ČOKOLADNI AGAR: OSNOVA, UPOTREBA I PRIPREMA - BIOLOGIJA - 2026

Čokolada agar je krutina medij kulture, obogaćen, non - selektivni i ne - diferencijal. Koristi se uglavnom za izolaciju mikroorganizama zahtjevnih s prehrambenog gledišta, iako u njemu mogu rasti bilo koje vrste bakterija.

Zbog toga se njegova korisnost povećava posebno kod sijanja uzoraka koji su obično sterilni, poput CSF-a i zglobne tekućine. Iako je također uključen u odabrani način za sjetvu polimikrobnih uzoraka, no u tim je slučajevima potrebno dodati antibiotike koji inhibiraju istodobnu floru.

Čokoladni agar s rastom bakterija

Ovaj medij ima karakterističnu smeđu boju vrlo sličnu čokoladi, otuda i njegovo ime. Preparat je vrlo sličan onome iz krvnog agara, samo što se u tom slučaju krv mora zagrijati kako bi se crvene krvne stanice razgradile.

Njegova je priprema, poput krvnog agara, vrlo osjetljiva, jer se lako zagađuje. Iz tog razloga, mnogi laboratoriji radije nabavljaju ovaj medij koji su već pripremile komercijalne tvrtke, a koji jamče njegovu kvalitetu.

osnova

Ovaj medij sastoji se od agarne baze bogate hranjivim tvarima i zagrijane krvi. Hemoliza crvenih krvnih stanica osigurava faktor X (hemin) i faktor V (NAD), neophodne za rast nekih mikroorganizama, poput roda Haemophilus. Vrlo je korisna i za izolaciju bakterije Neisserias sp.

Kao i krvni agar, različiti mediji mogu se koristiti kao bazni agar ovisno o potrebi. Među korištenim medijima su infuzija srca u mozgu i sojin agar triptiksaze, iako su najviše preporučeni Columbia agar, Müeller Hinton, GC agar i Thayer Martin agar.

Neke inačice čokoladnog agara uključuju komercijalno dostupan obogaćeni dodatak nazvan Isovitalex ili Polivitex.

Ovi dodaci sadrže vitamin B ₁₂, L-glutamin, adenin, gvanin hidroklorid, p-aminobenzojevu kiselinu, nikotinamid adenin dinukleotid (NAD), tiamin pirofosfat, željezni nitrat, tiamin hidrohlorid, cistein hidrohlorid, L-cistin i glukozu.

Važno je napomenuti da je čokoladni agar obogaćeniji od krvnog agara, ali ne dopušta promatranje obrazaca hemolize.

Prijave

Izvor: pixnio.com. Autor:

Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, doktor znanosti, Audra Marsh, USCDCP

Čokoladni agar pripremljen s agrumom Columbia

Ovaj medij sadrži probavu pankreasa kazeina i srca, peptičnu probavu mesa, natrijev klorid, agar, ekstrakt kvasca i kukuruzni škrob. Također je bogata vitaminima, mineralima i esencijalnim aminokiselinama.

Ova zagrijana krvna baza idealna je za izolaciju bakterija iz roda Neisseria. S druge strane, ako se dodatak dodatku Brucella dodatno doda u mediju, spomenuti mikroorganizam se može izolirati. Rezultati se poboljšavaju primjenom konjske krvi.

Čokoladni agar pripremljen s GC baziranim agarima (za gonokoke)

Ovaj medij sadrži peptone, kukuruzni škrob, jednoosne i dvomasne pufere, natrijev klorid i agar.

Većina komercijalno pripremljenih čokoladnih agar prezentacija dolazi s ovom bazom i ne sadrže zagrijanu krv, već sintetičku smjesu hemina i kemijski dodatak faktora rasta, vitamina, minerala, aminokiselina, faktora V i glukoze.

Čokoladni agar pripremljen s Müeller Hinton agarom

Koristi se za ispitivanje antimikrobne osjetljivosti osjetljivih mikroorganizama, poput Streptococcus pneumoniae, pomoću 5% zagrijane ovčje krvi.

Koristi se i za primarnu izolaciju Neisserias i Haemophilus, ali u posebnom slučaju izolacije Haemophilusa preferira se upotreba konjske krvi, jer je bogat izvor faktora X i V.

