju benzen-skupinu i stoga daju pozitivnu reakciju ksantoproteina, iako reakcijska tvar nije niti aminokiselina ni protein.

Postupak

- Ksantoproteinska reakcija za detekciju aminokiselina s aromatskim skupinama

Stavite 1 ml ispitnog uzorka u čistu, suhu epruvetu.

-Dodajte 0,5 ml koncentrirane dušične kiseline.

-Inkubirajte smjesu u vodenoj kupelji na 70 ° C 2 minute. Prethodno pripremite vodenu kupelj na spomenutoj temperaturi.

-Kada uklonite cijev s vodene kupelji, moguće je primijetiti da je otopina postala mliječna i poprimila određenu žućkasto-bijelu boju.

-Otopina se hladi kapanjem hladne vode na dno epruvete.

-Priprema se alkalno dodaje polako (kap po kap) 40% -tna otopina natrijevog hidroksida dok se ne promijeni boja.

-Ako je test pozitivan, na sučelju tekućina formiraće se tamno narančasti prsten.

-Ako je reakcija negativna, neće se stvoriti boje.

- Ksantoproteinska reakcija na otkrivanje fenolnih i indonskih supstanci u krvi

-Podijelite 5 cc 20% triklorooctene kiseline na 5 cc venske krvi, plazme ili seruma, a posljednji je najviše naznačen. Dobro promiješajte i filtrirajte.

- Uzmite 2 ml filtrata i pomiješajte ga sa 0,5 ml dušične kiseline. Zatim se zagrijava do vrenja, a za to se cijev postavlja neposredno iznad upaljača na 30 minuta. Ohladi se vodom i doda 1,5 do 33% natrijevog klorida.

To se tumači na sljedeći način:

-Negativni rezultat: žućkasta boja.

-Positivan (+) limun žuti rezultat.

- (++) zlatno žuto.

- (+++) tamno žuta do smeđa

Također se može protumačiti korištenjem referentne Autenrieth kolorimetrijske ljestvice, koja se sastoji od različitih koncentracija kalijevog dikromata. To se priprema u 10 u 10 razrjeđenja iz 0,03874% matične otopine. Svaka epruveta predstavlja postotak.

Interpretacijske ljestvice

Postoje dvije ljestvice interpretacije koje se nazivaju drevnim i modernim. Normalne vrijednosti su:

Stari stol: između 75 i 85%

Moderni stol: između 15 i 25%

Ako je boja epruvete na sredini dvije standardne epruvete, između dva mjerenja izrađuje se prosjek.

Standardna otopina kalijevog dikromata priprema se na sljedeći način: izmjeri se 7,9 ml 10 N kalijevog dikromata i dovede se u 100 ml u tikvicu. Razrijeđenja slijede kao što je prikazano u Autenrieth kolorimetrijskoj tablici.

Kolorimetrični stol Autenrieth. Izvor: Vásquez A. Xanthoprotein reakcija. Španjolski klinički časopis. 1949. godine; 35 (5): 326-327. Dostupno na: Elsevier

Koristiti

Upotreba reakcije ksantoproteina dio je skupa biokemijskih testova koji pomažu u poznavanju kemijskog sastava neke nepoznate tvari. Ovaj test pridonosi kemijskoj analizi otkrivanje proteina koji u svojoj strukturi sadrže benzenske skupine.

Ova se reakcija istraživačima široko koristi u raznim studijama tvari koje nas zanimaju.

U tom smislu, Vásquez-Jorge i suradnici koristili su ovu i druge reakcije kako bi ispitali udio proteina u tekućini izvađenom iz mangrove ostrige (Crassostrea rhizophorae).

Isto tako, Rojas i suradnici (2009) koristili su niz testova, među kojima je reakcija ksantoproteina, kako bi analizirali glikokomropeptide u talogima sirutke rikote.

S druge strane, Volhardova je reakcija Becherovog ksantoproteina modificirala da se koristi u druge svrhe. U ovom slučaju, za otkrivanje fenolnih i indolnih tvari koje mogu porasti mnogo ranije (tjedana ili mjeseci) prije nego što se povećavaju razine uree i zaostalog dušika u krvi.

Ti toksični otpad nastaje iz crijevnog truljenja hrane.

Ove se tvari nakupljaju u krvi kada se ne eliminiraju pravilno, stoga pozitivan test ksantoproteina može predvidjeti rani početak pravilnog zatajenja bubrega ili stanje uremije.

Ovisno o intenzitetu boje, možete odrediti koliko je napredna. U ovom slučaju test je kvantitativan.

U zdravih ljudi ovaj test daje blago žutu boju, što odgovara normalnoj razini triptofana i tirozina koji mogu biti u krvi.

Dok je u bolesnika s bubrezima ksantoproteinska reakcija snažno pozitivna zbog prisutnosti sljedećih tvari: fenola, indola, pararerezola, aromatskih oksidacida, među ostalim.

Mjere predostrožnosti

Ovaj test moraju provesti obučeni profesionalci. Moraju se uzeti u obzir svi propisi o biološkoj sigurnosti jer su reagensi korozivne kiseline i baze.

Ako slučajno nekoliko kapi dušične kiseline padne na kožu ili na noktima, oni će požutjeti jer obje strukture sadrže bjelančevine. Osim toga, na koži i sluznici izaziva teške opekline.

Ako dođe do kontakta s kožom, protokol koji slijedi treba biti odmah ispiranje područja sapunom i vodom oko 20 minuta.

Ako ga prska u oči, treba ga oprati puno svježe vode, nastojeći držati oči otvorenima.

Reference

1. Wikipedija „Ksantoproteinska reakcija“, Slobodna enciklopedija. 2. rujna 2019., 17.49 UTC. 21 listopad 2019, 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. Fizikalno-kemijska karakteristika i sadržaj proteina u tekućim ekstraktima mangrove ostrige (Crassostrea rhizophorae). Rev Cubana de Química, 2014.; 26 (1): 66-74. Dostupno u Redalyc-u.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. Izolacija i performanse GMP taloženjem sirutke s triklorooctenom kiselinom. Dovoljni. (Maracaibo) 2009; 19 (3): 295-302. Dostupno na: ve.scielo.
4. Vásquez A. Xanthoprotein reakcija. Španjolski klinički časopis. 1949. godine; 35 (5): 326-327. Dostupno na: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate O. Reakcije Bechera i Andrewesa u mokraćnoj kirurgiji. Služba urologije španjolske bolnice. Argentinski časopis za urologiju 395-404