SABOURAUD AGAR: OSNIVANJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

Agar Sabouraud, također poznat i kao s Sabouraud dekstroznim agarom, je krutina medij, obogaćen posebno za izolaciju i razvoj gljivica, kao što su kvasci, plijesni i dermatofita.

Stoga ovom mediju ne može nedostajati mikrobiološki laboratorij koji bi ispitivao prisutnost patogenih ili oportunističkih gljivica, bilo iz kliničkih ili nekliničkih uzoraka. Isto tako, idealan je i za rast nitastih bakterija kao što su Streptomyces i Nocardias. Njegova je upotreba vrlo široka, jer se može koristiti u ljudskoj, životinjskoj, biljnoj i industrijskoj mikologiji.

A. Ne sjemenski agar Sabouraud. B. Sabouraud agar zasađen je kvascem. Izvor: Fotografije koje je snimio autor MSc. Marielsa gil

Ovaj medij stvorio je 1896. godine ugledni dermatolog Raimond Sabouraud, koji je postao svjetski poznati specijalist za poremećaje vlasišta, uglavnom uzrokovane dermatofitima.

Njegova je kreacija bila toliko važna da se koristi od tada i ostaje do danas, iako s nekim izmjenama.

Iako je posebna za gljivice, bakterije mogu rasti u ovom mediju, stoga je za uzorke sa miješanom florom potrebno uključiti antibiotike u njihovu pripremu da inhibiraju rast bakterijske flore koja može biti prisutna.

Izbor antibiotika mora se izvršiti pažljivo i uzimajući u obzir vrstu gljive koju treba oporaviti, jer je neke inhibiraju u prisutnosti određenih tvari.

osnova

Sabouraud dekstroza agar je medij koji je u svojoj originalnoj formulaciji slabo selektivan, zbog kiselog pH od 5,6 ± 0,2, međutim, bakterije se i dalje mogu razvijati, uglavnom u dugotrajnim inkubacijama.

Medij sadrži kazeinski pepton i probavni sustav gušterače životinjskog tkiva, koji osiguravaju izvor ugljika i dušika za rast mikroorganizama.

Sadrži i visoku koncentraciju glukoze, koja djeluje kao energent, potičući rast gljivica preko bakterija. Sve je to pomiješano s agar-agarom, komponentom koja mu daje pravu konzistenciju.

S druge strane, Sabouraud dekstrozni agar može biti selektivan ako se dodaju antibiotici.

Uz antibiotike, posebno je koristan u uzorcima rana, otvorenim čirima ili bilo kojem uzorku u kojem se sumnja na veliko bakterijsko zagađenje.

Najčešće se koriste kombinacije agusa Sabouraud dekstroze s antibioticima

-Saburaud agar s kloramfenikolom: idealan je za oporavak kvasca i nitastih gljivica.

- Sabouraud agar s gentamicinom i kloramfenikolom: gotovo sve nitaste gljivice i kvasci rastu u ovom mediju, a inhibira veliki broj bakterija, uključujući Enterobacteriaceae, Pseudomonas i Staphylococcus.

- Sabouraud agar s cikloheksimidom: posebno je koristan za uzorke s kože ili dišnih putova, sve dok sumnja na dimorfne gljivice.

Cikloheksimid treba koristiti oprezno; Iako se koristi za inhibiranje rasta nepatogenih ili okolišnih gljivica i kvasaca koji mogu biti prisutni kao kontaminanti u uzorku, on također inhibira rast nekih gljivica poput Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp i drugih oportunističkih gljiva.

- Sabouraud agar s kloramfenikolom plus cikloheksimidom: koristi se uglavnom za izoliranje dermatofita i dimorfnih gljivica. Nedostatak je što inhibira neke vrste oportunističkih gljiva kao što su Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes ili C. neoformans.

- Sabouraud agar s kloramfenikolom, streptomicinom, penicilinom G i cikloheksimidom: idealan je za uzorke izrazito kontaminirane bakterijama i saprofitnim gljivicama, ali ima nedostatak što inhibira rast Actinomyces i Nocardias, pored gore spomenutih oportunističkih gljivica.

priprema

Ako sastojke imate odvojeno, mogu se pripremiti na sljedeći način:

Sabouraud dekstrozni agar

Težiti:

- 40 gr dekstroze

- 10 g peptona

- 15 gr agar-agara

- Izmjerite 1000 ml destilirane vode

Svi sastojci su pomiješani, pH je podešen na 5,6. Otopine se otapaju ključanjem, 20 ml medija se distribuira u epruvete dimenzija 25 x 150 mm, bez oboda i poželjno s pamučnom kapom.

Cijevi s pamučnom kapom. Izvor: Fotografiju snimio autor MSc. Marielsa gil

Također se mogu koristiti i druge veličine cijevi, ovisno o dostupnosti.

Autoklaviraju se 10 minuta u atmosferi pritiska (121 ° C). Vrijeme autoklaviranja ne smije se prekoračiti. Kada napuštaju autoklav, cijevi se naginju uz pomoć oslonca dok se ne očvrsnu u kljunu flaute.

