- osnova
- gonjenje
- Histokemijske mrlje
- Širok periodične kiseline (PAS)
- Grocott
- Ziehl-Neelsen
- Gram i kineska tinta
- Orcein
- Masson-ov trihrom
- Završne misli
- Reference
Histokemijsko je koristan alat za proučavanje morfologije različitih bioloških tkiva (biljaka i životinja), zbog reakcije principu dijelova tkiva poput ugljikohidrata, masti i proteina, između ostalog, kemijska bojila.
Ovaj vrijedan alat omogućuje ne samo prepoznavanje sastava i strukture tkiva i stanica, već i različitih reakcija koje se u njima događaju. Isto tako, mogu se dokazati moguća oštećenja tkiva uzrokovana prisutnošću mikroorganizama ili drugim patologijama.
Histokemijske mrlje. Nil virus, Gram pozitivne i gram negativne bakterije (Gram), Histoplasma capsulatum (Grocott), Mycobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Izvor: Pixinio.com/Wikipedia.org/Nephron / CDC / Dr. George P. Kubica
Histokemija iz prošlih stoljeća dala je važne doprinose, poput demonstracije postojanja krvno-moždane barijere Paula Ehrlicha. To je bilo moguće, jer mozak pokusne životinje koju koristi Ehrlich nije bio obojen anilinom, što je osnovna boja.
To je dovelo do upotrebe različitih boja poput metilen plave boje i indofenola, kako bi se obojile različite vrste stanica. Ovaj je nalaz doveo do klasifikacije stanica u acidofilne, bazofilne i neutrofilne, prema njihovom specifičnom obojenju.
Najnovije studije primijenile su ovu tehniku kako bi pokazale prisutnost različitih spojeva, uključujući fenole, kao i ugljikohidrate i nestrukturne lipide u tkivima vrste Litsea glaucescens, poznatijoj kao lovor. Pronalazeći ih i u lišću i u šumi.
Isto tako, Colares i sur., 2016, histokemijskim tehnikama identificirali su biljku od ljekovitog interesa Tarenaya hassleriana. Kod ove vrste je evidentirana prisutnost škroba, mirosina, kao i fenolnih i lipofilnih spojeva.
osnova
Histokemija se temelji na bojenju staničnih struktura ili molekula prisutnih u tkivima, zahvaljujući njihovom afinitetu specifičnim bojama. Reakcija obojenja ovih struktura ili molekula u njihovom izvornom formatu se kasnije vizualizira u optičkom mikroskopu ili elektronskom mikroskopu.
Specifičnost bojenja je zbog prisutnosti grupa koje prihvaćaju ione prisutne u stanicama ili molekulama tkiva.
Konačno, cilj histokemijskih reakcija je pokazati ga bojenjem. Od najvećih bioloških struktura do najmanjih tkiva i stanica. To se može postići zahvaljujući činjenici da boje kemijski reagiraju s molekulama tkiva, stanica ili organela.
gonjenje
Histokemijska reakcija može uključivati korake prije izvođenja tehnike, poput fiksacije, ugradnje i rezanja tkiva. Stoga mora uzeti u obzir da u ovim koracima građevina koja se identificira može biti oštećena, dajući lažne negativne rezultate, čak i ako postoji.
Unatoč tome, važno je prethodno fiksiranje tkiva koje se pravilno izvodi jer sprječava autolizu ili uništavanje stanica. Za to se koriste kemijske reakcije s organskim otapalima poput: formaldehida ili glutaraldehida, među ostalim.
Uključivanje tkanine vrši se tako da održi čvrstoću prilikom rezanja i na taj način sprečava da se deformira. Konačno, rez je napravljen mikrotom za ispitivanje uzoraka optičkom mikroskopijom.
Osim toga, prije nego što nastavite s histokemijskim bojenjem, preporučuje se u svaku seriju ispitivanja ugraditi vanjske ili unutarnje pozitivne kontrole. Kao i upotreba specifičnih boja za strukture koje se proučavaju.
Histokemijske mrlje
Od pojave histokemijskih tehnika do danas, korišten je širok raspon mrlja, uključujući i one koje se najčešće koriste kao što su: Periodna kiselina Schiff (PAS), Grocott, Ziehl-Neelsen i Gram.
Isto tako, druge se boje rjeđe koriste, poput indijske tinte, orceina ili Masson-ove trihromatske mrlje.
Širok periodične kiseline (PAS)
Ovom bojom mogu se promatrati molekule visokog sadržaja ugljikohidrata, poput glikogena i mucina. Međutim, koristan je i za identifikaciju mikroorganizama poput gljivica i parazita. Pored određenih struktura (bazalna membrana) u koži i drugim tkivima.
Temelj ove bojenja je da boja oksidira ugljikove veze između dvije obližnje hidroksilne skupine. Ovo stvara oslobađanje aldehidne skupine, a to je otkriveno i Schiffov reagens koji odaje ljubičastu boju.
Schiffov reagens sastoji se od baznog fuksina, natrijevog metabisulfita i klorovodične kiseline, a ove komponente su odgovorne za ljubičastu boju kad su prisutne aldehidne skupine. Inače nastaje bezbojna kiselina.
Intenzitet obojenja ovisit će o količini hidroksilnih skupina prisutnih u monosaharidima. Na primjer, kod gljivica, podrumskih membrana, mucina i glikogena boja može prelaziti iz crvene u ljubičastu, dok jezgre oboje u plavu.
