KRVNI AGAR: OBRAZLOŽENJE, UPOTREBA I PRIPREMA - BIOLOGIJA - 2026

Agar krv je čvrsti medij kulture obogaćena diferencijal ali selektivan. Koristi se za oporavak i rast velikog broja mikroorganizama iz kliničkih uzoraka ili za subkulture.

Klasični agar u krvi treba biti uključen za sejanje većine kliničkih uzoraka primljenih u laboratoriju; osim za uzorke stolice koji nisu korisni, osim ako nisu pripremljeni s određenim preinakama.

Ploča agar krvi

Ovaj medij kulture u osnovi se sastoji od obogaćenog baznog agara i 5% krvi. Baza agar može varirati ovisno o potrebama, ali ona će se uglavnom sastojati od peptona, aminokiselina, vitamina, ekstrakta mesa, natrijevog klorida, agara, između ostalog.

Što se tiče krvi, obično je potreban kontakt s vivarijem kako bi se dobila krv od životinja, poput ovca, zeca ili konja. Međutim, to nije uvijek moguće i ponekad se koristi ljudska krv.

Medij za agar u krvi može se pripremiti u laboratoriju ili se može kupiti u pripravnom obliku od strane predanih tvrtki. Priprema ovog medija jedna je od najosjetljivijih, svaka nepažnja u pripremi rezultirat će kontaminiranom serijom.

Zato se moraju poduzeti sve moguće mjere opreza i na kraju se mora provesti kontrola kvalitete inkubiranjem na 37 ° C 1 ploči za svakih 100 pripremljenih.

osnova

Staphylococcus aureus uzgaja se na krvnom agaru. Nathan Reading na Flickru Nathan R. na Twitteru, putem Wikimedia Commonsa Već je spomenuto da krvni agar ima svojstvo obogaćenog, diferencijalnog i neselektivnog medija. Niže je objašnjena osnova svakog od ovih svojstava.

Krvni agar je obogaćeni medij, jer sadrži 5-10% krvi na bazi agara kao svog glavnog aditiva. Oba spoja sadrže mnogo hranjivih sastojaka, a ovo svojstvo omogućava većini obradivih bakterija da rastu u njemu.

Taj se rast događa bez ograničenja; zbog toga je neselektivna. Međutim, ako se ovom mediju dodaju spojevi koji sprječavaju rast nekih mikroorganizama i favoriziraju rast drugih, on postaje selektivan. To je slučaj ako se dodaju određene vrste antibiotika ili antifungalnih lijekova.

Isto tako, krvni agar je diferencijalni medij, jer nam omogućuje razlikovanje 3 vrste bakterija: beta-hemolitičke, alfa-hemolitičke i gama-hemolitičke.

Beta-hemolitičari su oni koji imaju sposobnost potpunog liziranja ili razgradnje crvenih krvnih zrnaca, formirajući jasan halo oko kolonije, pa stvaraju ß ili ß-hemolizu, a mikroorganizmi se nazivaju ß-hemolitički.

Primjeri ß-hemolitičkih bakterija su Streptococcus pyogenes i Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolitički agensi su oni koji provode djelomičnu hemolizu, pri čemu se hemoglobin oksidira u methemoglobin, stvarajući zelenkastu obojenost oko kolonija. Ovaj fenomen je poznat kao α ili α-hemoliza i bakterije su klasificirane kao α - hemolitičke.

Primjeri α-hemolitičkih bakterija su Streptococcus pneumoniae i Streptococcus iz viridans skupine.

Konačno, postoje takozvane gama-hemolitičke ili ne-hemolitičke bakterije. Oni rastu na agaru bez stvaranja promjena na njemu, učinak poznat kao γ-hemoliza, a mikroorganizmi su γ-hemolitički.

Primjer γ-hemolitičkih bakterija: neki sojevi streptokoka iz skupine D (Streptococcus bovis i Enterococcus faecalis).

Prijave

Medij za kulturu agar u krvi jedan je od najčešće korištenih u mikrobiološkom laboratoriju.

Među mikroorganizmima koji mogu rasti u mediju krvi agar su: stroga aerobna, fakultativna, mikroaerofilna, anaerobna, gram-gram ili gram negativna bakterija, brzorastuće ili sporo rastuće bakterije.

Uzgajaju se i neke nutritivno zahtjevne ili prekomjerne bakterije, kao i gljivice i kvasci. Isto tako, koristan je za subkulturaciju ili reaktivaciju sojeva koji su metabolički vrlo slabi.