S druge strane, ako uzorak za sjetvu potječe iz nesterilnog područja, preporučuje se dodavanje antibiotika kako bi se inhibirala normalna flora područja.

Primjer za respiratorne uzorke u kojima se sumnja na prisutnost bakterija roda Haemophilus, bacitracin se koristi da inhibira rast stafilokoka, mikrokoka, streptokoka i saprofitskih Neisserija.

U slučaju uzoraka genitalnog šankea, za koje se sumnja da je hemofilus ducreyi, uspješno je korišten čokoladni agar pripremljen na sljedeći način: Müeller - Hinton agar s 5% čokoladiranom konjskom krvlju, 1% obogaćivanja Isovitalexom i 3 µg / ml vankomicina.

Čokoladni agar pripremljen s Thaerom Martin agar

Ovaj je medij poseban za izolaciju bakterije Neisseria gonorrhoeae. Mora sadržavati antibiotike da inhibira prateću floru. Koristi se janjeća krv.

priprema

Trebali biste vidjeti indikacije za pripremu baznog agara koji se koristi. Nalaze se na stražnjoj strani spremnika dehidriranog medija. Oni uglavnom opisuju koliko morate težiti da biste pripremili litru medija za kulturu.

Točna potrebna količina može se pripremiti u laboratoriju, može biti veća ili manja od litre.

izračuni

Pravilo tri koristi se za izračunavanje koliko vagati za pripremu željenog volumena. Primjer:

Ako je za litru potrebno vagati 40 gr, a laboratorij treba 800 ml, kaže se:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

Formula će biti sljedeća:

X = 32 gr (količina koja se izvaže za 800 ml).

Izvagati i otopiti

Potrebna količina se izvaga i stavi u tikvicu s vodom.

Zagrijte na umjerenoj vatri i lagano miješajte okretnim pokretima dok se dehidrirani medij potpuno ne otopi, ostavljajući da kuha 1 minutu.

Sterilizirati

Tikvica se stavi u autoklav da se medij sterilizira na 121 ° C 20 minuta.

Krvni agregat

Kada napuštate autoklav, dopušta se da stoji dok temperatura medija ne bude približno između 56 do 70 ° C, da se krv stavi i miješa dok medij ne postane smeđi.

Ako dodajete suplemente, vrijeme je da to učinite. Nakon toga promiješajte i poslužite 20 ml u svaku sterilnu Petrijevu posudu.

Cijeli postupak treba izvesti u poklopcu za laminarni protok ili oko Bunsenovog plamenika.

Ostavite stajati dok se ne stvrdne i pohranite obrnuto u hladnjak.

Još jedan način pripreme čokoladnog agara bez upotrebe krvi

Bazni medij je pripremljen kako je gore opisano, komercijalno dobiveni dehidrirani hemoglobin je otopljen i steriliziran u autoklavu.

Obe se otopine ostave da se ohlade na 50 ° C, spoje i doda se dodatak. Pomiješajte u aseptičnim uvjetima, a zatim poslužite u sterilnim Petrijevim posudama.

QA

Važno je da se krv stavi na navedenu temperaturu, jer je ona idealna za liziranje crvenih krvnih stanica i istovremeno održavanje faktora V, koji je osjetljiv na temperaturu.

Na površini agara ne smiju ostati mjehurići. Iz svake šarže od 100 ploča, jednu ili dvije ploče treba inkubirati u pećnici na 37 ° C tijekom 24 sata kako bi se provjerila njihova sterilnost.

Za najbolje rezultate, čokoladni agar treba koristiti ubrzo nakon pripreme.

Kontrolni bakterijski sojevi trebaju se držati u laboratoriju kako bi se procijenila učinkovitost svježeg medija za rast glavnih fascinantnih mikroorganizama od kliničke važnosti.

Reference

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinička mikrobiologija. Sveučilište u Kadizu, drugo izdanje. UCA Služba za publikacije.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Izvodljivost upotrebe podloge za baznu kulturu GC-Biocen Agar u mikrobiološkom laboratoriju. Rev Cubana Med Trop, 2004.; 56 (3): 237-238. Dostupno na: scielo.sld.
5. Suradnici na Wikipediji. Čokoladni agar. Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 17. prosinca 2018., 19:54 UTC. Dostupno na: en.wikipedia.org.