MACCONKEY AGAR: OBRAZLOŽENJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

MacConkey agar je čvrsti medij koji omogućuje isključivo izolaciju Gram-negativne bakterije. Iz tog razloga je selektivni medij i omogućuje razlikovanje između fermentacije laktoze i nefermentnih bacila, što ga čini diferenciranim medijem. To je jedan od najčešće korištenih kultura u laboratoriju za mikrobiologiju.

Ovaj se medij uglavnom koristi za izolaciju gram negativnih bacila iz porodice Enterobacteriaceae, uključujući oportunističke i enteropatogene vrste.

MacConkey agar zasijan je s dvije vrste bakterija. Kolone fermentacije s lijevom bočnom stranom, s desne strane ne-laktozne fermentacijske kolonije.

Može se koristiti i za izoliranje drugih enteričkih bacila koji žive u gastrointestinalnom traktu, ali ne pripadaju Enterobacteriaceae, poput Aeromonas sp, Plesiomonas sp, između ostalih.

Konačno, može izolirati druge gram-negativne bacile koji ne fermentiraju glukozu i koji se nalaze u okolišu, vodi ili tlu, ali to ponekad mogu biti oportunistički patogeni poput Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, između ostalih.

osnova

MacConkey agar

Temelj ovog medija može se objasniti opisom njegovih sastavnih dijelova, jer svaki od njih ima svrhu koja određuje njegovo svojstvo.

Žučne soli i kristalna ljubičica

U tom smislu, MacConkey agar ima složen sastav. Prije svega sadrži žučne soli i kristalnu ljubičicu.

Ovi su elementi odgovorni za inhibiranje rasta gram-pozitivnih bakterija i nekih gipkih gram-negativnih bacila. Zauzvrat, favorizira razvoj gram negativnih bacila na koje te tvari ne utječu. Stoga je selektivni medij.

Kažu da je lagano selektivan u usporedbi s drugim medijima koji također inhibiraju rast Gram pozitivnih bakterija i većine Gram negativnih bakterija.

Peptoni, polipektoni i laktoza

Sadrži tvari koje osiguravaju potrebne hranjive tvari mikroorganizmima koji se razvijaju u ovom okolišu, kao što su peptoni, polipektoni i laktoza.

Laktoza je ključna točka medija koji je različit medij, jer će mikroorganizmi koji imaju sposobnost fermentacije laktoze razviti jake ružičaste kolonije.

Neke bakterije mogu fermentirati laktozu polako ili slabo, razvijajući blijedo ružičaste kolonije i ostati laktozno pozitivne.

Oni koji ne fermentiraju laktozu koriste peptone kao izvor energije, stvarajući amonijak, alkalizirajući medij. Iz tog razloga kolonije koje nastaju su bezbojne ili prozirne.

PH indikator

Promjena boje se postiže kroz drugi bitan spoj koji ima MacConkey agar. Ovaj spoj je pokazatelj pH, koji je u ovom slučaju neutralno crvene boje.

Fermentacija laktoze stvara proizvodnju miješanih kiselina. Kiseli medij do pH ispod 6,8.

Zbog toga se pH indikator okreće prema tamno ružičastoj nijansi. Intenzitet boje može varirati ovisno o krajnjem pH.

Destilirana voda, natrijev klorid i agar

S druge strane, sadrži destiliranu vodu i natrijev klorid koji daju srednju hidrataciju i osmotsku ravnotežu. Konačno, medij sadrži agar, koji je baza koja daje konzistenciju čvrstog medija.

Pripremljeni MacConkey agar medij trebao bi imati krajnji pH podešen na 7,1 ± 0,2.

priprema

Za jednu litru MacConkey agara 50 g dehidriranog medija mora se izvagati, staviti u tikvicu i otopiti u jednoj litri destilirane vode. Nakon 10 minuta stajanja zagrijava se, neprestano miješajući do ključanja 1 minutu.

Tikvica se zatim stavi u autoklav i sterilizira na 121 ° C 20 minuta. Na kraju vremena uklanja se iz autoklava i ostavlja da se ohladi do postizanja temperature od 45 ° C, da bi se kasnije poslužilo u sterilnim Petrijevim posudama unutar poklopca za laminarni protok ili ispred Bunsenove plamenika.

Ostavite da se očvrsne i pohranite u obrnuti držač za tanjure i stavite u hladnjak na 2-8 ° C do upotrebe.