Međutim, izbor krvne grupe i baznog agara će varirati ovisno o vjerojatnom mikroorganizmu za koji se sumnja da se oporavlja i o načinu na koji će se ploča koristiti (kultura ili antibiogram).

Izbor krvne grupe

Krv može biti janjetina, zec, konj ili čovjek.

Najviše se preporučuje krv janjetine, s nekim iznimkama. Na primjer, za izoliranje vrsta Haemophilus, gdje je preporučena krv konjska ili zečja krv, jer janjeća krv sadrži enzime koji inhibiraju faktor V.

Najmanje se preporučuje čovjeku, no najviše se koristi, možda zato što ga je najlakše nabaviti.

Krv mora biti defibrinirana, dobivena bez ikakvih aditiva i od zdravih životinja. Za uporabu ljudske krvi mora se uzeti u obzir nekoliko čimbenika:

Ako krv dolazi od pojedinaca koji su imali bakterijske infekcije, imat će specifična antitijela. U tim uvjetima će rast nekih bakterija vjerojatno biti inhibiran.

Ako je dobiven iz banke krvi, sadrži citrat i određene bakterije možda neće rasti u njegovoj prisutnosti. S druge strane, ako krv dolazi od pacijenata koji uzimaju antibiotike, rast osjetljivih bakterija može se suzbiti.

A ako je krv od dijabetičara, višak glukoze ometa pravilan razvoj obrazaca hemolize.

Izbor tipa baznog agara

Bazni agar koji se koristi za pripremu krvnog agara može biti vrlo širok. Među njima su: hranjivi agar, agar za infuziju srca u mozgu, sojin agar triptilicaze, agar Müeller Hinton, agar Thayer Martin, agrum Columbia, agar Brucella, agar Campylobacter itd.

Upotrebljava se agar u krvi prema baznom mediju koji se koristi za njegovu pripremu

Hranjivi agar

Ova se baza najmanje koristi jer će uglavnom uzgajati nezahtjevne bakterije, poput enteričkih bacila, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp. Ne preporučuje se izoliranje streptokoka.

Infuzija mozga srca Agar (BHI)

Jedna je od najčešće korištenih kao baza za agar u krvi, jer ima potrebne hranjive tvari za rast većine bakterija, uključujući Streptococcus sp i ostale zahtjevne bakterije. Iako nije prikladno promatrati obrasce hemolize.

Janjeća krv se obično koristi s ovom bazom.

Također se mogu pripraviti i varijante krvnog agara, gdje se dodaju drugi spojevi kako bi se izolirali određeni mikroorganizmi. Na primjer, Agar za infuziju mozga sa srcem nadopunjen zečevom krvlju, cistinom i glukozom može se koristiti za izoliranje Francisella tularensis.

Dok je s cistin teluritom koristan za izolaciju Corynebacterium diphteriae. Može se koristiti ljudska ili janjeća krv.

S prvom beta-hemolizom gledat ćemo kao na uski halo, dok će s drugom halo biti znatno širi.

Isto tako, ova se baza, zajedno s bacitracinom, kukuruznim škrobom, konjskom krvlju i drugim dodacima za obogaćivanje (IsoVitaleX), koristi za izolaciju roda Haemophilus sp iz respiratornih uzoraka.

Također, ako se doda kombinacija antibiotika kloramfenikol - gentamicin ili penicilin - streptomicin s konjskom krvlju, idealan je za izolaciju zahtjevnih patogenih gljivica, čak i s većim prinosom od agar sa glukozom Sabouraud. Posebno je korisna u izolaciji Histoplasma capsulatum.

Trypticase sojin agar

Ova baza se najviše preporučuje za bolje promatranje uzorka hemolize i za provođenje dijagnostičkih testova poput optokvinskih svojti i bacitracina. To je klasični agar u krvi koji se koristi rutinski.

Uz ovu bazu možete pripremiti i specijalni agar u krvi za Corynebacterium diphteriae, s cistinskim teluritom i janjetinom .

Isto tako, kombinacija ovog agara sa janjećom krvlju, plus kanamicin-vankomicin, idealna je za rast anaeroba, posebno Bacteroides sp.

Müeller Hinton agar

Ova baza dopunjena krvlju koristi se za provođenje antibiograma snažnih mikroorganizama, poput Streptococcus sp.

Korisna je i za izolaciju bakterija poput Legionella pneumophila.

