TSI AGAR: OBRAZLOŽENJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

TSI agara ili trostruku šećer željezo agar je čvrsti medij koji služi kao jedan biokemijski za vođenje početnu identifikaciju gram negativnih bacila. Temelji se na prikazivanju fermentacije prisutnih šećera i proizvodnji sumporovodika i plina.

Svojim sastavom i osnovom vrlo je sličan Kliglerovom testu željeza, s tom razlikom što potonji sadrži samo glukozu i laktozu. Umjesto toga, kao što mu ime govori, trostruki šećerni agar sa šećerom sadrži tri fermentabilna ugljikohidrata: glukozu, laktozu i saharozu.

Slike TSI testa s različitim mikroorganizmima A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa. Izvor: Witmadrid, iz Wikimedia Commons

Osim toga, TSI medij sadrži četiri derivata proteina što ga čini vrlo hranljivim agarom: ekstrakt kvasca, ekstrakt mesa, pepton i proteozni pepton. Sadrži i željezni amonijev sulfat, natrijev tiosulfat, natrijev klorid, fenol crveni i agar.

Nemogućnost mikroorganizma da fermentira glukozu prisutnu u mediju odmah isključuje njegovu pripadnost obitelji Enterobacteriaceae. Stoga je ovaj test ključan za odlučivanje kojim identifikacijskim putem treba odrediti rod i vrstu.

Svaki laboratorij odlučuje hoće li raditi s TSI agarom ili s Kligler željeznim agarom.

osnova

Svaki od spojeva ispunjava funkciju unutar medija.

Natrijev klorid i agar

Natrijev klorid potreban je za održavanje osmotske ravnoteže medija. Dok agar daje čvrstu konzistenciju.

PH indikator (crveni fenol)

PH pripremljenog medija uravnotežuje se na 7,3, a pH indikator (fenol crveni) poživi žuti ispod 6,8. To znači da će male količine kiselina dobivenih fermentacijom šećera pretvoriti medij iz crveno-narančaste u žutu.

Ako se ne dogodi fermentacija, nastaće alkalinizacija medija upotrebom peptona, koji će se od crveno-narančaste pretvoriti u jaku crvenu.

Proteinski derivati ​​(ekstrakt kvasca, ekstrakt mesa, pepton i proteozni pepton)

Kada bakterije metaboliziraju proteine ​​prisutne u TSI agaru, nastaju amini koji alkaliziraju medij (uglavnom na razini poskoka), jer za reakciju je potreban kisik. Amini pretvaraju okvir u jarko crvenu boju.

Ali to će ovisiti o sposobnosti bakterija da fermentiraju ugljikohidrate ili ne.

Fermentacija ugljikohidrata (glukoza, laktoza i saharoza)

Proučavanje fermentacije šećera može dati nekoliko slika i svaka se interpretira različito. Ispitna interpretacija mikroorganizme dijeli u 3 kategorije: ne-fermenteri glukoze, ne-fermenteri laktoze i fermentori laktoze / saharoze.

Treba napomenuti da je količina glukoze u mediju ograničena, dok je koncentracija laktoze i saharoze 10 puta veća.

Bakterije porodice Enterobacteriaceae i drugi mikroorganizmi koji fermentiraju glukozu počet će fermentirati taj šećer jer je to najjednostavniji ugljikohidrat za energiju.

S druge strane, laktoza i saharoza su složeni ugljikohidrati koji se moraju razgraditi i pretvoriti u glukozu da bi mogli ući u ciklus Embden-Meyerhof.

- Mikroorganizmi koji ne fermentiraju glukozu

Kad inokulirani mikroorganizam ne može fermentirati glukozu, još manje će moći fermentirati ostale ugljikohidrate. Dakle, ovdje se ne stvaraju kiseline, već dolazi do stvaranja amina u nagibu upotrebom peptona.

U ovom se slučaju okvir pretvara u jaču crvenu boju, a dno epruvete može ostati nepromijenjeno ili se također alkalizira, ostavljajući cijelu cijev crvenu.

