SVIJETLO ZELENI AGAR: OBRAZLOŽENJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

Sjajan zeleni agar je solidan medij kulture s visokim stupnjem selektivnosti. Koristi se isključivo za izolaciju sojeva roda Salmonella, no postoje i neke iznimke, poput tifusa i paratifija koji ne rastu na ovom mediju.

Potraga za rodom Salmonella česta je u uzorcima stolice, vode ili hrane. U tom smislu ovaj medij može biti vrlo koristan. Ovaj agar stvorili su 1925. Kristensen, Lester i Jurgens, a kasnije ga je modificirao Kauffmann.

Svijetlo zeleni agar. Kolonije fermentacije i fermentacije. Izvor: Izložba MJ Richardson / Nevidljivi svjetovi - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Licenca Creative Commons.

Sastoji se od pluripeptona iz peptičnog probavljanja životinjskog tkiva i probavnog sustava pankreasa kazeina, sadrži i ekstrakt kvasca, natrijev klorid, laktozu, saharozu, fenol crvenu, svijetlozelenu i agar-agar.

Karakterizira ga prilično nestoljubivo okruženje za većinu bakterija, koje pogoduje rastu salmonele, no neki su koliformi sposobni zaživjeti u njemu, razvijajući se slabo.

Važno je napomenuti da rod Shigella ne raste na ovom mediju, niti Salmonella typhimurium, niti Salmonella paratyphi. Stoga, ako želite izolirati te mikroorganizme, treba koristiti druge medije, kao što je XLD agar, među ostalim.

osnova

Svijetlo zeleni agar

Svaka od komponenti koje čine medij ispunjava specifičnu funkciju koja određuje karakteristike i svojstva agara.

Pluripeptoni i ekstrakt kvasca izvor su hranjivih tvari iz kojih mikroorganizmi uzimaju dušik i minerale potrebne za njihov razvoj. Laktoza i saharoza su izvor energije za mikroorganizme koji ih mogu fermentirati.

Svijetlo zelena je inhibicijska tvar koja sprečava rast gram-pozitivnih bakterija i velikog broja gram negativnih mikroorganizama.

Natrijev klorid daje osmotsku stabilnost mediju. Iako je fenol crveni pokazatelj pH, on postaje obojen kada otkriva stvaranje kiselina iz fermentacije ugljikohidrata.

Kolone kolonija laktoze i saharoze koje ne fermentiraju rastu na ovom mediju u ružičastoj ili prozirnoj bijeloj boji, na crvenoj pozadini. Na primjer, bakterije roda Salmonella.

Dok bakterije koje fermentiraju laktozu ili saharozu sposobne za rast na ovom mediju razvijaju se žuto-zelene ili žuto-zelene kolonije na zelenkasto-žutoj pozadini. Na primjer, Escherichia coli i Klebsiella pneumoniae.

Varijante jarko zelenog agarja (BGA)

Postoje i druge varijante jarko zelenog agarja; Novobiocin sjajna zelena glukoza (NBG) Agar i Novobiocin Briljantna zelena glicerol laktoza (NBGL) Agar.

Novobiocin svijetlo zeleni glukozni agar

Sadrži soj agar, triptikazu, feritni amonijev citrat, natrijev tiosulfat pentahidrat, fenol crvenu, glukozu, svijetlozelenu, novobiocin i destiliranu vodu.

Koristi se za izolaciju kolonija salmonele iz uzoraka stolice.

U ovom su slučaju svijetlozelena i novobiocin inhibitorne tvari koje sprečavaju rast gram-pozitivnih bakterija i nekih gram-mikroorganizama.

Natrijev tiosulfat izvor je sulfida, a željezni citrat izvor željeza, oba potrebna za otkrivanje proizvodnje sumporovodika stvaranjem crnog taloga sulfidnog taloga.

Glukoza je fermentirani ugljikohidrat, a fenol crveni je pokazatelj pH.

