KULTURA BAKTERIJA: VRSTE, KARAKTERISTIKE, METODE, ZAHTJEVI - BIOLOGIJA - 2026

Bakterijske kulture je rezultat sađenja tih mikroorganizama na hranidbenoj podlozi, kako bi za njih da se reproduciraju, što je rezultiralo pojavom bakterijskih kolonija na čvrstim medijima i naoblake u tekućem mediju.

Način sjetve vrlo je važan kako bi se mogao raspodijeliti inokulum na takav način da se prisutne bakterije rasprše i mogu razviti pravilno izolirane kolonije.

Autor je razne biljke zasadio u laboratoriju za bakteriologiju zgrade Biomedicinske i tehnološke znanosti Sveučilišta u Carabobou. Izvor: kompozicija fotografija koje je snimio autor MSc. Marielsa Gil.

Kolonije dobivene u krutom mediju kulture posljedica su umnožavanja mikroorganizama koji su zasijani. Svaka kolonija polazi od jedne bakterije koja se može eksponencijalno množiti da bi stvorila makroskopski vidljivu populaciju.

Isto se događa i u tekućim medijima kulture, ali u ovom slučaju rast bakterija primjećuje se zamućenošću.

Rast bakterija moguć je kada odabrani kulturni medij ispunjava prehrambene i pH uvjete potrebne za razvoj određene bakterije. Pored toga, potrebno je kontrolirati ostale varijable, poput temperature, vremena inkubacije, koncentracije kisika, CO ₂, između ostalog.

Nisu sve bakterijske populacije iste potrebe, iako neke mogu biti zajedničke gotovo svima, kao što je taj da taj medij sadrži peptone, istina je i da postoje zahtjevniji mikroorganizmi koji dodatno zahtijevaju i druge specifične tvari, nazvane čimbenici rasta.

Na primjer, može se spomenuti da je nekim hemofilima potrebno prisustvo faktora X (hemin) i faktora V (NAD) da bi rasli.

Vrste bakterijskih kultura

Kulture bakterija mogu biti polimikrobne, čiste ili mješovite.

Polimikrobne bakterijske kulture

Polimikrobne kulture su one koje potječu od sjetve uzorka dobivenog iz mjesta koje ima normalnu mikrobiotu u kojoj se također može pronaći određeni patogen.

Primjer: prilikom razvoja kulture brisa grla može se naći patogen poput Streptococcus pyogenes, ali biti će popraćen zajedničkom mikrobiotom u tom području.

U ovom je slučaju dobra strija kako bi se omogućio rast različitih vrsta bakterija koje su izolirane.

Kolonija koja ima svojstva kompatibilna sa sojem Streptococcus pyogenes pažljivo će se dodirnuti platinastom petljom, a zatim posaditi u medij za djevičansku kulturu i tako dobiti čistu kulturu tog mikroorganizma.

Iz ove čiste kulture mogu se provesti svi testovi potrebni za identifikaciju bakterija.

Čista bakterijska kultura

Da bi se mikroorganizam mogao učinkovito identificirati, treba raditi iz čiste kulture.

Čiste kulture mogu se dobiti kao u prethodnom primjeru presađivanjem izolirane kolonije polimikrobne kulture ili kad se posadi uzorak koji dolazi iz normalno sterilnog mjesta i postoji samo jedan patogen (rast jednog vrsta bakterija). Primjer: kada se CSF izvadi iz pacijenta s bakterijskim meningitisom.

Drugi način je da se resesedom iz stare čiste kulture dobije obnovljena čista kultura.

Mješovite bakterijske kulture

Te su kulture sastavljene od mješavine mikroorganizama kao što se događaju u prirodi. U nekim industrijskim postupcima upotreba miješanih kultura je prikladna.

Može se dobiti sjedinjenjem nekoliko čistih kultura, jer one omogućuju proučavanje međusobnih odnosa bakterija.

Korisni su, na primjer, u razgradnji ksenobiotika u industrijskim otpadnim vodama, jer djeluju kao biorazgradljivi agensi.

Karakteristike bakterijskih kultura

Morfološke karakteristike kolonija dobivenih u bakterijskim kulturama mogu biti vrlo različite.

