HRANJIVI AGAR: OBRAZLOŽENJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2025

Hranjivih agara je neselektivni medij i ne diferencijal čvrste kulture. U ovom mediju rastu sve vrste bakterija koje nisu zahtjevne s prehrambenog gledišta.

To je jednostavan medij i, unatoč nazivu, sadrži nižu hranjivu vrijednost u usporedbi s drugim sličnim medijima, poput Braga Heart Infusion Agar ili Trypticase Soy Agar.

Kolonije računaju na hranjivi agar

Njegova je korisnost u laboratoriju vrlo raznolika. Koristi se uglavnom za subkultiviranje vrsta, održavanje sojeva, brojanje kolonija, kao osnova za pripremu krvnog agara, među ostalim.

Isto tako, zbog svoje svijetlo bež boje, iznimno se može razlikovati proizvodnja pigmenata koje stvaraju neki bakterijski sojevi, poput zelenkastog pigmenta Pseudomonas aeruginosa, cigleno crvenog pigmenta koji proizvodi sobna temperatura Serratia marcescens, zlatno žutog pigmenta stafilokoka aureus, među ostalim.

Uz to, jedan je od najjeftinijih medija u porastu na tržištu.

osnova

Kao što je već spomenuto, to je vrlo jednostavan medij koji se oslanja na pružanje hranjivih sastojaka za rast bakterija bez ograničenja i bez složenih reakcija koje treba protumačiti.

Kako je medij proziran, idealan je za brojanje kolonija metodom dubinske setve.

Sastav

Sastoji se uglavnom od ekstrakta mesa ili ekstrakta kvasca, peptona ili želatinoznog gušterače, agar-agara, natrijevog klorida i destilirane vode.

Mesni ili kvasni ekstrakt i peptoni predstavljaju esencijalne izvore ugljika i minerala (dušik, fosfor i sumpor) koji će bakterije koristiti kao izvor energije i čimbenike rasta.

Isto tako, agar-agar je baza svih čvrstih kultura, koji je zamijenio želatinu, što je bio prvi bazni spoj koji je Robert Koch koristio kako bi dao čvrstu konzistenciju svom mediju.

Agar je polisaharid sastavljen od galaktoze, galaktomanana, agaroze i agaropektina. Postavlja se na 40 ° C i topi se blizu 100 ° C.

Natrijev klorid sa svoje strane daje osmolarnost potrebnu za razvoj bakterija.

Konačno, voda služi za hidrataciju i otapanje liofiliziranih spojeva. Treba koristiti destiliranu vodu prilagođenu neutralnom pH. Voda iz slavine ne smije se koristiti jer sadrži kalcij i magnezij koji mogu reagirati s fosfatima u mediju i tvoriti netopive soli.

priprema

Za jednu litru hranjivog agara treba izvagati 31 g dehidriranog medija. Stavite u tikvicu i otopite u litri destilirane vode. Nakon 5 minuta stajanja, zagrijavajte ga na izvoru topline i neprestano miješajte dok ne proključa 1 ili 2 minute.

Priprema medija za kulturu.

Tikvica se zatim stavi u autoklav i sterilizira na 121 ° C 20 minuta.

Sterilizacija u autoklavu

Na kraju se uklanja iz autoklava i poslužuje u sterilnim Petrijevim posudama, koristeći poklopac s laminarnim protokom ili Bunsenov plamenik.

Ako su Petrijeve posude za jednokratnu upotrebu (plastične), medij se mora raspodijeliti kada temperatura agarja ima približno 50 ° C kako se ne bi deformirali prekomjernom toplinom.

Ostavite da se stvrdne i pohranite na obrnuti držač za tanjure i stavite u hladnjak na 2-8 ° C do upotrebe.

Prije sadnje ploče se moraju temperirati. Ploče s hranjivim agarima se ne smiju koristiti ako su onečišćene ili dehidrirane.

PH pripremljenog medija mora se prilagoditi na 7,3 ± 0,2.

Prijave

To je najjednostavniji medij za kulturu koji se koristi u mikrobiološkom laboratoriju. Njegova je formulacija izvrsna za rast nezahtjevih bakterija.