Na ovom mediju, kolonije salmonele razvijaju se velike s crnim središtem okruženim crvenkastim oreolom i potom jasnim vidljivim područjem. Neki sojevi Citrobacter freundii stvaraju kolonije identične onima Salmonella.

Novobiocin sjajan zeleni glicerol-laktoza-agar (NBGL)

Ovaj medij sadrži triptikaza sojin agar, feritni amonijev citrat, natrijev tiosulfat, laktozu, glicerol, svijetlo zelenu boju, novobiocin i destiliranu vodu.

Razlika između ovog medija i prethodnog je u tome što je glukoza supstituirana laktozom, a glicerol i fenol crveni se ne koriste.

Medij se koristi i za izoliranje vrsta salmonele, kolonije se razvijaju crno, zbog proizvodnje sumporovodika.

Samo kolonije koje ne proizvode kiselinu iz glicerola ili laktoza postići dovoljno H ₂ S proizvodnju zbog niske pH interferiraju s H ₂ S formacije. Ovo rezultira bezbojnih kolonijama za većinu vrsta Proteus i Citrobacter.

priprema

-Težimo 58 grama komercijalno dobivenog dehidriranog medija. Dodajte ga u litru redestilirane vode. Pomiješajte, ostavite da odstoji nekoliko minuta i stavite smjesu na izvor topline dok se potpuno ne otopi.

-Autoklavirajte na 121 ° C 15 minuta, ne prekoračite vrijeme sterilizacije.

-Ostavite da se odmori i poslužite dok je vruće u sterilnim Petrijevim posudama. Konačni pH trebao bi biti 6,9 ± 0,2.

-Ostavite da se očvrsne i pohranite u hladnjak do upotrebe. Prije sadnje ploče treba uzeti sobnu temperaturu.

- Sredstvo u prahu je zelene boje, a pripremljeni poprima narančasto-smeđu ili crvenkasto-zelenu boju, ovisno o pH i komercijalnoj tvrtki. Vrlo smeđa boja pokazuje da je agar bio pregrijan.

- Nakon što se agar ukruti, ne preporučuje se preradba, jer se medij pogoršava.

Upotrebe / aplikacije

Ovaj medij koristi se za pronalazak sojeva roda Salmonella iz uzoraka stolice i mliječne hrane, među ostalim.

Budući da je riječ o prilično neugodnoj okolini, preporučljivo je sijati obilnu inokulaciju ako se koristi izravni uzorak. U suprotnom, potrebno je unaprijed obogatiti i obogatiti uzorke prije sjetve u ovaj medij.

Kako se neki sojevi salmonele inhibiraju ili rastu s poteškoćama, poželjno je da se ovaj medij poprati drugim selektivnim agarima za salmonelu.

Svaka kolonija s tipičnim karakteristikama salmonele mora biti podvrgnuta biokemijskim ispitivanjima radi njihove definitivne identifikacije.

QA

Za testiranje dobrog učinka svijetlo zelenog agarskog medija, ATCC sojevi se mogu koristiti za promatranje njihovog razvoja.

Najčešći sojevi koji se koriste za kontrolu kvalitete su: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 12022.

Prva tri bi trebala dati ružičaste ili prozirne bijele kolonije na crvenoj pozadini. Salmonela s dobrim razvojem i Proteus s malim ili redovitim rastom.

Za Klebsiella i Escherichia očekuju se žuto-zelene kolonije sa žutom pozadinom, a u slučaju Shigella i Staphylococcusa ih treba inhibirati.

Dehidrirani medij mora se čuvati na sobnoj temperaturi, na suhom mjestu, jer je medij vrlo higroskopan.

Reference

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Sjajni zeleni agar. 2009
2. Britannia Laboratory. Svijetlo zeleni agar. 2015.
3. BD Laboratorij. BD Briljantni zeleni agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiološka dijagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Uredništvo Panamericana SA