Kolonije mogu biti vrlo male, umjerene ili velike i mogu se činiti suhima ili sluzavim, sjajnim ili dosadnim. Ovisno o teksturi, može varirati između glatke i grube i, ovisno o obliku, mogu biti kružne, ravne, konveksne.

Ovisno o boji, mogu biti: bezbojna, bijela, žuta, ružičasta, fuksija, crvena, narančasta, bež, sivkastozelena, zelenkasta, smeđa, crna ili s metalnim sjajem, ovisno o bakterijama i kulturi koja se koristi.

Granice kolonija mogu biti pravilne ili nepravilne. Drugi, s druge strane, mogu predstaviti jednoličan film koji je distribuiran u gotovo cijelom mediju koji se zove "rojenje". Ovo je karakteristično za Proteus sp.

Neke bakterijske kulture emitiraju mirise koji su vrlo karakteristični za uključene vrste. Na primjer, kultura Pseudomonas aeruginosa ima karakterističan voćni miris, dok rod Proteus ima karakteristično grozan miris.

Primjeri kolonija prema njihovoj veličini

Izuzetno mali: Mycoplasma pneumoniae, Francisella tularensis.

Male: Streptococcus sp, Enterococcus sp.

Umjereno: Obitelj Enterobacteriaceae

Veliki: Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa.

Primjer kolonija prema njihovom izgledu

Suho: Lactobacillus confusus.

Mukoidi: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa.

Briljantan: Klebsiella pneumoniae.

Opaque: Enterococcus faecalis, neki sojevi bakterije Neisseria gonorrhoeae.

Primjeri kolonija prema njihovoj teksturi

Glatke kolonije: Micrococcus luteus

Grube kolonije: Sarcina ventriculi na hranjivom agaru.

Primjer kolonija prema njihovom obliku

Kružnice: Listeria murrayi i Micrococcus luteus na hranjivom agaru.

Stan: Staphylococcus equorum na hranjivom agaru.

Konveksni: Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae.

Primjer kolonija prema njihovim granicama

Zaobljeni rub: Staphylococcus aureus, Escherichia coli.

Nepravilna granica: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa.

Uloženi rubovi: Bacillus sp.

Primjer kolonija prema njihovoj boji

Prozirni ili bezbojni: Shigella sp na XLD agaru.

Bijelo: Staphylococcus hominis na krvnom agaru.

Bež: Bacillus sphaericus i Lactobacillus confusus na hranjivom agaru.

Žuto: Staphylococcus aureus i Elizabethkingia meningoseptica na krvnom agaru, Pediococcus sp, Staphylococcus lentus na hranjivom agaru, Ružičasta: Escherichia coli na XLD agaru, Micrococcus roseus na hranjivom agaru.

Fuksija: Escherichia coli na agaru Mac Conkey.

Ljubičasta: Chromobacterium violaceum.

Crvenkasto: Serratia marcescens na sobnoj temperaturi na hranjivom agaru.

Narančasta: Kurthia zopfii na hranjivom agaru.

Sivkast: Sporosarcina ureae u agaru ekstrakta tla.

Zelenkasta: Pseudomonas aeruginosa na BHI agaru.

Smeđi: Enterococcus sp na žučnom esculinskom agaru.

Crna: Salmonella enteritidis na SS agaru.

S metalnim sjajem: Escherichia coli na Endovu agaru.

Metode bakterijske kulture

Fakultativna aerobna ili anaerobna bakterijska kultura

To je najčešće korištena metoda uzgoja. To je zbog činjenice da je na prvom mjestu većina bakterija patogenih za čovjeka aerobne ili fakultativne anaerobne; i drugo, mnogo je jeftiniji i lakši od anaerobnih kultura. Primjer: Mycoplasma pneumoniae i Escherichia coli.

Anaerobna bakterijska kultura

Ova vrsta kulture zahtijeva potpuno suzbijanje kisika. Medij za uzimanje anaerobnih bakterija općenito treba sadržavati reducirajuće tvari, poput: askorbinske kiseline, tioglikolata, cisteina ili sumpora kako bi se uklonili toksični učinci kisika koji se nalaze u zraku.

