VOGEL-JOHNSON AGAR: OBRAZLOŽENJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2025

Agar Vogel-Johnson je krutina medij selektivan i diferencijal kulture, posebno formulirani za izolaciju Staphylococcus aureus. Ovaj medij stvorili su Vogel i Johnson 1960. godine iz modifikacije telurit glicin agar koju su 1955. formulirali Zebovitz, Evans i Niven.

Modifikacija se sastojala u povećanju koncentracije manitola prisutnog u mediju i uključivanju pH pokazatelja. Trenutna formula se sastoji od tripteina, ekstrakta kvasca, manitola, dikalijevog fosfata, litijevog klorida, glicina, fenola crvenog, agarja, 1% -tne otopine kalijevog telurita i vode.

Izvor: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Treba napomenuti da postoje i drugi mediji koji su, poput Vogela-Johnsonovog agara, selektivni za izolaciju S. aureusa, poput slanog manitola i agenta Baird Parker. U tom bi se smislu moglo reći da je temelj Vogela-Johnsonovog agara mješavina između slanog manitovog agara i agara Baird Parker.

U prvoj se razlikuju kolonije S. aureus fermentacijom manitola i pretvaranjem pH pokazatelja u žuto. S druge strane, u drugoj je S. aureus karakterističan po redukciji telurita u telur i formiranju sive do crne kolonije. Oba su svojstva opažena u agaru Vogel-Johnson.

Ovaj je medij, poput njegovih kolegica, koristan za otkrivanje Staphylococcus aureus u uzorcima hrane, sanitarnoj kontroli industrijskih proizvoda i u kliničkim uzorcima.

osnova

Opskrba hranjivim tvarima

Medij Vogel-Johnson sadrži ekstrakt tripteina i kvasca; Obje tvari pružaju aminokiseline dugog lanca koje služe kao izvor ugljika i dušika potrebnih za rast bakterija. Bakterije sposobne za rast u ovom mediju uzimati će hranjive tvari iz tih tvari.

Selektivna snaga

Vogel-Johnson agar je sposoban inhibirati rast gram-negativnih bakterija, pa čak i nekih gram-pozitivnih bakterija, pogodujući razvoju stafilokoka pozitivnih na koagulaze. Inhibirajuće tvari su kalijev telurit, litijev klorid i glicin.

Diferencijalna snaga

Tvari koje čine ovaj diferencijalni medij su manitol i kalijev telurit. Manitol je ugljikohidrat, a kada se fermentiraju nastaju kiseline koje medij pretvaraju iz crvene u žutu, što se događa zahvaljujući prisutnosti pokazatelja pH crvenog fenola.

Dok bezbojni telurit, kad je sveden na slobodan metalni telur, poprimi tamno sivu do crnu boju.

Staphylococcus aureus fermentira manitol i reducira telurit u teluri. Iz tog razloga, tipične kolonije S. aureus u ovom mediju su sive ili crne okružene žutim medijem.

Bakterije koje rastu u ovom mediju i ne reduciraju telurit ili fermentirani manitol formirat će prozirne kolonije okružene sredstvom crvene boje, još intenzivnijim od izvorne boje, zbog alkalizacije medija upotrebom peptona.

S druge strane, bakterije koje smanjuju telurit, ali ne fermentiraju manitol, rast će kao sive ili crne kolonije okružene dubokim crvenim medijem.

Ako se medij pripravi bez dodatka kalij telurita, kolonije S. aureus razvile bi se kao žute kolonije, okružene žutim medijem, kao u slanom manitolskom agaru.

Osmotska ravnoteža i učvršćivač

Diko kalijev fosfat održava osmotsku ravnotežu medija i prilagođava pH neutralnosti 7,2. Dok agar daje čvrstu konzistenciju mediju za uzgoj.

priprema

Otopina kalijevog kalijuma 1% w / v

Ova otopina nije uključena u dehidrirani medij jer se ne može sterilizirati u autoklavu. Iz tog razloga se priprema odvojeno i dodaje se u već sterilizirani medij.

Neke komercijalne kuće prodaju gotovu otopinu kalij-telurita od 1% za upotrebu. Ako se želite pripremiti u laboratoriju, postupite na sljedeći način:

Odmjerite 1,0 g kalijevog telurita i izmjerite 100 ml destilirane vode. Otopite kalijev telurit u dijelu vode i zatim upotpunite količinu vode dok ne dostigne 100 ml. Otopina se sterilizira metodom filtracije.

Vogel-Johnson agar baza srednja

Odvažite 60 gr dehidriranog medija i otopite u 1 litri destilirane vode. Smjesa se zagrijava do vrenja kako bi se postiglo potpuno otapanje. Tijekom postupka otapanja medij se često miješa.

Sterilizirajte u autoklavu pod tlakom od 15 kilograma i 121 ° C tokom 15 minuta. Uklonite iz autoklava i ostavite da počiva dok medij ne dosegne temperaturu od približno 45 do 50 ° C. Dodajte 20 ml prethodno pripremljene 1% otopine kalijevog telurita.

Pomiješajte i sipajte u sterilne Petrijeve posude. Ostavite da se očvrsne i naručite na okrenutim držačima za tanjure da se kasnije čuvaju u hladnjaku do upotrebe.

Konačni pH pripremljenog medija treba biti 7,2 ± 0,2.

Prije sjetve uzorka, pričekajte da ploča dosegne sobnu temperaturu.

Boja pripremljenog medija je crvena.

Koristiti

Iako se može koristiti za izolaciju S. aureus u bilo kojoj vrsti uzoraka, uglavnom se koristi za mikrobiološku analizu farmaceutskih proizvoda, kozmetike i hrane.

Preporučuje se da inokula bude gusta. Sjetva se može obaviti gajenjem platinastom drškom ili površinski Drigalski lopaticom.

Ploče se inkubiraju na 35-37 ° C tokom 24 do 48 sati aerobioze.

QA

Sljedeći kontrolni sojevi se mogu koristiti za kontrolu kvalitete na mediju Vogel-Johnson:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ili Proteus mirabilis ATCC 43071.

Očekivani rezultat je sljedeći: za sojeve S. aureus zadovoljavajući rast crnih kolonija okruženih žutim medijem. Za S. epidermidis pravilan rast s prozirnim ili crnim kolonijama okruženim crvenim medijem.

Isto tako, očekuje se potpuna inhibicija E. coli, a djelomična ili potpuna inhibicija za Proteus mirabilis; ako raste, to će učiniti štedljivo i kolonije će biti crne okružene crvenom bojom.

Reference

1. BD Laboratoriji. VJ (Vogel i Johnson Agar). 2006. Dostupno na: bd.com
2. Britannia Laboratories. Vogel- Johnson Agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com
3. Britannia Laboratories. Kalijev telurit. 2015. Dostupno na: britania.com
4. HMI laboratorij. Vogel-Johnson Agar Medium. 2018. Dostupno na: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel-Johnson Agar Baza. Merck Mikrobiološki priručnik. 12. izdanje, str. 502-503. Dostupno na: Korisnici / Tim / Downloads
6. Suradnici Wikipedije, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia besplatna enciklopedija, dostupno na: wikipedia.org.
7. Venezuelanski standardni Covenin 1292-89. (1989). Hrana. Izolacija i nabrajanje Staphylococcus aureus. Dostupno na: sencamer.gob.ve