Da bi se dobio MacConkey agar koji inhibira efekt mučeništva proizveden u rodu Proteus, koristi se MacConkey agar s malo soli.

Upotreba uobičajenog MacConkey agara

MacConkey Agar uključen je u sve skupine medija uređenih za sjetvu kliničkih uzoraka primljenih u laboratoriju. Korisna je i u mikrobiologiji hrane i mikrobiologiji okoliša.

Raznolikost gram-negativnih šipki koje rastu u ovom mediju izražavaju fenotipske karakteristike koje pomažu u postavljanju pretpostavljene dijagnoze dotičnih vrsta. Na primjer, veličina, boja, konzistencija i miris kolonija, neke su od karakteristika koje mogu voditi.

U ovom mediju, vrste Escherichia coli, Klebsiella sp i Enterobacter sp stvaraju jake ružičaste kolonije, okružene zonom precipitirane žuči.

Dok se bakterije poput Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp i Hafnia sp mogu pojaviti bezbojne nakon 24 sata ili blijedo ružičaste za 24 -48 sati.

Isto tako rodovi Proteus, Edwadsiella, Salmonella i Shigella proizvode bezbojne ili prozirne kolonije.

Ostale varijante MacConkey agara

Postoje i druge inačice MacConkey Agara koje imaju određene svrhe. Oni su spomenuti u nastavku:

MacConkey agar sa sorbitom

Ovaj je medij dizajniran tako da razlikuje enteropatogeni soj (enterohemoragični Escherichia coli O157: H7) od ostatka sojeva Escherichia coli.

Ovaj medij zamjenjuje ugljikohidratnu laktozu za sorbitol. Enterohemoragični sojevi E. coli O157: H7 razlikuju se od ostalih po tome što ne fermentiraju sorbitol, pa se dobivaju prozirne kolonije, dok ostatak vrste E. coli fermentira sorbitol, a kolonije su jako ružičaste.

MacConkey agar bez kristalne ljubičice, niti soli

Ovaj agar se uvelike razlikuje od klasičnog MacConkey agara jer nema ljubičasti kristal i Gram pozitivne bakterije mogu rasti.

S druge strane, odsutnost soli inhibira pojavu rovanja na agaru proizvedenom nekim enteričkim bacilima, poput onih iz roda Proteus, i na taj način olakšava izolaciju svih prisutnih bakterija, uključujući i Gram pozitivne bakterije.

MacConkey agar s cefoperazonom

Ova varijanta MacConkey agara dizajnirana je za početnu izolaciju Laribacter hongkongensis, a kasnije je otkriveno da je korisna za izolaciju Arcobacter butzleri. Oboje su blago zakrivljene šipke po Gramu negativne otpornosti na cefoperazon.

Te su bakterije nedavno povezane s uzrokom gastroenteritisa i dijareje kod azijskih i europskih pojedinaca, pojavljuju se kao dva snažna patogena u nastajanju.

Antibiotik omogućava inhibiranje prateće flore gastrointestinalnog trakta, što pogoduje razvoju tih bakterija, sprječavajući ih da prođu nezapaženo, jer im je potrebno 72 sata da rastu.

MacConkey agar pripremljen s morskom vodom 10% v / v

Ova je varijanta korisna za procjenu bakterijskih sanitarnih pokazatelja fekalne kontaminacije, uključujući ukupne koliforme i fekalne koliforme u rekreacijskim slanim vodama (plažama i uvalama).

Cortez i suradnici iz 2013. pokazali su da medij pripremljen na ovaj način značajno povećava oporavak tih mikroorganizama u slanom okruženju, u usporedbi s primjenom MacConkey agara pripremljenog s destiliranom vodom.

To je zbog činjenice da modificirani medij potiče rast bakterija koje su fiziološki u stanju latencije "održive, ali nekulturne", pa ih nije moguće obnoviti u konvencionalnim medijima.

Reference

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT i sur. Upotreba cefoperazonskog agenta MacConkey za selektivnu izolaciju Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. MacConkey agar. Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 4. travnja 2018, 18:16 UTC 29. prosinca 2018., 15.22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Utjecaj medija koji se pripremaju uz morsku vodu na zdravstvene pokazatelje u morskim vodama lječilišta u Chichiriviche, država Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinička mikrobiologija. Sveučilište u Kadizu, drugo izdanje. UCA Služba za publikacije.