Neki sadrže pokazatelje poput resazurina koji je plave boje u prisutnosti kisika i bezbojan u anaerobiozi. Primjer: Clostridium tetani.

Kultura bakterija u mikroaerofiliji

Ploče za kulturu postavljaju se u mikroaerofilno napa s upaljenom svijećom, pokrivene. Svijeća troši kisik i gasi se. U tom stanju rastu neke bakterije, poput Streptococcus sp.

Materijali i zahtjevi

materijali

Materijali potrebni za obavljanje bakterijske kulture su: Petrijeve posude ili epruvete s podlogom za kulturu ili juha, platinasta petlja, uzorak, Bunsenov plamenik ili pećnica.

Uvjeti za obavljanje kulture bakterija

Kultura bakterija zahtijeva mnogo elemenata koje je potrebno uzeti u obzir, poput hranjivih tvari u mediju, pH, temperature, koncentracije kisika, CO2, vlage, među ostalim.

nutrijenti

Za bakterijske kulture potrebni su kulturi koji sadrže makroelemente i mikroelemente. Među makroelementima mogu se spomenuti organske tvari poput peptona, aminokiselina, ugljikohidrata kao izvora ugljika i dušika.

Među mikroelementi spadaju anorganske tvari ili elementi u tragovima mangan, cink, nikal, bor, klor, selen, silicij, kobalt, bakar.

Koncentracija vodikovih iona (pH)

Koncentracija vodikovih iona (H ⁺) i hidroksilnih iona (OH ^-) u mediju u kojem će se razvijati kultura je od vitalnog značaja, jer oni određuju pH.

PH koji se najčešće koristi je neutralan (pH = 7,0), no može postojati način gdje je kiseli ili alkalni pH prikladan, na primjer ako želite izolirati acidofilne ili alkalipfofilne bakterije.

Temperatura

Temperatura je vrlo važan faktor koji utječe na rast bakterijskih kultura. Bakterije mogu biti psihrofične (rastu na temperaturama <20 ° C, mezofilne (između 20 ° C i 42 ° C), termofilne (40 ° C do 70 ° C), hipertermofilne (70 ° C - 105 ° C).

Potreba kisika

Aerobni: rastu u prisutnosti kisika.

Mikroaerofilni: rastu u prisutnosti 5-10% CO _2.

Strogi anaerobi: rastu u nedostatku kisika.

Fakultativni anaerob: raste u prisutnosti kisika ili bez njega.

Aerotolerant: oni dobro rastu bez kisika i toleriraju malo kisika.

Kulturni mediji

Medij za kulturu su posebni prehrambeni pripravci koji se pripremaju u laboratoriju za dobivanje mikrobnog rasta ili kulture. Ti se mediji razlikuju u dosljednosti, sastavu i funkciji. Svaki će laboratorij pripremiti vrstu medija za kulturu koji odgovara njihovim potrebama.

Zbirka bakterijske kulture

Postoje ustanove ili organizacije koje su posvećene sakupljanju, karakterizaciji, održavanju i distribuciji bakterijskih sojeva kliničkog, okolišnog ili industrijskog značaja.

Ovi se sojevi koriste za istraživački rad i provođenje kontrole kvalitete na kulturnim medijima.

Primjer: sojevi American Type Culture Collection, venecuelanski centar za prikupljanje mikroorganizama (CVCM) i sojevi Nacionalnog instituta za higijenu, epidemiologiju i mikrobiologiju Kube (INHEM).

Reference

1. Benavides G, Hermida A. Izolacija i identifikacija autohtone bakterijske flore iz tla plodova Cruz Verdea i Guasce. (Cundinamarca). 2008. Bogota. Dostupno na: javeriana.edu.co/biblos
2. Hans S. Opća mikrobiologija. Omega izdanja. 1991. Barcelona, ​​Španjolska. Dostupno na: biolprocariotas.files
3. Weng Z, Junco R, Díaz R. Zbirka mikrobnih kultura: Bilješke o njihovom razvoju. Rev Cubana Hig Epidemiol, 2003.; 41 (1). Dostupno na: scielo.sld.cu/scielo.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.