TRYPTICASEIN SOJIN BUJON: TEMELJ, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

Soja bujon tripton je tekući medij za kulturu, vrlo hranjive selektivan. Zbog velike svestranosti, jedan je od najčešće korištenih medija za tekuću kulturu u laboratoriju za mikrobiologiju.

Poznat je i po nazivu triptičinog sojinog bujona ili probavljenog kazein-soje, čija je skraćenica TSB za akronim na engleskom Tryptic Soy broth ili CST za akronim na španjolskom. Njegova je upotreba vrlo raznolika zbog svog sastava. Sastoji se od tripteina, sojinog peptona, natrijevog klorida, dikalijevog fosfata i glukoze.

Sojin bujon Trypticasein zasađen sojem Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 gdje se opaža stvaranje pigmenata. Izvor: Fotografiju snimio autor MSc. Marielsa Gil.

Sposobna je reproducirati klinički važne patogene bakterije, uključujući one koje su prehrambeno zahtjevne i anaerobne bakterije. U ovom se okruženju mogu razviti i neke oportunističke i zagađujuće gljive.

Zbog velike hranjive moći, on ima visoku osjetljivost za otkrivanje mikrobne kontaminacije, zbog čega ga je za mikrobiološku analizu cjepiva odabrala Služba zdravstvene zaštite životinja i biljaka USDA.

Isto tako, sojin bujon triptikasein ispunjava zahtjeve različitih farmakopeja (Europski EP, japanski JP i sjevernoamerički USP) za mikrobiološko ispitivanje proizvoda na industrijskoj razini, poput kozmetike i hrane.

S druge strane, vrijedno je spomenuti da je ovaj medij, unatoč velikoj upotrebljivosti, relativno jeftin, što ga čini pristupačnim za većinu mikrobioloških laboratorija. Također se vrlo lako priprema.

osnova

Triptein, pepton i glukoza daju mu osnovna prehrambena svojstva, što ga čini idealnim medijem za brzi rast mikroba.

U približno 6 do 8 sati inkubacije, rast se već može primijetiti kod većine mikroorganizama. Međutim, postoje sporo rastuće vrste koje mogu rasti danima.

Natrijev klorid i dikalij-fosfat djeluju kao osmotska ravnoteža i regulator pH. Prisutnost rasta dokazuje se pojavom zamućenosti u mediju; ako nema rasta, medij ostaje proziran.

Zbog svoje svijetle boje moguće je promatrati proizvodnju pigmenata, poput onog prikazanog na slici na početku članka, koji odgovara pigmentu koji proizvodi Pseudomonas aeruginosa.

priprema

-Triptysein sojin juha

Za pripremu probavnog sojinog soja potrebno je digitalno izmjeriti 30 g dehidriranog komercijalnog medija. Tada se otopi u litri destilirane vode koja se nalazi u tikvici.

Smjesa se ostavi 5 minuta da odmara, a zatim se prebaci u izvor topline kako bi se otopio medij. Treba ga često miješati dok kuhati 1 minutu.

Nakon što se otopi, po potrebi se distribuira u epruvete odgovarajuće veličine. Mogu se koristiti cijevi s pamučnim čepovima ili s bakelitnim kapicama. Nakon toga epruvete se steriliziraju sa sredstvom u autoklavu na 121 ° C 15 minuta.

PH sredstva mora ostati na 7,3 ± 0,2

Treba napomenuti da je boja dehidriranog medija kulture svijetlo bež boje i treba je čuvati na temperaturi od 10 do 35 ° C, na suhom mjestu. Dok je pripremljeni juha svijetlo žute boje, treba ga čuvati u hladnjaku (2 do 8 ° C).

-Različni heljdi triptikasein

Modificirani tripticasein soj bujon može se pripremiti dodavanjem žučnih soli i novobiocina kako bi se učinio selektivnim za izolaciju E. coli. Druga mogućnost za istu svrhu je pripremanje sojine juhe s tripticazom koja je dodana vankomicinom, cefiksimom i teluritom (2,5 µg / ml).

S druge strane, više glukoze (0,25%) se može dodati u sojin bujon soje kada je cilj potaknuti stvaranje biofilma.

Koristiti

Dovoljno je hranjiva da dopušta rast gipkih ili gipkih bakterija poput Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp i Brucella sp, bez potrebe za dodatkom krvi ili seruma.