Tumačenje: K / K znači alkalno nagib / alkalno ili neutralno dno

Na slici na početku članka pogledajte sliku cijevi D.

Ovaj rezultat ukazuje da mikroorganizam ne pripada obitelji Enterobacteriaceae.

- Mikroorganizmi koji ne fermentiraju laktozu / saharozu

Ako bakterije mogu fermentirati glukozu, ali ne laktozu ili saharozu, dogodit će se sljedeće:

Bakterije će konzumirati svu prisutnu glukozu nakon otprilike 6 do 8 sati, sposobne zakiseliti i naklone i blok; to jest, agar će u potpunosti postati žut. Ali kada se glukoza potroši i laktoza i saharoza ne mogu koristiti, bakterije će započeti metabolizam proteina.

Za ovu reakciju potreban je kisik, stoga dolazi do razgradnje peptona na površini (nagib). Proizvedeni amini alkaliziraju oklope pretvarajući se u žuto u crveno. Ova reakcija je dokazana nakon 18 do 24 sata inkubacije.

Tumačenje: K / A znači alkalno nagib i kiselina.

Na slici na početku članka pogledajte sliku cijevi B.

-Mikroorganizmi koji fermentiraju laktozu / saharozu

Mikroorganizmi koji mogu fermentirati laktozu i saharozu mogu očito fermentirati glukozu. Nakon što se potroši minimalna količina glukoze u mediju, nastali piruvat počinje metabolizirati u tvorbu kiselina kroz aerobni Krebsov ciklus, a u razdoblju od 8 do 12 sati sav medij će biti žut.

Ako je bakterija sposobna razgraditi laktozu ili saharozu, kiseline će se i dalje proizvoditi, a nakon 18 do 24 sata cijela cijev - bevel and plug - nastavit će žutjeti.

Treba napomenuti da se upotreba glukoze vrši na dva načina: jedan aerobno na smetlištu epruvete, a drugi anaerobno na dnu epruvete.

Tumačenje: A / A znači kiselo nagib / kiselo dno. Može imati ili ne mora imati plin.

Na slici na početku članka pogledajte sliku cijevi A.

Proizvodnja plina

Neki mikroorganizmi mogu stvoriti plin tijekom fermentacije šećera. Plin se u cijevi očituje pritiskom koji vrši u agaru. Pritisak uzrokuje stvaranje mjehurića ili pomicanje agara. Ponekad stvaranje plina može slomiti medij.

Važno je da se prilikom sijanja medija za TSI probijanje provede čisto kroz središte agara sve dok ne dosegne dno. Ako se probijanje preusmjeri prema zidovima cijevi, može prouzrokovati lažne pozitivne rezultate u proizvodnji plina jer će pobjeći kroz pogrešno oblikovan kanal.

Za proizvodnju plina, kao i reakcije koje se događaju u nagibu agara, potreban je kisik, pa se preporučuje da se cijev pokrije pamučnim čepom, a ako se koristi bakelitna kapa, ne smije biti potpuno tijesna.

Proizvodnja plina navodi se kao pozitivno (+) ili negativno (-).

Obrasci formiranja plina. Izvor: Shema koju je napravio MSc. Marielsa Gil. Izvor slike: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe, putem Wikimedia Commons

Natrijev tiosulfat i željezni amonijev sulfat

Bakterije sposobne stvarati vodikov sulfid (bezbojni plin) preuzimaju sumpor iz natrijevog tiosulfata prisutnog u mediju. Jednom H ₂ S formira, reagira sa željeznim amonijev sulfat, željezni sulfid (proizvodi vidljivi crni talog).

H ₂ S proizvodnja se kao pozitivan (+) ili negativnih (-).

Na slici na početku članka pogledajte sliku cijevi C.

priprema

Masira se 62,5 g dehidriranog medija trostrukog šećera od željeza (TSI) i otopi se u jednoj litri destilirane vode.

Grijati dok se agar potpuno ne otopi. Prokuhajte minutu, često miješajući. Podijelite 4 ml medija u epruvete od 13/100 s pamučnim čepovima.

Sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 minuta. Uklonite iz autoklava i ostavite da se odmori pod kutom. Mora se paziti da i baza i podloga imaju isti razmak.

