Agar Salmonella Shigella također poznat kao SS agar je selektivni medij diferencijal umjereno, posebno namijenjen za izolaciju enteropatogenih bakterija roda vrste Salmonella i Shigella, i uzorci okoliša, kao što su klinički.
SS agar ima složen sastav; Sastoji se od ekstrakta mesa, peptona, laktoze, žučnih soli, natrijevog citrata, natrijevog tiosulfata, feritnog citrata, agarja, neutralne crvene, svijetlozelene i destilirane vode. S obzirom na veliku selektivnost, mogu se sijati uzorci s obilnom miješanom florom.
SS agar s kolonijama Salmonella sp. Izvor: Manurx27, iz Wikimedia Commons
U mikrobiološkim laboratorijima medij Salmonella-Shigella naširoko se koristi za ispitivanje prisutnosti Salmonella i Shigella u uzorcima stolice s proljevom, otpadnim vodama, pitkom vodom i hranom.
Ponekad je potrebno upotrijebiti pre-obogaćujuću juhu (laktozni juh) i bobicu za obogaćivanje (selenitni cistinski brod) za oporavak sojeva salmonele.
Ovi koraci potrebni su kada se sumnja na postojanje salmonele u vrlo maloj količini ili kada se soj može zloupotrijebiti u procesima tipičnim za industrijsku proizvodnju, uglavnom prerađene hrane. Također je preporučljivo obogatiti uzorke stolice od pacijenata koji su liječeni antibioticima.
Obogaćena juha se zatim može sijati u agar Salmonella-Shigella i drugim sličnim podlogama, poput ksiloznog agara, lizin-deoksiholata (XLD) i enteričkog Hektoen-ovog agara (HE).
osnova
Svaka komponenta medija za kulturu Salmonella-Shigella ima specifičnu funkciju, a mješavina u cjelini daje joj svojstva koja ga karakterišu.
Hranjiva snaga
Mesni ekstrakt i pepton (probavljeni kazeinom i životinjskim tkivom) daju potrebne hranjive tvari (nitrogene, ugljik i vitamine) za razvoj mikroorganizama koji mogu tolerirati ostale sastojke.
Dosljednost
Agar-agar je odgovoran za pružanje čvrste konzistencije mediju.
selektivan
Ovaj medij vrlo je selektivan jer sadrži žučne soli, natrijev citrat i svijetlo zelenu boju. Stoga inhibira rast svih Gram pozitivnih bakterija i većine Gram negativnih bacila, uključujući neke koliformne oblike.
Iako bakterije roda Salmonella i neki vrsta Shigella podržavaju ove spojeve.
Uglavnom, rod Salmonella vrlo je otporan na žučne soli, toliko da mogu živjeti u žučnom mjehuru nekih bolesnika koji nose stalno bakterije u svojim stolicama.
Diferencijal
Laktoza je fermentirajući ugljikohidrat koji pomaže u razlikovanju sojeva koji fermentiraju laktozu od onih koji ne fermentiraju. Ovo svojstvo je dokazano postojanjem pH pokazatelja, koji je u ovom mediju fenol crveni.
Sojevi fermentacije laktoze daju crvene kolonije, dok su sokovi koji ne fermentiraju bezbojni. Ova je karakteristika važna jer Salmonella i Shigella ne fermentiraju laktozu.
S druge strane, ovaj medij sadrži natrijev tiosulfat kao izvor sulfida, a feritni citrat kao izvor željeza. Oba su spoja sposobna razlikovati bakterije koje su sposobne stvarati vodikov sulfid. Oni reagiraju tako da formiraju vidljivi, netopivi talog crnog željeznog sulfida.
Ovo svojstvo nalazimo u nekim sojevima roda Salmonella. Njihove kolonije su obično bezbojne, s crnom točkicom u sredini. Ostatak Salmonele ne proizvode H 2 S i razvijati kao bezbojni kolonija.
S druge strane, kolonije roda Shigella su ravne bezbojne boje bez crnila.
priprema
Ovaj medij je vrlo jednostavan za pripremu.
Odmjerite 63 g dehidriranog komercijalnog medija i otopite u litri destilirane vode. Zagrijte otopinu i promiješajte. Smjesa može kuhati do nekoliko minuta.
Taj se medij ne smije autoklavirati. Nakon otapanja servira se izravno na jednostrukim ili dvostrukim sterilnim tanjurima.
Kad se stvrdnu, raspoređeni su na obrnuti način na trombocitima i čuvaju u hladnjaku (2-8 ° C) do upotrebe.
Medij nakon pripreme treba ostati na pH 7,2 ± 0,2 i narančasto-crvene boje.
Važno je da se ploče zagriju prije setve uzoraka. Izvorni uzorak može se sijati izravno, ispuštajući materijal na dio agara i potom stisnuti odatle.
U slučaju korištenja obogaćenih juha, procijedite jedan dio selenitne juhe i posijajte drigalskom lopaticom.
Inkubirajte 24 sata na 37 ° C u aerobiozi.
Imajte na umu da broj grama koji će se izvagati i konačni pH medija može varirati od jedne trgovačke kuće do druge. Srednja baza uvijek donosi naznake za njegovu pripremu.
Koristiti
Često se koristi u analizi kulture stolice i u mikrobiološkom istraživanju uzoraka otpadnih voda, pitke vode i hrane.
Često se pripremaju dvostruke ploče, s jedne strane se stavlja agar Salmonella-Shigella, a s druge XLD agar.
Ograničenja
-Neki sojevi Shigella ne rastu u ovom mediju. Stoga se ne preporučuje za primarnu izolaciju ovog roda.
-Nije svaka prozirna kolonija s crnim središtem ukazuje na salmonelu; Moraju se provesti biokemijska ispitivanja kako bi se utvrdila točna, jer su kolonije nekih proteusnih sojeva nerazdvojne od bakterija salmonele.
- Dehidrirani medij mora voditi računa o izlaganju okolišu jer je vrlo higroskopan. Stoga se mora čuvati u suhom i dobro zatvorenom okruženju. Otvoreno za vrlo kratka razdoblja.
-S vremenom se žučne soli u mediju mogu istaložiti, formirajući sliku sličnu prostirki u agaru, ali to ne utječe na rezultate.
-Neki sojevi Shigelle mogu polako fermentirati laktozu.
QA
Kako bi se dokazalo da medij ispravno djeluje, poželjno je posaditi poznate ili certificirane kontrolne sojeve i promatrati ispunjava li očekivane karakteristike.
Za to se mogu koristiti sojevi E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium ili Enterococcus faecalis.
Očekivani rezultati su:
Enterobacter i Klebsiella ------ velike kolonije i crveni ili ružičasti mukoidi.
Shigella flexneri ---------- prozirne ili bezbojne ravne kolonije.
Salmonella typhimurium ------ bezbojne kolonije s crnim centrima.
Enterococcus faecalis -------- totalna inhibicija.
Reference
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar salmonele-Shigella. 2009. Dostupno na: f-soria.es
- BD Laboratorij. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Dostupno na: bd.com
- Britannia Laboratories. Salmonela-Shigella Agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com
- Valtek dijagnostika. Salmonella-Shigella Agar (SS Agar). 2010. Dostupno na: andinamedica.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.