MEDIO MIO: OSNIVANJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

MIO medij je biokemijski Test se koristi za pomoć u identifikaciji vrsta bakterija iz obitelji Enterobacteriaceae. Prilično je hranjiva i sastoji se od glukoze, ekstrakta kvasca, peptona, tripteina, L-ornitin hidroklorida, bromokresola ljubičaste boje i agara.

Značenje njenog akronima (MIO) opisuje svaki od parametara koji se mogu promatrati u ovom mediju; pokretljivost, indol i ornitin. Pokretljivost je sposobnost mikroorganizma da se kreće zbog prisutnosti flagela. Da bi se opažalo ovo svojstvo, konzistencija medija mora biti polučvrsta, tako da pripravak sadrži manje agarja.

Pregled interpretacije rezultata u MIO mediju. Izvor: Pripremio autor mag. Marielsa gil

Proizvodnja indola pokazuje prisutnost enzima triptofanaze koji djeluje na aminokiselinu triptofana, zbog čega je potrebno koristiti otkrivajući reagens kako bi proizvodnja indola bila vidljiva.

Napokon, ornitin određuje je li bakterija sposobna dekarboksilirati aminokiselinu, odnosno, ako ima enzim orinitin dekarboksilaza.

osnova

Pepton, ekstrakt kvasca i triptein

Ovi elementi doprinose prehrambenoj snazi ​​ovog medija. Oni služe kao izvor hranjivih tvari i esencijalnih aminokiselina za razvoj bakterija.

Uz to, triptein je izvor triptofana koji pokazuje prisutnost enzima triptofanaze koji razgrađuje triptofan reduktivnom deaminacijom, oslobađajući indola, piruične kiseline, amonijaka i energije.

Indole je bezbojan, pa se njegova prisutnost otkriva dodavanjem pet kapi Ehrlichova ili Kovacsova reagensa, obje s p-dimetilaminobenzaldehidom.

Aldehidna skupina ovog spoja reagira s indolom, stvarajući fuksio-crveni, prstenasti proizvod na površini agara.

Bilo koji trag boje treba smatrati pozitivnim testom. Dokaz treba pročitati odmah, jer s vremenom boja propada.

Nadalje, ovaj test treba otkriti nakon što su primijećeni rezultati pokretljivosti i dekarboksilacije ornitina.

Tumačenje

Pozitivan test: stvaranje fuksija crvenog prstena prilikom dodavanja kapi Kovacsova reagensa.

Negativni test: nema formiranja prstena.

Pokretljivost

Sposobnost kretanja bakterija bit će vidljiva ako se opazi zamućen medij ili ako se oko početne inokulacije proširi gusta linija rasta.

Negativni test pokretljivosti pokazat će se promatranjem tanke linije rasta, a sve oko njega bit će bez rasta.

Važno je da se pokretljivost očita prije otkrivanja indola, jer dodavanjem reagensa zamućuje cijeli medij.

U mobilnim, ali sporo rastućim bakterijama teško je demonstrirati njihovu pokretljivost ovim sredstvom. U ovom se slučaju preporučuje upotreba drugih testova ili metoda, kao što su srednja pokretljivost ili metoda na čekanju.

Glukoza

Glukoza je fermentirajući ugljikohidrat koji, osim što osigurava energiju, zakiseljuje okoliš, neophodan je uvjet da dođe do dekarboksilacije aminokiseline ornitin.

Fermentacija glukoze mora se uvijek odvijati polazeći od principa da sve bakterije koje pripadaju obitelji Enterobacteriaceae fermentiraju glukozu.

L-omitin

U slučaju da bakterije proizvode enzim ornitin dekarboksilaza, može djelovati nakon što je medij zakiseljen fermentacijom glukoze.

Enzim ornitin dekarboksilaza djeluje na karboksilnu skupinu aminokiseline stvarajući amin nazvan putresin koji opet alkalizira okoliš.

Ovaj test treba pročitati nakon inkubacije od 24 sata, jer ako pokušate pročitati prije nego što možete pogrešno protumačiti test s lažnim negativnim rezultatom.

Moramo imati na umu da je prva reakcija fermentacija glukoze, pa medij postaje žut u početnoj fazi (prvih 10 do 12 sati). Ako se naknadno dogodi dekarboksilacija ornitina, medij će postati ljubičast.

Važno je protumačiti test dekarboksilacije ornitina prije otkrivanja indola, jer dodavanje Kovacsovog reagensa mijenja boju medija.

Tumačenje

Negativni test: srednje obojena žuta ili sa žutom pozadinom.

