SREDNJI SIM: TEMELJ, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

Medij SIM je polučvrsti i diferencijal agar, posebno dizajniran za pomoć identificirati neke bakterije, naročito Enterobacteriaceae. Sastoji se od tripteina, peptona, željeznog sulfata, amonijevog sulfata, natrijevog tiosulfata i agara.

Ovaj medij omogućuje izvršenje testova: tri važna proizvodnju sumporovodika (H ₂ S), formiranje indola i pokretljivosti, stoga akronim SIM. Zbog velike korisnosti ne može biti odsutna u bakteriološkom laboratoriju.

A. Komercijalni SIM medij B. SIM H2S (-), Indole (-) i pokretnost (+) test i SIM H2S (+), Indole (-), pokretljivost (+) test. Izvor: A. Fotografiju snimio autor MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

Za razliku od drugih medija, mora biti polučvrsta da bi se neke pokretljivosti mogle uočiti. U tom smislu, ovaj test djeluje vrlo dobro za Enterobacteriaceae, ali ne i na ne-fermentirajućim gram-negativnim šipkama, gdje se preferiraju druge metode, poput viseće kapi.

SIM medij omogućuje razlikovanje određenih specifičnih svojstava koja karakteriziraju neke bakterije u odnosu na druge. Na primjer Escherichia coli odlikuje se H ₂ S (-) indol (+) i pokretljivosti (+), dok Proteus mirabilis H ₂ S (+) indol (-), pokretljivost (+).

osnova

To je kultura koja se smatra različitom, jer se njegovom uporabom razlikuju mikroorganizmi koji mogu proizvesti sumporovodik od onih koji to ne čine; također se ističu one koje tvore indol iz triptofana od onih koje to nemaju, te na kraju razlikuje pokretne bakterije od nepokretnih.

Izvor napajanja

Kao i svaki medij kulture, on ima elemente koji osiguravaju potrebne hranjive tvari kako bi se mogli razviti ne zahtjevni mikroorganizmi. Ti su elementi predstavljeni peptonima i tripteinom.

Razvoj mikroorganizma u mediju neophodan je za promatranje prisutnosti ili odsutnosti karakteristika koje ovaj medij procjenjuje.

Proizvodnja sumporovodika

Slovo S SIM akronim se odnosi na proizvodnju sumporovodika (H ₂ S). Bakterije sposobne formirati hidrogen sulfid preuzet će sumpor iz natrijevog tiosulfata.

Jednom H ₂ S -colourless za plin je formirana, reagira sa soli željeza prisutnog u mediju, tvore željezni sulfid, jasno su vidljivi (crni talog). Bakterije koje ne čine H ₂ S, ostavite medij izvorne boje (bež).

Prisutnost crnog precipitata može ometati interpretaciju pokretljivosti. Međutim, većina H ₂ S- proizvodnju Enterobacteriaceae se zna da su pozitivno pokretan, poput Salmonella, Proteus i Citrobacter. Nadalje, crni talog koji pokriva gotovo cijeli medij sugerira pozitivnu pokretljivost.

Indola formacija

Drugo slovo akronima SIM je „I“, što predstavlja formiranje indola.

U tom smislu triptein, osim što je izvor hranjivih tvari, ispunjava i drugu temeljnu funkciju. Ovaj pepton bogat je aminokiselinom koja se naziva triptofan, stoga može pokazati bakterije koje proizvode triptofanazu.

Ovaj enzim odgovoran je za cijepanje aminokiseline triptofan s posljedičnim stvaranjem indola (bezbojne tvari), piruične kiseline i amonijaka.

Zato je, da bi se pokazala ova reakcija, potrebno dodati otkriti tvar (Ehrlichov reagens ili Kovačev reagens). Ili reagira s indolom, tvoreći na površini agara tvar u obliku crvene fuksije. Ako se pojavi prsten fuksije, indolski test tumači se kao pozitivan.

Bakterije koje ne posjeduju ovaj enzim neće tvoriti prsten i to se tumači kao negativan indolov test.

Važno je naglasiti da bi indolni test trebao biti posljednji koji se tumači, jer nakon dodavanja reagensa medij postaje zamućen što otežava vizualizaciju pokretljivosti.

Pokretljivost

Na kraju slovo "M" riječi SIM znači pokretnost. Da bi se procijenila pokretljivost, ovaj medij je strateški polu-čvrst, jer je ovo svojstvo bitno da se može primijetiti postoji li ili ne kretanje bakterija. Bakterije koje posjeduju flagele su one koje daju ovaj pozitivan test.

