LIA (LIZIN ŽELJEZO) AGAR: TEMELJ, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

Agara LIA (Lizin Željezo) je biokemijski koristiti za identifikaciju bakterije iz obitelji Enterobacteriaceae. Ovaj medij stvorili su Edwards i Fife, temeljeni na Falkow formuli.

Izvorno je ovaj test bio juha koja sadrži peptone, ekstrakt kvasca, glukozu, L-lizin, bromokresol ljubičastu i destiliranu vodu. Edwards i Fife dodali su agar-agar, željezni amonijev citrat i natrijev tiosulfat.

Pozitivan i negativan test za lizin dekarboksilaciju. Izvor: Svojstva fotografija i dijagrama autora mag. Marielsa gil

Test se u osnovi sastoji od dokazivanja prisutnosti enzima lizin dekarboksilaze, koji je sposoban reagirati s karboksilnom skupinom aminokiseline L-lizin. Deaminacija aminokiseline može se dogoditi i zbog prisutnosti enzima lizin deaminaze.

Uz to, sastav medija pokazuje sposobnost nekih bakterijskih roda da proizvode hidrogen sulfid. Konačno, također je moguće promatrati stvaranje ili ne plina u mediju.

osnova

Peptoni i ekstrakt kvasca

Kao i većina medija kulture, Lizin željezni agar sadrži komponente koje daju izvor hranjivih tvari potrebnih za rast bakterija. Te su komponente predstavljene peptonima i ekstraktom kvasca.

Glukoza

Isto tako, ovaj agar sadrži glukozu kao fermentirani ugljikohidrat. Poznato je da sve bakterije iz obitelji Enterobacteriaceae fermentiraju glukozu.

Taj je korak presudan, jer će biti odgovoran za zakiseljavanje medija, što je ključni uvjet da enzim likarboksilaza - ako postoji - djeluje na njegov supstrat.

U nekim bakterijskim rodovima može se opaziti proizvodnja plina zbog fermentacije glukoze.

Plin se evidentira kada dolazi do pomicanja agara u epruveti, ostavljajući prazan prostor na dnu epruvete ili lomom medija na dva ili više dijelova.

L-lizin

Nakon što se lizin dekarboksilira, stvaraju se diamin (kadaverin) i ugljični dioksid.

Dekarboksilacija se događa u prisutnosti koenzim piridoksal fosfata. Ta je reakcija nepovratna.

PH indikator (bromokresol ljubičasta)

Sve pH vrijednosti koje se javljaju u mediju različitim reakcijama otkrivaju se ljubičastim bromokresolskim pokazateljem pH.

U tom smislu, kada dolazi do zakiseljavanja, medij postaje žut, a kada dolazi do alkalizacije, medij se vraća izvornoj ljubičastoj ili ljubičastoj boji.

Kada dolazi do deaminacije lizina zbog prisutnosti enzima lizin deaminaza, na površini se formira crvenkasta boja, tipična za rodove Proteus, Providencia i neke vrste Morganella.

To je zbog činjenice da se tijekom postupka deaminacije stvara alfa-keto-ugljična kiselina koja reagira s amonijevim citratom u prisutnosti kisika, što uzrokuje gore navedenu boju.

Željezni amonij citrat i natrijev tiosulfat

S druge strane, bakterije koje proizvode vodik sulfid se dokazuje prisutnost natrij tiosulfata (izvor sumpora) i feri amonij citrat, koji je razvijen od H ₂ S.

Bakterije koje su enzim tiosulfata reduktaze imaju sposobnost da djeluju tako da smanjuju natrij tiosulfata prisutan, tvori sulfita i sumporovodik (H ₂ S).

Potonji je bezbojni plin, ali kad reagira sa solju željeza stvara željezni metalni sulfid, koji je netopljiv spoj (vidljiv crni talog).

Međutim, sposobnost da se formira H ₂ S ovom mediju nije vrlo pouzdan, jer neki lizin dekarboksilaze negativne bakterije mogu proizvoditi H ₂ S neće formirati crni talog, kao kiselosti srednje smetnju. Zbog toga se preporučuje provjeriti s drugim medijima koji sadrže željezo.