Pozitivan test: srednje potpuno ljubičast.

PH indikator

U ovom se slučaju koristi bromokresol ljubičasta; onaj koji je zadužen za otkrivanje kad se u mediju promijeni pH. Nakon zakisanja, indikator postaje žut, a nakon alkalizacije postaje ljubičasti.

Sjeme i razvoj tehnike

Za sijanje MIO medija koristi se ravna petlja ili igla, a s njom se skuplja i dio kolonije koji se proučava.

U sredini MIO-a usred linije izrađuje se dubok proboj. Nije preporučljivo izvoditi dvostruku punkciju, jer može dati lažnu sliku pokretljivosti ako se proboji ne izvode na istom mjestu.

Inkubirajte 24 do 48 sati na 37 ° C u aerobiozi. Pogledajte rezultate ovim redoslijedom: pokretljivost, dekarboksilacija ornitina i konačno otkrijte indol.

Preporučljivo je aseptično ukloniti 2 ml medija, prebaciti ga u sterilnu epruvetu i tamo izvršiti test indola, tako da ako je negativan, ostatak originalne epruvete može se inkubirati daljnja 24 sata, da se indol ponovno otkrije.

Razvoj indola provodi se na sljedeći način: 3 do 5 kapi Kovacsova reagensa dodaju se u MIO medij i snažno miješaju. Promatra se pojavljuje li se prsten crvene fuksije ili ne.

priprema

MIO medij

Odmjerite 31 g MIO medija i otopite u jednoj litri destilirane vode.

Zagrijavajte dok se smjesa ne prokuha jednu minutu, često miješajući dok se agar potpuno ne otopi. Podijelite 4 ml medija u epruvete od 13/100 s pamučnim čepovima.

Sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 minuta. Skinite iz autoklava i ostavite da stoji ravno u stalak na način da se formira polučvrsti blok.

Čuvati u hladnjaku 2-8 ° C. Ostavite je da se zagrije prije sjetve soja bakterija.

Boja dehidriranog medija je bež, a boja pripremljenog medija blago opalescentno ljubičasta.

Konačni pH pripremljenog medija je 6,5 ± 0,2

Sredstvo postaje žuto kod kiselog pH i ljubičasto je kod alkalnog pH.

Kovacs reagens (Indole test programer)

Taj se reagens priprema na sljedeći način:

Izmjeri se 150 ml amilnog, izoamilnog ili butilnog alkohola (bilo kojeg od tri). U njemu je otopljeno 10 g p-dimetilaminobenzaldehida. Nakon toga polako se dodaje 50 ml koncentrirane klorovodične kiseline.

Pripremljeni reagens je bezbojan ili svijetložut. Treba ga čuvati u ambre boci i čuvati u hladnjaku. Tamno smeđa boja pokazuje njegovo propadanje.

Također se Kovacsov reagens može zamijeniti s Ehrlichovim reagensom. Potonje, što je osjetljivije, preferira otkrivanje indola u bakterijama koje ga stvaraju u malim količinama, poput nekih Gram negativnih štapića po Gramu i nekih anaeroba.

Koristiti

Ovaj je medij test koji nadopunjuje niz biokemijskih ispitivanja za identifikaciju bakterija iz porodice Enterobacteriaceae.

Podaci o dekarboksilaciji ornitina služe za razlikovanje Shigella sonnei, koja je testirana pozitivno, od Shigella boydii, Shigella flexneri i S. dysenterieae, koja su negativna.

Također razlikuje rod Klebsiella koji testira negativnost od roda Enterobacter, gdje se većina njegovih vrsta pozitivno testira.

Izvor: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.

QA

Svaki put kada se pripremi serija MIO medija, može se provesti kontrolni test. Za to se koriste poznati ili certificirani sojevi za promatranje ponašanja medija.

Sojevi koji se mogu upotrijebiti su Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes i Proteus mirabilis.

Očekivani rezultati su E. coli i M. morganii. Dan M: +, I: + i O: +.

Klebsiella pneumoniae sve je negativno (M: -, I: -, O:-). Proteus mirabilis i Enterobacter aerogeni daju M: + I: - i O: +.

Reference

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testovi za identifikaciju bakterija kliničkog značaja. 3. izd. Uredništvo Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015. Dostupno na: britanialab.com
5. BD Laboratoriji. BBL Mobility Indole ornitin (MIO) srednje. 2007. Dostupno na: bd.com
6. Valtek Laboratories. Srednja MIO pokretljivost, Indole, Ornitin. 2010. Dostupno na: andinamedica.com