Grocott
To je jedna od mrlja s najvećom osjetljivošću u identifikaciji gljivica u tkivima uklopljenim parafinom. To omogućava identifikaciju različitih gljivičnih struktura: hifa, spore, endospora, među ostalim. Stoga se smatra rutinskom mrljom za dijagnozu mikoze.
Posebno se koristi u dijagnostici plućne mikoze, poput pneumocistoze i aspergiloze uzrokovane nekim gljivicama rodova Pneumocystis i Aspergillus.
Ova otopina sadrži srebrni nitrat i kromansku kiselinu, a potonji je fiksativ i obojilo. Obrazloženje je da ta kiselina stvara oksidaciju hidroksilnih skupina do aldehida mukopolijaharidima prisutnim u gljivičnim strukturama, na primjer, u staničnoj stijeni gljivica.
Konačno, srebro prisutno u otopini oksidira aldehidima, uzrokujući obojenje crne boje, što se naziva argentafinska reakcija. Također se mogu upotrijebiti i kontrastne boje poput svijetlozelene boje, pa će se tako gljivične strukture primijetiti u crnoj boji sa svijetlo zelenom pozadinom.
Ziehl-Neelsen
Bojenje se temelji na prisutnosti kiselinsko-alkoholne otpornosti, djelomično ili u potpunosti, u nekim mikroorganizmima kao što su rodovi Nocardia, Legionella i Mycobacterium.
Preporučuje se upotreba ove mrlje, jer stanična stijenka prethodno spomenutih mikroorganizama sadrži složene lipide koji sprečavaju prodor boja. Posebno u uzorcima iz dišnih putova.
U njemu se koriste jaka bojila poput karbolnog fuksina (osnovno bojilo) i primjenjuju se toplina kako bi mikroorganizam mogao zadržati bojanku i ne bi se onesposobio s kiselinama i alkoholima. Konačno, otopina metilen plave boje nanosi se na obojene strukture koje su postale obojene.
Prisutnost kiselinsko-alkoholne otpornosti uočena je na strukturama obojenim crvenim bojama, dok su strukture koje ne odolijevaju izblijedjenju obojene u plavo.
Gram i kineska tinta
Gram je vrlo korisna mrlja u dijagnostici, između ostalog, bakterijskih i gljivičnih infekcija. Ovim bojenjem omogućuje se razlikovanje gram-pozitivnih i gram-negativnih mikroorganizama, jasno pokazujući razlike koje postoje u sastavu stanične stijenke.
Dok je Indija tinta mrlja koja se koristi za kontrast struktura koje sadrže polisaharide (kapsulu). To je zato što se u okolini formira prsten, što je moguće kod Cryptococcus neoformans.
Orcein
Ovim obojenjem obojena su elastična vlakna i kromosomi različitih stanica što omogućava ocjenu procesa sazrijevanja potonjih. Iz tog razloga je vrlo korisno u citogenetskim studijama.
To se temelji na preuzimanju boje negativnim nabojem molekula, poput DNA, prisutnih u jezgrama širokog spektra stanica. Dakle, ove su obojene od plave do tamno ljubičaste boje.
Masson-ov trihrom
Ova mrlja koristi se za identificiranje nekih mikroorganizama ili materijala koji sadrže melaninske pigmente. To je slučaj s mikozama, uzrokovanim gnojnim gljivicama, feohifomikozama i eumicetomom crnog zrna.
Završne misli
Posljednjih godina došlo je do velikog napretka u stvaranju novih dijagnostičkih tehnika, gdje je uključena histokemija, ali povezana s drugim osnovama ili načelima. Ove tehnike imaju drugačiju svrhu, kao u slučaju imunohistokemije ili enzimohistokemije.
Reference
- Acuña U, Elguero J. Histoquímica. An. Chem. 2012; 108 (2): 114-118. Dostupno na: are.iqm.csic.es
- Mestanza R. Učestalost histokemijskih mrlja PAS, Grocott i Ziehl-Neelsen korištene za identifikaciju mikroorganizama, izvedene u Službi za patološku anatomiju Specijalne bolnice Eugenio Espejo 2015. godine. Središnje sveučilište Ekvadora, Quito; 2016. Dostupno na: dspace.uce.edu
- Tapia-Torres N, de la Paz-Pérez-Olvera C, Román-Guerrero A, Quintanar-Isaías A, García-Márquez E, Cruz-Sosa F. Histokemija, ukupni sadržaj fenola i antioksidativno djelovanje lista i drveta litsea glaucescens Kunth (Lauraceae). Šuma i šume. 2014; 20 (3): 125-137. Dostupno na: redalyc.org
- Colares, MN, Martínez-Alonso, S, Arambarri, AM. Anatomija i histokemija Tarenaya hassleriana (Cleomaceae), ljekovite vrste. Latinoamerički i karipski bilten o ljekovitim i aromatičnim biljkama 2016; 15 (3): 182-191. Dostupno na: redalyc.org
- Bonifaz A. Osnovna medicinska mikologija. 4. izdanje. Meksiko: McGraw-Hill Interamericana editores, SA de CV 2012.
- Silva Diego Filipe Bezerra, Santos Hellen Bandeira de Pontes, León Jorge Esquiche, Gomes Daliana Queiroga de Castro, Alves Pollianna Muniz, Nonaka Cassiano Francisco Weege. Kliničko patološka i imunohistokemijska analiza karcinoma pločastih ćelija vretenastih vretena: rijedak slučaj. Einstein (São Paulo) 2019; 17 (1): eRC4610. Dostupno od: scielo.br