Tumačenje testa

Dekarboksilacija lizina

Epruvete treba očitati nakon inkubacije od 24 sata, jer u protivnom postoji rizik od pogrešnog tumačenja reakcije, prijavljivanja lažnih negativa.

Mora se zapamtiti da će prva reakcija koja će se dogoditi biti fermentacija glukoze, stoga će sve epruvete nakon 10 do 12 sati požuteti.

Ako je na kraju vremena inkubacije (24 sata) uočena žuta pozadina s ljubičastom ili ljubičastom površinom, reakcija je negativna. Ljubičasta boja površine odgovara alkalizaciji medija upotrebom peptona.

Pozitivna reakcija je ona gdje su dno i površina cijevi potpuno ljubičaste boje, odnosno vraća se izvornoj boji.

Stoga tko određuje pozitivnost testa je baza ili pozadina medija. Ako sumnjate u boju, može se usporediti s ne cijepljenom cijevi LIA.

Deaminacija lizina

Epruveta koja pokazuje odmrzavanje lizina imat će crvenkastu boju boje boje i žutu (kiselinsku) pozadinu, ili cijelu epruvetu crvenkastu boju.

Ova se reakcija tumači kao negativna na dekarboksilaciju lizina, ali pozitivna na deaminaciju lizina.

Ova se reakcija definira i tumači na okviru.

Proizvodnja sumporovodika (H

Pozitivna reakcija je uočena pojavom crnog taloga u cijelom ili dijelu medija. Obično između ruba naklona i baze.

Ako se talog pojavi u cijevi, neće otkriti ostale reakcije koje se događaju u sredini.

Zapis rezultata

Kada se interpretira test, rezultati se bilježe kako slijedi:

Prvo konični očitava i zatim dno ili blok, zatim proizvodnju H ₂ S, i konačno proizvodnju plina.

Primjer: K / A + (-). To znači:

• K: Alkalni okvir (ljubičasta boja)
• O: Kisela pozadina (žuta), tj. Negativna reakcija dekarboksilacije i negativna deaminacija.
• +: Proizvodnja hidrogen sulfida
• (-): Bez plina.

priprema

Odvažite 35 g medija liziranog dehidriranog željeznog agara i otopite ga u jednoj litri destilirane vode.

Zagrijavajte dok se agar potpuno ne otopi, pa to ostavite da ključa minutu, često miješajući. Podijelite 4 ml medija u epruvete od 13/100 s pamučnim čepovima.

Sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 minuta. Uklonite iz autoklava i ostavite da stoji pod kutom, tako da postoji duboka baza i kratki kut.

Čuvati u hladnjaku 2-8 ° C. Ostavite je da se zagrije prije sjetve soja bakterija.

Boja dehidriranog medija je bež, a pripremljeni medij je crvenkasto ljubičasta.

Konačni pH pripremljenog medija je 6,7 ± 0,2

Sredstvo postaje žuto pri pH 5,2 ili manje, a ljubičasto je kod pH 6,5 i više.

Prijave

Ovaj se test, zajedno s drugim biokemijskim testovima, koristi za identifikaciju bacila iz porodice Enterobacteriaceae.

Medij se zasijava ravnom petljom ili iglom, rade se jedna ili dva proboja na dnu cijevi, a zatim se površina medija vrši cik-cak.

Inkubirajte 24 sata na 35-37 ° C u aerobiozi. Ako je potrebno, ostavi se da se inkubira narednih 24 sata.

Korišteno je uglavnom razlikovanje vrsta Citrobactera od laktoze od Salmonellas sp.

Izvor: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.

Reference

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testovi za identifikaciju bakterija kliničkog značaja. 3. izd. Uredništvo Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. Lizin željezni agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com
5. BD Laboratoriji. BBL lizing željezni agar klizi. 2007. Dostupno na: bd.com
6. Valtek Laboratories. Srednja LIA 2009. Dostupno na: andinamedica.com