-Test je dijagnostički alat za aktivne plućne tuberkuloze. To je laboratorijska tehnika koja omogućuje otkrivanje i mjerenje brzo kiselinskih bacila poput Mycobacterium tuberculosis. To je najčešće korištena metoda širom svijeta za postavljanje dijagnoze aktivne plućne tuberkuloze u zajednici i za procjenu prednosti liječenja.
Plućna tuberkuloza je zarazna bolest uzrokovana Mycobacterium tuberculosis koja inficira pluća, ali može zahvatiti i druge organe i sustave. U svijetu više od 6 milijuna ljudi pati od plućne tuberkuloze (TB).
Stanice M. tuberculosis u mrlje ispljuvanom (Izvor: Microrao / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0) putem Wikimedia Commons)
Mycobacterium tuberculosis i ostale ne-tuberkulozne vrste Mycobacterium posjeduju lipidni premaz na staničnoj stijenci bogatoj mikoličnom kiselinom koja je otporna na promjenu boje kiselog alkohola nakon bojenja s osnovnim bojama.
Stoga se koriste posebne metode bojenja kao što je Ziehl-Neelsen metoda. Ove jednostavne i jeftine metode omogućuju zidu da zadrži mrlju kada se uzorak ispere otopinom kiseline, a zid Mycobacterium postane crveni za razliku od ostalih bakterija koje postanu plave.
Da biste obavili mikroskopiju razmaza, potreban je uzorak sputuma, po mogućnosti uzeti ujutro kada ustanete. Uzorci tkiva ili uzorci tekućine u tijelu također se mogu koristiti.
Postupak
Uzorci koji će se obrađivati za mikroskopski pregled su uzorci ispljuvaka, uzorci tkiva ili uzorci tjelesnih tekućina. Uzorci tkiva mogu se izdvojiti bronhoskopijom ili biopsijom limfnih čvorova ili drugih tkiva.
Kako tuberkuloza može utjecati na bilo koji organ ili sustav, uzorci mogu biti vrlo raznoliki, uključujući: uzorke urina, cerebrospinalnu tekućinu, pleuralnu tekućinu, ascites tekućinu, krv, gnoj iz otvorenih šupljina, biopsije itd.
Uzorci ekstrapulmonalne lezije također se trebaju obrađivati za kulturu. Uzorci sputuma skupljaju se u jutarnjim satima nakon ustajanja.
Nekoliko uzoraka može se prikupiti zaredom ili uzastopno. Uzorci trebaju biti označeni u zatvorenim bocama širokih usta. Morali bi imati podatke o pacijentu, vrstu uzorka i datum uzimanja uzoraka.
Tehnički postupak
- Jednom kada se uzorak dobije, može se centrifugirati ili koncentrirati izravno. Početni postupak sastoji se od stavljanja nekoliko kapi uzorka i širenja na slajd.
- Uzorak je prekriven filtriranim fuksinom (otopina za bojenje).
- Zatim se zagrijava dok ne dobije oko tri emisije bjelkaste pare.
- Pričekajte pet minuta da se uzorak ohladi i isperite vodom.
- Prekriva se otopinom za izbjeljivanje (kiselim alkoholom) u trajanju od 2 minute.
- Opet se ispere vodom.
- Uzorak je prekriven metilen plavim i ostavljen je jednu minutu.
- Ispire se vodom.
- Ostavite da se osuši na zraku i nastavite s promatranjem pod mikroskopom.
Fotografija s mikroskopa (Slika Konstantina Kolosova na www.pixabay.com)
Ovaj postupak je brz, jednostavan, jeftin i omogućuje stanicama Mycobacterium tuberculosis da oboje crveno. Ova tehnika se naziva tehnikom bojenja Ziehl-Neelsen.
Mikroskopsko promatranje sastoji se od identificiranja prisutnosti kiselih brzih bacila i njihovog kvantifikacije po poljima.
Stanice Mycobacterium tuberculosis izgledaju kao crvene, zrnate, zakrivljene šipke na plavoj pozadini. Mogu biti izolirani, upareni ili grupirani. Opažanje treba obaviti u polju, a najmanje 100 polja mora se ispitati za svaki bris.
Rezultat se smatra pozitivnim kada u svakom polju ima više od 10 M. tuberkuloznih stanica. To odgovara 5000 do 100.000 bacila za svaki mililiter uzorka.
U tim se slučajevima smatra pozitivnim za Mycobacterium tuberculosis, jer netruberkulozni Mycobacterium ili druge kiseline otporne bakterije imaju različite oblike i općenito količina koja se opaža po polju manja je od 10.