Njegove glavne uporabe su objašnjene u nastavku:

Kao osnova za pripremu agar u krvi

Ovaj se medij ponekad koristi kao baza za pripremu agar u krvi, no to baza nije najčešće korištena.

Stimulirajte sporulaciju bakterija koje stvaraju spore

Ovaj medij za kulturu posebno je koristan za poticanje sporacije bakterija koje stvaraju spore, kao što je Bacillus sp.

Za to se soj roda Bacillus sije i inkubira tokom 24 sata na 37 ° C u aerobiozi. Jednom kada kolonije narastu, ploča se podvrgne temperaturnom stresu, tj. Temperatura pećnice se povećava na 44 ° C i ostavi još 24 sata ili se stavi u hladnjak na 24 sata.

Na kraju vremena nanose se mrlje kulture i boje se mrljama Grama ili mrlje od spore Shaeffer-Fulton. U njima će se primijetiti bacili s endosporama (spore unutar bacila) i egzospore (spore izvan bacila).

Održavanje naprezanja

Neki istraživački ili sveučilišni nastavni laboratoriji zahtijevaju održavanje održivih bakterija kliničkog značaja što je duže moguće kako bi se banka bakterija (bakterioteka) koristila za istraživački rad ili za pripremu nastavnih praksi, Studenti će naučiti manipulirati i identificirati te mikroorganizme.

U ove se svrhe mogu koristiti hranjivi agar, kao i agar za infuziju srca u mozgu. Agar se priprema, izlije u epruvete s bakelitnim poklopcem i nagne se na bazu na takav način da se agar očvrsne formirajući blok na dnu i kvržicu na površini (flautni kljun).

Svaka epruveta označena je imenom bakterija koje će biti posijane i datumom. Svaka od bakterija zasadit će se na gredu i inkubirati 24 sata. Nakon što kolonije narastu, epruvete se čuvaju na sobnoj temperaturi.

Bakterioteka se mora obnoviti od 1 do 3 mjeseca, kako bi se izbjegla kontaminacija i dehidracija medija, kao i smrt bakterija.

Samo se ne izbirljive bakterije mogu održavati na ovaj način.

Broj kolonija

Iako postoje specijalizirana sredstva za brojanje kolonija, kao što je standardni brojač agar, hranjivi agar može se upotrijebiti u tu svrhu bilo površinskim sjetvom drigalskim lopaticom ili dubinom. Iz tog razloga je vrlo korisna u mikrobiološkoj analizi hrane i vode.

Izvođenje dijagnostičkih testova

Kako se radi o mediju koji ne sadrži krv ili bilo koje druge dodatke, idealan je za uzimanje kolonija uzgojenih na ovom mediju za provođenje testa katalaze.

Isto tako, zbog njegove svijetle boje, naznačeno je da izvodi ispitivanja oksidaze izravno na površini zasađenog agarja, bez smetnji.

Oporavak mezofilnih aeroba iz rekreativnih slanih voda (Plaže)

Hranjivi agar pripremljen s 10% morske vode koristan je za procjenu mezofilnih aeroba u plažnim vodama.

Na taj se način može shvatiti stvarna razina onečišćenja koju vode tim mikroorganizmima, budući da se u ovoj vrsti uzoraka rezultati preklapaju kada se koriste kulturi načinjeni na konvencionalni način.

To su pokazali Cortez i sur. 2013. godine u istraživačkom radu.

To se može objasniti naglom promjenom bakterija koje prelaze iz hipersoliranog okoliša u okruženje s malo soli, pa mikroorganizmi ulaze u stanje letargije u kojoj su održivi, ​​ali nisu kultivirani.

Reference

1. "Hranjivi agar." Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 13 rujna 2016, 20:33 UTC 29. prosinca 2018., 21:04 en.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Utjecaj medija koji se pripremaju uz morsku vodu na zdravstvene pokazatelje u morskim vodama lječilišta u Chichiriviche, država Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M i Cardoso M. Mikrobiološka kvaliteta vode za doziranje za osemenjivanje, za svinje. Cient.Agro.Amaz. 2013 1 (2): 42-49.
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinička mikrobiologija. Sveučilište u Kadizu, drugo izdanje. UCA Služba za publikacije.