Drugi način je da se sastojci otope zagrijavanjem dok ne proključaju. Autoklavirajte 10 minuta u istoj bočici, a zatim rasporedite 20 ml u Petrijeve posude.

Ako imate medijum agruma Sabouraud dekstroze koji već sadrži sve sastojke, nastavite vagati količinu koju je navela trgovačka tvrtka za litru vode. Ostali koraci isti su kao i gore opisani.

Sabouraud dekstroza agar (modifikacija Emmonsa)

Težiti:

- 20 gr dekstroze

- 10 g peptona

- 17 gr agar-agara

- Izmjerite 1000 ml destilirane vode

Svi sastojci su pomiješani, pH je podešen na 6,9. Postupak na isti način kao u prethodnom slučaju.

Postoje komercijalne kuće koje nude medij sa svim sastojcima. U tom slučaju izvažite i pripremite kako je opisano na umetku.

Sabouraud dekstroza agar (modifikacija Emmonsa) s kloramfenikolom

Primjer otopine kloramfenikola

- Odmjerite 500 mg kloramfenikolne baze

- Izmjerite 100 ml 95% etanola

- Miješati

Medij agar sabouraud dekstroze (Emmons) priprema se kao što je ranije opisano i dodatno se u svaku litru medija doda 10 ml temeljne otopine kloramfenikola prije autoklaviranja.

Sabouraud Emmons Dekstroza Agar s cikloheksimidom

Osnovna otopina cikloheksimida

- Odvažite 5 gr cikloheksimida

- Izmjerite 100 ml acetona

- Miješati

Sredstvo agar sabouraud dekstroze (Emmons) priprema se kako je već opisano i dodatno se u svaku litru medija doda 10 ml temeljne otopine cikloheksimida prije autoklaviranja.

Sabouraud dekstroza agar (Emmons) s kloramfenikolom i cikloheksimidom

Medij agar sabouraud dekstroze (Emmons) priprema se kako je već opisano i dodatno se u svaku litru medija doda 10 ml temeljne otopine kloramfenikola i 10 ml osnovne otopine cikloheksimida prije autoklaviranja.

Ostali antibiotici koji se mogu dodati

20.000 do 60.000 jedinica penicilina po litri medija.

30 mg streptomicina po litri medija.

Oboje se mora inkorporirati nakon što je medij autoklaviran, lagano ohlađen (50-55 ° C).

0,04 g neomicina po litri medija.

0,04 g gentamicina po litri medija.

Posebna razmatranja

Radi sigurnosti, poželjno je sijati agar Sabouraud dekstroze u klinove u obliku klina (nagnute u kljun flaute), a ne u Petrijeve posude, kako bi se izbjeglo raspršivanje i udisanje spora.

Važno je da su cijevi za agar Sabouraud prekrivene pamukom, a ne vijčanim poklopcem, jer je dokazano da poluanaerobni uvjeti inhibiraju stvaranje spora kod nekih sojeva, na primjer Coccidioides immitis. Također, većina gljivica je aerobna.

U slučaju upotrebe vijčane kapice, ne zatvorite hermetički.

QA

Pripremljeni mediji moraju proći kontrolu kvalitete radi provjere ispravnog funkcioniranja. Za to se zasijavaju određeni kontrolni sojevi.

Za Sabouraud dekstrozni agar s kloramfenikolom mogu se koristiti ATCC sojevi Candida albicans, koji moraju imati izvrstan rast. Druga ploča inokulirana je sojevima Escherichia coli, koji moraju biti potpuno inhibirani.

Inkubira se i nenainokulirana ploča u kojoj ne bi trebali rasti mikroorganizmi.

Sojevi Trichophyton mentagrophytes mogu se upotrijebiti za agar Sabouraud dekstroze s kloramfenikolom i cikloheksimidom, a oni bi se trebali dobro razvijati. Druga ploča inokulirana je sojem Aspergillus flavus u kojem mora biti malo ili nikakvog rasta. Pored toga, neinokulirana ploča se inkubira kako bi se pokazala njegova sterilnost.

Za agar dekstroze Sabouraud s cikloheksimidom koriste se sojevi Candida albicans, Trichophyton rubrum ili Microsporum canis, koji moraju pokazati dobar rast.

Isto tako, uključen je i soj Aspergillus flavus koji pokazuje mali ili nikakav rast. Na kraju, inkubirajte neinokuliranu ploču za kontrolu sterilnosti.

Prijave

Primarna kultura

Klasični agar dekstroze Sabouraud sadrži 4 grama dekstroze i izvrstan je kao primarni izolacijski medij, jer pokazuje karakterističnu morfologiju svake gljive.

Također je izvrstan za demonstriranje proizvodnje pigmenata. Međutim, to nije najbolje sredstvo za promatranje spora.

Također se ne preporučuje za uzgoj Blastomyces dermatitidis, koji inhibira prisutna visoka koncentracija glukoze.

S druge strane, za uzgoj se moraju uzeti u obzir određena razmatranja.

