TETRATHIONATE JUHA: OBRAZLOŽENJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

Tetrationata bujon ili bujon TT selektivni medij tekućina kulture za obogaćivanje i oporavak od sojeva roda Salmonella. Stvorio ga je Müeller, a kasnije ga modificirao Kauffmann, zbog čega postoje oni koji ga zovu Müeller-Kauffmannova juha.

Izvorni medij sadržavao je proteozne peptone, kalcijev karbonat i natrijev tiosulfat. Kauffmann mu je dodao žučne soli i stvorio još jedan modalitet svijetlo zelenom bojom. Te tvari inhibiraju rast koliformi, ostavljajući medij slobodnim za razvoj patogenih bakterija, u ovom slučaju salmonele.

Dodavanje jodne otopine joda u tetrationati juhu. Izvor: Manuel Almagro Rivas

Modifikacija je bila vrlo uspješna jer je značajno povećala osjetljivost medija. Iz tog razloga, trenutno je korisno potražiti salmonele u bilo kojoj vrsti uzorka, ali posebno u čvrstim ili tekućim stolicama i hrani.

Njegova priprema sastoji se od dvije faze; Komercijalni medij je baza za pripremu tetrationatskog bujona, a nakon toga, tako da se može stvoriti tetrationat, dodaje se jodirana jodna otopina koja kompletira medij.

Američko udruženje za javno zdravstvo (APHA) preporučuje upotrebu Tetrathionate broth-a nadopunjenog jarkozelenom bojom za obogaćivanje uzoraka za salmonelu, jer je selektivniji od juhe i Tetrathionate broth-a.

Općenito, tetrationati juha je idealna kada se sumnja na prisutnost bakterija iz roda Salmonella u malim količinama ili kada se oni zlouporabe izlaganjem inhibicijskim tvarima ili industrijskim postupcima koji smanjuju njihovu održivost.

osnova

Prisutni peptoni odgovaraju probavljanju pankreasa kazeinu i peptičnom probavljanju životinjskog tkiva. One osiguravaju izvor ugljika, dušika i općih hranjivih sastojaka za rast bakterija.

Natrijev tiosulfat sa svoje strane reagira s jodiranom otopinom, čime nastaje tetrationat. To inhibira rast koliformi i pogoduje razvoju bakterija koje sadrže enzim tetrationata reduktaza, među njima je rod Salmonella, ali i Proteus.

Žučne soli djeluju i kao inhibicijska tvar na većinu gram-pozitivnih i nekih gram-negativnih bakterija (koliforma).

Kalcijev karbonat apsorbira otrovne tvari nastale raspadanjem tetrationata koji tvori sumpornu kiselinu. U tom smislu, kalcijev karbonat neutralizira kiselost, održavajući pH medija stabilnim.

U slučaju svijetlozelene modalitete, ova tvar povećava selektivnu snagu tetrationatskog bujona inhibirajući mikroorganizme koji nisu rod Salmonella.

priprema

-Tetrathionate juha

Jodna otopina joda

Težiti:

• 6 grama joda.
• 5 g kalijevog jodida.

Kalijev jodid otopljen je u otprilike 5 ml sterilne destilirane vode, zatim se jod dodaje malo po malo dok se smjesa zagrijava. Nakon što se potpuno otopi, nadopunite do oznake sterilnom destiliranom vodom do konačnog volumena od 20 ml.

Bazni medij za tetrationati juhu

Odvažite 46 grama dehidriranog medija i suspendirajte u 1 litri sterilne destilirane vode. Miješajte i zagrijte dok se potpuno ne otopi, može prokuhati samo nekoliko minuta. Ne autoklavirajte. Ostatak medija ostavio je da se ohladi na oko 45 ° C i tada se doda 20 ml jodirane otopine.

Nakon dodavanja jodirane otopine mediju treba odmah iskoristiti. Ako ne želite koristiti cijelu smjesu, postupite na sljedeći način:

10 ml osnovnog medija distribuira se u epruvete, a samo onim koje će biti inokulirano uzorcima dodaje se 0,2 ml jodirane otopine.