Pozitivan test će biti vidljiv kada se opazi zamućenost, kako u početnom inokulumu, tako i oko njega. Dok se, nemutne bakterije razvijaju samo na putu početnog inokuluma.

priprema

Srednja SIM

Odvažite 30 g dehidriranog medija i otopite u litri destilirane vode. Smjesa se ostavi stajati 5 minuta, a zatim zagrijava do vrenja, često miješajući dok se potpuno ne otopi.

Smjesu rasporedite u epruvete s pamučnim poklopcima i autoklavite na 121 ° C tokom 15 minuta. Izvadite držač cijevi iz autoklava i ostavite ga da se očvrsne u okomitom položaju tako da medij bude u obliku bloka.

Radi konzerviranja čuva se u hladnjaku do upotrebe. Pripremljeni medij mora imati krajnji pH od 7,3 ± 0,2.

U trenutku inokulacije medija mora biti na sobnoj temperaturi. Srednja boja je bež.

Kovačev reagens

Izmjerite 150 ml amilnog ili izoamilnog ili butilnog alkohola. (Upotrijebite jednu od spomenute tri).

Otopite 10 g p-dimetilaminobenzaldehida. Potom polako dodajte 50 ml koncentrirane klorovodične kiseline.

Spremni reagens je bezbojan ili svijetložut. Treba ga čuvati u ambre boci i čuvati u hladnjaku. Ne koristite ako postane tamno smeđe boje; što ukazuje da je oštećena. Ovaj reagens je poželjan kada je u pitanju Enterobacteriaceae.

Erlichov reagens

Odmjerite 2 g p-dimetilaminobenzaldehida i otopite u 190 ml apsolutnog etilnog alkohola i lagano miješajte s 40 ml koncentrirane klorovodične kiseline. Na isti način čuvajte Kovačev reagens. Ehrlichov reagens se najviše koristi za ne-fermentirajuće i anaerobne bakterije.

Prijave

SIM medij visoko se koristi u bakteriološkim laboratorijima. Njegova je prednost što se u istoj epruveti mogu uočiti tri osnovne karakteristike kod identifikacije Enterobacteriaceae.

sije

Ispravan način sjetve ovog medija je upotreba igle, kojom se dio čiste kolonije koja se proučava uzima i okomito ubacuje u središte medija. Treba obaviti jedan ručak. Probijanje ne smije doprijeti do dna cijevi, ispravna stvar je prekrivati ​​samo dvije trećine dubine.

Ponavljanje inookuluma nije preporučljivo jer to može dovesti do pogrešnih tumačenja pozitivne pokretljivosti. Inokulirani medij se inkubira aerobno na 37 ° C tijekom 24 sata.

Nakon što je vrijeme sklopljen, primijećeno je da li ili ne postoji proizvodnja H ₂ S i pokretljivost čita. Konačno se otkriva indol, dodajući 3 do 4 kapi Ehrlichovog ili Kovačeva reagensa, lagano promiješajte i procijedite.

Izvor: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.

QA

Kao kontrola sterilnosti, jedna ili dvije epruvete inkubiraju se u peći na 37 ° C tijekom 24 sata bez inokulacije. Očekuje se da nakon tog vremena ne dođe do rasta ili promjene boje.

Kao kontrola kvalitete mogu se koristiti poznati certificirani sojevi, poput: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Očekivani rezultati su: Escherichia coli H ₂ S negativan, indol i pozitivna pokretljivosti, Enterobacter aerogenes samo pozitivne pokretljivost, Salmonella typhimurium H ₂ S i pozitivan pokretljivost, s negativnim indola. Proteus vulgaris pozitivan, dok su Klebsiella pneumoniae i Shigella negativni.

Ograničenja

-Neki sojevi Morganella morganii, između ostalih sojeva, mogu stvarati smeđe pigment u ovom mediju zbog proizvodnje melanina, to ne treba miješati s talogom željeznog sulfida. U neiskusne stručnjake ova situacija može generirati neistinit u tumačenju H ₂ S testu.

-Straktične aerobne bakterije rasti će samo na površini cijevi, što otežava tumačenje pokretljivosti.

Reference

1. BD Laboratoriji. BBL SIM Medium. 2008. Dostupno na: bd.com
2. Neogeni laboratoriji. SIM medij. Dostupno na: sigurnost hrane
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM medij. 2009. Dostupno na:
4. Brizuela-laboratorij. Srednja SIM. Dostupno na:.brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratories. Srednja SIM. 2015. Dostupno na: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.