Neke gljive najbolje rastu na sobnoj temperaturi, poput plijesni, druge uspješno rastu na 37 ° C, kao što su neki kvasci, a druge mogu rasti na obje temperature (dimorfne gljivice).

Iz tog razloga ponekad je potrebno koristiti nekoliko ploča sa agarima Sabouraud za isti uzorak, jer se dvostruko sjetva često obavlja za inkubaciju jedne ploče na sobnoj temperaturi, a druge na 37 ° C.

Na primjer, Sporothrix schenckii se sije u dvije ploče; jedan se inkubira na sobnoj temperaturi radi dobivanja faze kalupa, a drugi se inkubira na 37 ° C radi dobivanja faze kvasca, ali u potonju je potrebno dodati 5% krvi u medij.

U drugim slučajevima, kao što su uzorci micetoma, sjeme je dvije ploče sa agro Sabouraud, jedna s kloramfenikolom, a druga cikloheksimidom. Prvi će omogućiti rast uzročnika mikotoma gljivičnog podrijetla (Eumycetoma), a drugi uzročnici micetoma bakterijskog podrijetla, poput aktinomiceceta.

sporulacijom

Emmonsov modificirani sakouraud dekstroza Agar sadrži 2 grama dekstroze i ne koristi se samo za izolaciju, već i za sporulaciju i očuvanje gljivica.

U ovom mediju, sojevi Blastomyces dermatitidis mogu se oporaviti.

konzervacija

Za očuvanje kultura gljiva mogu se čuvati u hladnjaku (2-8 ° C). Vrijeme čuvanja može varirati od 2 do 8 tjedana. Nakon tog vremena moraju se subkultivirati kako bi se postupak ponovio.

Neke gljive najbolje se održavaju na sobnoj temperaturi, poput Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum i Microsporum audounii.

Održavanje soja može se produžiti kako bi se izbjegao pleomorfizam ako se dekstroza potpuno ukloni iz agara i ako se količina agara u mediju smanji, da se izbjegne suhoća.

mikrokulture

Za identifikaciju nekih vlaknastih gljivica, potrebno je provesti mikrokulture koristeći agar Sabouraud ili druga posebna sredstva za promatranje struktura seksualne i aseksualne reprodukcije.

U ljudskoj mikologiji

Koristi se uglavnom za dijagnozu gljivičnih bolesti, posebno onih koje utječu na kožu i njezine privitke (kosu i nokte).

Uzorci mogu biti sekreti, eksudati, koža, kosa, nokti, ispljuvak, CSF ili urin. Najčešći izolirani patogeni su dermatofiti, gljivice koje uzrokuju potkožne i sistemske mikoze.

Mikologija životinja

Životinje su često pogođene gljivičnim infekcijama, stoga je agar Sabouraud jednako koristan u mikologiji životinja kao i kod ljudi.

Na primjer, dermatofiti često mogu utjecati na životinje. Takav je slučaj s Microsporum canis var distortum, koji često zarazi pse, mačke, konje, svinje i majmune. Isto tako, Microsporum gypseum inficira pse, mačke i stoku.

Na ptice poput kokoši, pijetla i pilića utječu Microsporum gallinae.

Ostale gljivice, poput Zymonema farciminosum, također su uzročnici bolesti kod životinja, uglavnom konja, mula i magaraca, uzrokujući značajnu upalu u limfnim žilama.

Sporothrix schenkii i Histoplasma capsulatum utječu na domaće životinje i ljude.

Mikologija okoliša

Mnogo patogenih ili oportunističkih gljivica može se koncentrirati u bilo kojem trenutku u određenom okruženju, posebno u operacijskim salama i jedinicama intenzivne njege klinika i bolnica. Stoga je potrebno provesti kontrolu nad njima.

Ostali ranjivi prostori su knjižnice i stare građevine, na koje može utjecati koncentracija gljivica u okolišu.

U studijama zaštite okoliša, Sabouraud dekstrozni agar koristi se za izolaciju gljivica.

Industrijska mikologija

Sabouraud dekstroza agar ne može izostati za ispitivanje kontaminirajućih gljiva u proizvodnji kozmetike, hrane, pića, kože, tekstila.

Mikologija biljaka

Biljke također pate od bolesti uzrokovanih gljivicama, koje utječu na različite dijelove biljke, što može čak i okončati berbu, uzrokujući velike gubitke u poljoprivredi.

Reference

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mikrobiološka dijagnoza ispitivanja mikoze i antifungalna osjetljivost. Preporuke španjolskog društva zaraznih bolesti i kliničke mikrobiologije. Dostupno na: coesant-seimc.org
2. ValteK laboratorij. (2009). Sabouraud dekstrozni agar s cikloheksimidom. Dostupno na: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). Veterinarska mikologija. Nacionalno agrarno sveučilište. Nikaragva.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiološka dijagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. Opća mikologija. 1994. Drugo izdanje Središnjeg sveučilišta u Venezueli, izdanja biblioteka. Venezuela Caracas.