Osoba koja ispituje uzorak mora imati iskustvo ili stručnost u otkrivanju i prepoznavanju tih mikroorganizama, jer u rezultatima mogu postojati lažni negativi ili lažni pozitivni rezultati.
Postoje i druge fluoroskopske tehnike koje su osjetljivije, ali mnogo skuplje. Jedna takva tehnika koristi bojenjem Auramine-O za dobivanje zelene fluorescencije ili bojenja Auramine O / Rodaminom B za promatranje žute / narančaste fluorescencije.
Pozitivni slučajevi se općenito provode na kulturi i antibiogramu kako bi se potvrdila dijagnoza i odabrao liječenje.
Čemu služi mikroskopija?
Tuberkuloza je zarazna bolest koja pogađa pluća i druge organe i organske sustave tijela. To je zarazna bolest koja stvara ozbiljne ozljede dišnog sustava koje, ako se ne liječe pravilno, mogu uzrokovati smrt pacijenta.
Tuberkuloza se prenosi gotovo isključivo kapljicama suspendiranim u zraku iz ekspektoracije pacijenta zaraženog plućnom tuberkulozom. Te male kapljice mogu ostati u zraku i imati sposobnost zaraziti osobu koja ih udiše.
M. tuberculosis stanice (Izvor: NIAID / CC BY (https://creativecommons.org/licenses/by/2.0) putem Wikimedia Commons)
Infekcija zahtijeva produljeno vrijeme kontakta sa zaraženim pacijentom koji neprestano pljuje bacile u slabo prozračenom okruženju. Ljudi s imunodeficijencijom imaju veću vjerojatnost da će se zaraziti.
HIV-pozitivni pacijenti imaju veću vjerojatnost da će razviti ozbiljne respiratorne infekcije, uključujući plućnu tuberkulozu od ostatka populacije. Otuda je važnost mikroskopije razmaza kao brze i jeftine dijagnostičke metode za tuberkulozu.
Mikroskopija brisom omogućuje postavljanje bakteriološke dijagnoze tuberkuloze, no pozitivan rezultat mora se potvrditi drugim studijama.
Studije koje potvrđuju dijagnozu tuberkuloze uključuju radiološka ispitivanja koja pokazuju karakteristične slike u gornjim udovima pluća, pozitivne testove tuberkulina i pozitivne kulture uzorka.
Razmaz negativan
Mikroskopija s negativnim brisom ne isključuje nužno dijagnozu tuberkuloze, jer posebno kada je uzorak ispljunut, uklanjanje bacila nije konstantno. Stoga su u tim slučajevima, kada se sumnja na dijagnozu, potrebni serijski uzorci.
Pozitivan razmaz
Mikroskopija pozitivnog razmaza ukazuje na tuberkulozu i mora se potvrditi drugim komplementarnim studijama. Kad god je rezultat pozitivan, treba napraviti kulturu i antibiogram.
Nakon što je tretman uspostavljen, kontinuirano smanjenje skale pozitivnosti mikroskopije razmaza do dobivanja negativnih rezultata omogućava kontrolu prednosti tretmana.
Reference
- Aziz, MA (2002). Vanjska procjena kvalitete za mikroskopiju razmaza AFB.
- Desikan, P. (2013). Mikroskopija razmaza sputuma kod tuberkuloze: je li još uvijek relevantna ?. Indijski časopis za medicinska istraživanja, 137 (3), 442.
- Fauci, AS, Kasper, DL, Hauser, SL, Jameson, JL, i Loscalzo, J. (2012). Harrisonovi principi interne medicine (Vol. 2012). DL Longo (ur.). New York: Mcgraw-Hill.
- Ngabonziza, JCS, Ssengooba, W., Mutua, F., Torrea, G., Dushime, A., Gasana, M.,… & Muvunyi, CM (2016). Dijagnostička učinkovitost mikroskopije razmaza i inkrementalni prinos Xperta u otkrivanju plućne tuberkuloze u Ruandi. Zarazne bolesti BMC, 16 (1), 660.
- Sardiñas, M., García, G., Rosarys, MM, Díaz, R., & Mederos, LM (2016). Važnost kontrole kvalitete baciloskopije u laboratorijima koji provode dijagnozu tuberkuloze. Čileanski časopis za infektologiju: Službeni organ čileanskog Društva za infektologiju, 33 (3), 282-286.
- Sequeira de Latini, dr. Med., I Barrera, L. (2008). Priručnik za bakteriološku dijagnozu tuberkuloze: standardi i tehnički vodič: dio 1 mikroskopija za brisanje. U Priručniku za bakteriološku dijagnozu tuberkuloze: standardi i tehnički vodič: dio 1 mikroskopske mrlje (str. 64-64).