Oni koji se neće koristiti mogu se još čuvati u hladnjaku, no kako medij nije steriliziran, idealno je pripremiti točnu količinu koja je potrebna.

Boja medija prije dodavanja jodirane otopine joda je mliječno bijela s bijelim talogom, a nakon dodavanja je smeđa s gustim talogom. Opaženi talog je normalan i odgovara kalcijevom karbonatu koji se ne otapa. Konačni pH medija je 8,4 ± 0,2.

-Tetrathionate varijanta juhe sa svijetlo zelenom bojom

Za pripremu svijetlo zelene tetrationate juhe provode se svi gore opisani koraci, ali dodatno, u smjesu će se dodati 10 ml svijetlo zelene otopine pripremljene u 0,1%.

Sjajno zeleno

Ovo se rješenje priprema na sljedeći način:

Odvažite 0,1 g svijetlozelene boje i suspendirajte u 100 ml destilirane vode. Zagrijati do vrenja da se postigne potpuno otapanje. Čuvajte u ambre boci.

Koristiti

Za uzorke stolice (kultura stolice) protokol je sljedeći:

Inokulirajte 1 g čvrste stolice ili 1 ml tekuće stolice u epruveti s 10 ml gotovog tetrationata juhe. Snažno protresite i aerobno inkubirajte na 43 ° C 6-24 sata.

Nakon toga, uzmite 10 - 20 ul bujona i subkulture u selektivnom mediju za salmonelu, kao što su SS agar, XLD agar, svijetlozeleni agar, Hektoen enterički agar, između ostalih.

Paralelno s tim, selektivni medij za salmonelu treba inokulirati izravnim uzorkom (izmetom) bez obogaćivanja. Za uzorke rektalnog tampona skupite sakupljeni materijal u epruvetu i nastavite kako je gore opisano.

Za uzorke hrane izvažite 10 g čvrste hrane ili 10 ml tekuće hrane i inokulirajte bočicu sa 100 ml gotovog tetrationa juha. Postupak na isti način kao što je opisano gore, ali inkubirajte na 37 ° C.

Kao što se može vidjeti, odnos između uzorka i juhe uvijek će biti 1:10.

QA

Poznati kontrolni sojevi mogu se upotrijebiti za ispitivanje medija kulture. Najčešće se koriste sojevi s certifikatom ATCC.

Sojevi koji će se koristiti su Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Očekuje se izvrstan rast sojeva salmonele, dok Escherichia coli može imati slab ili redovit rast, a Gram pozitivni sojevi (Enterococcus i Staphylococcus) djelomično ili potpuno inhibirani.

preporuke

-Ako ovaj medij ne inhibira rast Proteusa, neki laboratoriji koriste 40 mg / L novobiocina kako bi spriječili razvoj ovog soja mikroba. Prije stavljanja otopine joda, antibiotik se mora dodati.

-Nakon pripreme medija, uključujući jodnu otopinu joda, ne treba proći više od 2 sata da se inokulira.

-Kad raspodjeljuje medij u epruvetama, smjesa se mora kontinuirano homogenizirati da se resuspendira nastali talog.

-U manje kontaminiranim uzorcima tetrationati juha se inkubira na 35-37 ° C, a u visoko kontaminiranim uzorcima preporučuje se inkubacija na 43 ° C.

Reference

1. Conda Pronadisa Laboratorij. 2010. Tetrathionate baza juha prema Müeller-Kauffmannu. Dostupno na:
2. BD Laboratoriji. 2003. Tetrathionate baza brodova. Dostupno na:
3. Britannia Laboratories. 2015. Tetranate bazna juha. Dostupno na:
4. BBL Media. 2005. Pripremljeno u epruveti za kulturu vrste Salmonella.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Usporedba između kulture kulture natrijevog selenita i natrijevog tetrationata, oba inkubirana na 37 ° C i 42 ° C za izolacija Salmonella spp iz izmeta nosača. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220