Isto tako, neke gljivice se mogu razviti u ovoj juhi, poput Candida albicans Complex, Aspergillus sp i Histoplasma capsulatum.

Nadalje, ovaj medij u anaerobnim uvjetima idealan je za oporavak bakterija iz roda Clostridium, kao i nesportskih anaerobnih bakterija kliničkog značaja.

Ako se doda 6,5% natrijevog klorida, može se koristiti za rast enterokoka i drugih streptokoka iz grupe D.

Na razini istraživanja bila je vrlo korisna u raznim protokolima, posebno u istraživanju biofilma ili bakterija koje formiraju biofilm. Također se koristi za pripremu bakterijske suspenzije od 0,5% Mac Farlanda potrebne za provođenje antibiograma po Kirby i Bauer metodi.

U ovom se slučaju uzme 3 do 5 kolonija sličnog izgleda i emulgira u 4-5 ml soje s tripticasein sojom. Potom se inkubira 2 do 6 sati na 35-37 ° C i zatim se namješta do željene koncentracije pomoću sterilne fiziološke otopine. Tripticasein sojine juhe ne smiju se koristiti od 18 do 24 sata inkubacije.

sije

Uzorak se može saditi izravno ili se mogu subkultivirati čiste kolonije uzete iz selektivnih medija. Inokulum bi trebao biti mali da ne bi zamutio medij prije inkubacije.

U aerobiozi se obično inkubira 24 sata na 37 ° C, ali ti uvjeti mogu varirati ovisno o mikroorganizmu koji se traži. Po potrebi se može inkubirati u anaerobnim uvjetima na 37 ° C nekoliko dana. Na primjer, brzorastući ili brzi mikroorganizmi mogu se inkubirati i do 7 dana.

U mikrobiološkoj analizi farmaceutskih supstanci - poput cjepiva - protokoli su stroži. U tim se slučajevima juha bez rasta ne odbacuje sve dok ne postigne 14 dana kontinuirane inkubacije.

QA

Iz svake pripremljene šarže treba inkubirati 1 ili 2 inokulirane epruvete kako bi se pokazala njihova sterilnost. Mora ostati nepromijenjena.

Također se mogu zasaditi poznati sojevi kako bi se procijenilo njihovo ponašanje. Među sojevima koji se mogu koristiti su:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, pri Candida albicans, ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 ili 25923, Escherichia coli ATCC 8739, ATCC 19615 Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, ATCC28CC305 pneumoniae ATCC28omonas 905, pneumoniae ATCC28omonas305.

U svim slučajevima, rast mora biti zadovoljavajući u odgovarajućim atmosferskim i temperaturnim uvjetima za svaki mikroorganizam.

Ograničenja

-Fermentacija glukoze uzrokuje smanjenje pH medija zbog proizvodnje kiselina. To može biti nepovoljno za opstanak nekih mikroorganizama osjetljivih na kiselost.

-Ne preporučuje se za održavanje sojeva, jer osim kiselosti, bakterije iscrpljuju hranjive tvari nakon nekoliko dana s posljedičnim nakupljanjem otrovnih tvari koje čine okoliš nepristupačnim.

-Morate raditi pazeći na sve protokole sterilnosti, jer su bujoli lako kontaminirani.

-Nakon što pripremate soje s metvicama triptikaseina, ne biste trebali pokušavati prenijeti juhu u drugu sterilnu epruvetu, jer je ova vrsta manevara vrlo osjetljiva na onečišćenje.

Reference

1. Cona E. Uvjeti za dobru studiju osjetljivosti agar difuzijskim testom. Rev. chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Dostupno na: scielo.org
2. Britannia Laboratory. Triptein soje. 2015. Dostupno na: britanialab.com
3. MCD Laboratorij. Trypticasein sojin raj. Dostupno na: electronic-systems.com
4. Neogeni laboratorij. Triptih sojin juha. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Procjena tehnike magnetske imunoseparacije za oporavak Escherichia coli O157: H7 u mliječnim kremama. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Dostupno na: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Formiranje biofilma u izolatima Staphylococcus aureus prema antimikrobnoj osjetljivosti i kliničkom podrijetlu. Život. 2015 62 (1): 1-8. Dostupno na: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Izolacija Escherichia coli O157: H7 u dvostruke svrhe goveđih fekalija iz općine Miranda, država Zulia, Venezuela. Vlč. Cient. (Maracaibo), 2007.; 17 (3): 239-245. Dostupno na: scielo.org