Thayer Martin Agar

Ovaj je medij idealan kao baza za krvni agar kada se sumnja na rod Neisseria, posebno Neisseria meningitidis, jer N. gonorrhoeae ne raste na krvnom agaru.

Također se koristi za ispitivanje osjetljivosti na Neisseria meningitidis.

Columbia agar

Ova baza izvrsna je za sjetvu uzoraka želučane biopsije za Helicobacter pylori.

Medij se priprema dodavanjem 7% janjeće krvi defibrinirane antibioticima (vankomicin, trimetoprim, amfotericin B i cefsulodin) da se ograniči rast ostalih vrsta bakterija koje mogu biti prisutne.

Ta ista baza dopunjena ljudskom ili janjećom krvlju, nalidiksičnom kiselinom i kolistinomom korisna je za izoliranje Gardnerella vaginalis. Idealan je i za procjenu antimikrobne osjetljivosti na antibiotike istog mikroorganizma.

Osim toga, koristi se za pripremu krvnog agara za uzgoj anaeroba, dodajući aminoglikozide i vankomicin.

Ova baza omogućuje pravilno promatranje obrazaca hemolize.

Brucella agar

Ovaj medij koji se koristi kao baza za agar u krvi zajedno s dodatkom vitamina K idealan je za uzgoj anaerobnih bakterija. U tom se slučaju preporučuje uporaba janjeće krvi.

Campylobacter agar

Campylobacter agar dopunjen s 5% ovčje krvi i 5 antibiotika (cefalotin, amfotericin B, trimetoprim, polimiksin B i vankomicin) medij je koji se koristi za izoliranje Campylobacter jejunija u uzorcima stolice.

priprema

Svaka trgovačka kuća donosi upute za pripremu litre medija za kulturu na stražnjoj strani spremnika. Odgovarajući proračuni mogu se napraviti za pripremu željene količine, ovisno o odabranom baznom agaru.

Izvagati i otopiti

Bazni agar je dehidriran (u prahu), pa se mora otopiti u destiliranoj vodi prilagođenoj pH 7,3.

Količina navedena u odabranom baznom agaru izvaže se i otopi u odgovarajućoj količini vode u tikvici, zatim se zagrijava na umjerenoj vatri i miješa rotacijskim pokretima dok se sav prah ne otopi.

Sterilizirati

Kad se otopi, sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 20 minuta.

Krvni agregat

Kad napustite autoklav, tikvica se ostavi da se ohladi dok se temperatura ne kreće između 40 i 50 ° C; To je temperatura koju ljudska koža podržava, a istovremeno se agar još nije očvrsnuo.

Da biste to učinili, bočicu dodirnete rukom, a ako je vrućina podnošljiva, idealna je temperatura dodati odgovarajuću količinu defibrinirane krvi (50 ml za svaku litru agara). Lagano promiješajte da se homogenizira.

Prolazak agregacije krvi je presudan, jer ako se provodi kad je medij jako vruć, crvena krvna zrnca će se razgraditi i medij se neće koristiti za promatranje hemolize.

Ako se doda previše hladno, skupit će se i površina medija neće biti glatka što će omogućiti pravilno bodovanje.

Izlijte u Petrijeve posude

Poslužite u sterilnim Petrijevim posudama odmah nakon homogenizacije krvi. Otprilike 20 ml ulije se u svaku Petrijevu posudu. Ovaj postupak se izvodi u poklopcu za laminarni protok ili u blizini plamenika.

Prilikom posluživanja agar krvi u Petrijevim posudama, na površini tanjura ne bi smjeli ostati mjehurići zraka. Ako se to dogodi, plamen Bunsenovog plamenika prolazi brzo preko ploče kako bi ih eliminirao.

Ploče se ostave za stvrdnjavanje i čuvaju u hladnjaku (2-8 ° C) obrnutog do upotrebe. Prije upotrebe ploča s agarima za krv potrebno ih je temperirati (pustiti ih da postignu sobnu temperaturu) kako bi se moglo saditi.

Pripremljeni tanjuri traju otprilike 1 tjedan.

Reference

1. Bayona M. Mikrobiološki uvjeti za kulturu Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinička mikrobiologija. Sveučilište u Kadizu, drugo izdanje. UCA Služba za publikacije.
3. "Krvni agar." Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 10 pro 2018, 14:55 UTC. 27.12.2018., 01:49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
5. CEDIVET Laboratorijski veterinarski dijagnostički centar. Gvatemala. Dostupno na: trensa.com.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA