TIOGLIKOLAT JUHA: RACIONALNOST, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

Tioglikolat bujon je medij obogaćen konzistencija tekućine. Poznat je po akronimu FTM po akronimu na engleskom mediju Fluid Thioglycollate. Stvorio ga je Brewer, a modificirala 1944. godine Vera, koja mu je dodala kazein pepton.

Ovaj medij ima nizak potencijal redukcije oksidacije, stoga se ne preporučuje za razvoj strogih aerobnih bakterija, ali idealan je za obnavljanje fakultativnih aerobnih, strogih anaerobnih i nezahtjevnih mikroaerofilnih bakterija.

Tioglikolat juha bez pokazatelja. Pokazuje vaginalni iscjedak. Izvor: Bobjgalindo

Visoka učinkovitost koja je primijećena kod ovog medija u izolaciji i oporavku širokog spektra mikroorganizama učinila je prihvaćenom od Sjedinjenih Država Farmakopeje (USP), Službenim udruženjem poljoprivrednih kemičara (AOAC) i Europskom farmakopejom (EP).

Ove organizacije preporučuju ga za ispitivanje farmaceutskih proizvoda za kontrolu sterilnosti i za obogaćivanje različitih vrsta uzoraka.

Kadski tioglikolat sastoji se od ekstrakta kvasca, probavnog sustava pankreasa kazeina, bezvodne dekstroze, L-cistina, natrijevog klorida, natrijevog tioglikolata, resazurina i agarja u maloj količini.

Postoji nekoliko verzija ovog medija, a među njima su: tioglikolatna juha s indikatorom, tioglikolatna juha bez pokazatelja, tioglikolatna juha s pokazateljem obogaćena heminom i vitaminom K _1, te tioglikolatna juha s kalcijevim karbonatom.

Značajno je da variva juhe od tioglikolata obogaćena heminom i vitaminom K služi za pospješivanje rasta brzih anaeroba, a varijanta juhe u obliku tioglikolata koja sadrži kalcijev karbonat korisna je za suzbijanje kiselina nastalih tijekom mikrobnog rasta.

osnova

Tioglikolat juha smatra se neselektivnim sredstvom za obogaćivanje jer omogućava rast većine nestimolitičnih bakterija. Prehrambene potrebe osiguravaju ekstrakt kvasca, probavni sustav gušterače i glukoza.

S druge strane, ovaj medij, iako je juha, sadrži malu količinu agara; To znači da ima nizak potencijal oksidacijske redukcije, zbog činjenice da usporava ulazak kisika, na način da se kisik smanjuje kako ide dublje u cijev.

Zbog toga je ovaj medij idealan za razvoj fakultativnih aerobnih, mikroaerofilnih i strogih anaerobnih bakterija, a posljednja 2 nije potrebna inkubacija u tim uvjetima. Isti medij regulira količinu kisika unutar medija, odsutna na dnu epruvete i u dovoljnoj količini na površini.

Isto tako, tioglikolat i L-cistin djeluju kao reducirajuća sredstva, doprinoseći sprečavanju nakupljanja tvari štetnih za razvoj bakterija, poput peroksida. Pored toga, ti spojevi sadrže sulfhidrilne skupine (-SH-), koji neutraliziraju inhibitorne učinke derivata žive, arsenika, među ostalim teškim metalima.

Sa svoje strane, resazurin je pokazatelj redukcije oksida. Ova tvar je bezbojna kad se reducira i ružičasta je kada se oksidira. Postoje inačice tioglikolatnog bujona s indikatorima i bez indikatora. Njegova će uporaba ovisiti o vrsti uzorka i preferencijama laboratorija.

U međuvremenu, natrijev klorid održava osmotsku ravnotežu juhe od tioglikolata, a upotreba glukoze u bezvodnom obliku sprečava prekomjernu vlagu u dehidriranom mediju.

priprema

Tioglikolatna juha s pokazateljem

Odmjerite 29,75 g dehidriranog medija i otopite u 1 litri destilirane vode. Smjesa se ostavi stajati otprilike 5 minuta. Dovedite do izvora topline i često miješajte dok se potpuno ne otopi.

Izlijte medij u epruvete i autoklavite na 121 ° C tokom 15 minuta. Prije upotrebe ostavite da se ohladi. Provjerite umetak komercijalne kuće da li je sačuvan. Neki preporučuju čuvanje na sobnoj temperaturi u tamnom mjestu, a drugi u hladnjaku zaštićenom od svjetlosti.

PH pripremljenog medija je 7,1 ± 0,2.

Boja dehidriranog medija je svijetlo bež, a pripremljeni medij svijetlo je jantar s nešto opalescencije.

Tioglikolat juha s pokazateljem obogaćena heminom i vitaminom K

Postoje komercijalni mediji koji već sadrže hemin i vitamin K ₁, posebno za uzgoj anaeroba.