Čuvati u hladnjaku 2-8 ° C. Ostavite je da se zagrije prije sjetve soja bakterija.

Boja dehidriranog medija je svijetlo bež, a pripremljeni medij je crveno-narančasta.

Konačni pH pripremljenog medija je 7,3 ± 0,2.

Prijave

TSI test se široko koristi na razini mikrobiološkog laboratorija. Ovaj je test neophodan za vođenje vrste ispitivanja koja se mora primijeniti kako bi se identificirali rod i vrsta. Njegova dobra izvedba i interpretacija mogu uštedjeti materijal i rad.

Ako je rezultat TSI K / K, a test citokrom oksidaze je pozitivan, poznato je da se testovi trebaju upotrijebiti za prepoznavanje ne-fermentirajućih Gram negativnih šipki, kao što su Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, među ostalim rodovima. Ako je negativna na oksidazu, orijentirana je na rodove Acinetobacter, Stenotrophomonas itd.

S druge strane, ako se dobije TSI A / A ili K / A i test citokrom oksidaze je negativan, što se više nitrata reducira na nitrite, bit ćemo sigurni da je riječ o mikroorganizmu koji pripada obitelji Enterobacteriaceae. U ovom slučaju će se put identifikacije usredotočiti na specifične testove za ovu skupinu bakterija.

S druge strane, ako se dobije K / A ili A / A slika i test citokrom oksidaze je pozitivan, dodatna ispitivanja koja će se sastaviti usmjerit će se na identifikaciju fermentirajućih sojeva koji ne pripadaju obitelji Enterobacteriaceae, poput: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio i Pasteurella.

TSI sa vodikovim sulfidom, negativnim oksidazama, vodit će identifikaciju sljedećih rodova porodice Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella ili Salmonella.

TSI s malo ili umjereno sumporovodikom u alkalnom konični s alkalnim pozadinu i pozitivna oksidaza će voditi upotrebu testova za identifikaciju ne-fermentaciju H ₂ S- proizvodnju gram-negativna šipke, kao što je Shewanella putrefaciens.

Konačno, TSI se može koristiti za ispitivanje proizvodnje sumporovodika u Gram pozitivnim bacilima, posebno kada se sumnja na Erysipelothrix rhusiopathiae.

sije

TSI-medij mora se inokulirati čistim kolonijama, izoliranim u primarnim ili selektivnim kulturama. Ako je kolonija uzeta iz selektivnih medija koji su zasijani uzorcima miješane flore, treba voditi računa da se uzme samo s površine, jer održivi sojevi inhibirani u tom mediju mogu postojati u donjem dijelu kolonije.

Stoga se petlja nikada ne bi trebala hladiti na selektivnom mediju, a zatim se kolonija preuzme i inokulira s TSI medijem.

Sjetva će se obavljati ravnom petljom ili iglom. Provest će se probijanje, vodeći računa da se provuče kroz sredinu do dosega dna, a zatim sjetva završi inokulacijom površine u cik-cak obliku. Ne radite dvije proboje.

Inkubirajte na 37 ° C u aerobiozi 18-24 sata. Tumačite u ovom trenutku, ni prije ni poslije.

Ograničenja

TSI test treba očitati u roku od 18 do 24 sata od inkubacije. Čitanje prije tog vremena može dati lažno pozitivno stanje za fermentaciju A / A. U međuvremenu, čitanje nakon tog vremena može stvoriti lažno negativnu sliku ne-fermentera zbog potrošnje peptona koji alkaliziraju medij.

Reference

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testovi za identifikaciju bakterija kliničkog značaja. 3. izd. Uredništvo Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
4. "TSI agar." Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 10. srpnja 2018, 08:09 UTC. 10 veljače 2019, 03:33 Dostupno na: es.wikipedia.org
5. Britannia Laboratories. TSI Agar (trostruki željezni agar sa šećerom). 2015. Dostupno na: britanialab.com
6. BD Laboratoriji. Trostruki šećerni agar sa šećerom (TSI Agar). 2003. Dostupno na: bd.com