Ako nemate obogaćeni medij za anaerobe, možete pripremiti osnovni tioglikolatni juh. Za to _{se dodaje} 10 mg hemin hidroklorida i 1 mg vitamina K ₁ za svaku litru medija. Međutim, ako se u juhu od tioglikolata doda krv ili serum, dodavanje hemina ili vitamina K nije potrebno.

Tioglikolatna juha s kalcijevim karbonatom

Dolazi u prodaji i priprema se slijedeći upute na umetku.

Tioglikolat juha bez pokazatelja

Ovaj ima isti sastav osnovnog tioglikolata, ali ne sadrži resazurin.

Odvažite 30 g dehidriranog medija i otopite u litri destilirane vode. Ostatak pripravka jednak je onome opisanom u juhi od tioglikolata s indikatorom.

Koristiti

Tioglikolat juha je korisna za obogaćivanje kliničkih uzoraka, posebno onih sa sterilnih mjesta. Koristan je i za nekliničke uzorke, poput kozmetike, lijekova itd.

Za inokulaciju tekućih uzoraka (poput CSF-a, sinovijalne tekućine, među ostalim), uzorci se prvo centrifugiraju, a zatim se uzimaju 2 kapi sedimenta i stave se u juhu s tioglikolatom. Inkubirajte 24 sata na 35 ° C. Ako u tom vremenu nema rasta (zamućenja), inkubira se najviše do 7 dana.

Ako se uzorak uzme s brisom, kultura se najprije inokulira u pločama, a na kraju se bris unese u bujon, izbočeni dio se odvoji, a epruveta se zatvori, a tampon ostavi unutra. Inkubirajte 24 sata na 35 ° C, maksimalno 7 dana.

Za čvrste uzorke homogenizirajte u fiziološkoj fiziološkoj otopini (SSF), a zatim inokulirajte tioglikolatnu juhu s dvije kapi suspenzije.

Ponekad se može koristiti kao transportni medij za uzorke na koje se sumnja da su strogi anaerobi ili kao rezervni dodatak za obogaćivanje.

Varijanta juhe s tioglikolatima s kalcijevim karbonatom koristi se za duže održavanje kontrolnih sojeva, jer ima sposobnost neutralizacije kiselina nastalih upotrebom glukoze; Ove kiseline su toksične za određene bakterije.

Rast u juhu od tioglikolata promatrat će se zamućenošću medija. Preporučuje se mrlju po Gramu i naknadno subkultura na neselektivnim i selektivnim podlogama, ovisno o vrsti uzorka i sumnjivim mikroorganizmima.

QA

Za kontrolu sterilnosti preporučuje se inkubacija jedne ili dvije juhe bez inokulacije. Očekivani rezultat je bistra juha, bez promjene boje, mada je normalno da se na površini epruvete vidi blago ružičasta boja.

Za kontrolu kvalitete potrebno je inokulirati između 10 - 100 CFU certificiranih kontrolnih sojeva, poput Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 11437 sporo Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkubirajte na 30-35 ° C u aerobiozi 24 sata do najviše 3 dana, jer ti mikroorganizmi brzo rastu.

Dobar razvoj očekuje se u svim slučajevima, osim Micrococcus luteus i Bacillus subtilis, gdje može biti umjerenog razvoja.

Za kontrolu kvalitete juhe od tioglikolata obogaćene heminom i vitaminom K _{1 mogu se} upotrijebiti kontrolni sojevi Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 i Bacteroides fragilis ATCC 25285. Očekivani rezultat je zadovoljavajući rast.

preporuke

- Povremeno se može primijetiti da površina juhe od tioglikolata s indikatorom postaje ružičasta; To je zbog oksidacije medija. Ako ružičasta boja pokriva 30% ili više ukupne juhe, može se zagrijati na vodenoj kupelji 5 minuta, ponovo ohladiti i upotrijebiti.

Tako ćete ukloniti apsorbirani kisik, vrativši mediju u svoju izvornu boju. Ovaj postupak se može obaviti samo jednom.

-Za poboljšanje rasta aerobnih bakterija inkubirajte poklopac malo labavim. Međutim, poželjno je koristiti u tu svrhu bujon za infuziju srca ili sojin juha od tripticaze za pravilan razvoj strogih aerobika.

- Treba izbjegavati zamrzavanje medija ili pregrijavanje, jer oba stanja oštećuju medij.

-Direktna svjetlost oštećuje kulturni medij, mora se čuvati zaštićena od svjetlosti.

Reference

1. Britannia Laboratories. Tioglikolat USP s indikatorom. 2015. Dostupno na: labBritania.com.
2. Chios Sas Laboratories. 2019. Tioglikolatni juha. Dostupno na: quios.com.co
3. Laboratorija BD Fluid Thiogcolcollate Medium (FTM). 2003. Dostupno na: bd.com/Europe
4. BBL medij pripremljen u epruvetama za uzgoj anaerobnih mikroorganizama. Tioglikolatni mediji. 2013. Dostupno na: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.