- osnova
- priprema
- -Selenit juha
- - Priprema komercijalnog okruženja
- Varijanta selenitsko-cistinske juhe
- Prijave
- sije
- QA
- Ograničenja
- Reference
Selenit je selektivni tekući medij kulture. Dizajnirao ga je Leifson za obogaćivanje uzoraka u kojima se sumnja na prisutnost enteropatogenih bakterija roda Salmonella.
Ovaj medij udovoljava zahtjevima Američkog udruženja za javno zdravstvo (APHA), pa je prihvaćen radi ispitivanja prisutnosti salmonele u uzorcima izmeta, mokraće, tekuće ili čvrste hrane, vode.
Juha od selenita. Izvor: Fotografiju snimio autor MSc. Marielsa gil
Njegov kemijski sastav pogoduje oporavku tih mikroorganizama i zauzvrat, inhibira rast drugih. Prvenstveno je otrovna za većinu bakterija koje pripadaju obitelji Enterobacteriaceae. Međutim, također omogućuje oporavak sojeva Shigella i ne inhibira rast Pseudomonas i Proteusa.
Sastoji se od bezvodnog natrijevog hidrogen selenita, bezvodnog natrijevog fosfata, peptona i laktoze. Postoji i varijanta kojoj se dodaje cistin, otuda i njegov naziv selenit-cistinski brod.
Trenutno se preferira upotreba selenit-cistinskog bujona s obzirom da je dobiven veći postotak oporavka salmonele, ekvivalentni onom koji je primijećen s drugim selektivnim medijumima iste svrhe, poput natrijevog tetrationatskog bujona.
osnova
Peptoni sadržani u juhi služe kao hranjive tvari za pravilan razvoj mikroorganizama. Sojevi salmonele koriste peptone kao izvor dušika, vitamina i aminokiselina.
Laktoza je fermentirajući ugljikohidrat, dok je natrijev selenit inhibitorna supstanca koja zaustavlja rast gram-pozitivnih bakterija i većine bakterija prisutnih u crijevnoj flori, posebno one iz obitelji Enterobacteriaceae. Natrijev fosfat je pufer koji stabilizira pH medija.
U slučaju varijante selenitne juhe koja sadrži L-cistin, ovaj dodatni spoj je redukcijsko sredstvo koje minimizira toksičnost selenita, povećavajući oporavak salmonele.
priprema
-Selenit juha
Ako imate komponente smjese, možete vagati:
4 g bezvodnog natrijevog hidrogen selenita.
10 g bezvodnog natrijevog fosfata.
5 g peptona.
4 grama laktoze.
Otopite spojeve u 1 litri sterilne destilirane vode. Može se malo zagrijati da se potpuno otopi.
Neki laboratoriji izlože medij 10 minuta tekućoj pari kako bi ga sterilizirali, jer se autoklav ne smije koristiti. Ako se medij sterilizira, može se čuvati u hladnjaku do upotrebe.
Može se pripremiti i nesterilno i servirati izravno 10 do 15 ml u sterilne epruvete.
U ovom slučaju treba ga ostaviti da se odmori i odmah koristiti. Kako medij nije sterilan, ne može se čuvati u hladnjaku za kasniju upotrebu.
- Priprema komercijalnog okruženja
Ako je komercijalni medij dostupan, izvažite 23 g dehidriranog medija i otopite ga u jednoj litri sterilne destilirane vode. Kratko zagrijavajte da se dovrši otapanje. Ne autoklavirajte. Aseptično servirajte 10 ili 15 ml u sterilnim epruvetama.
Konačni pH medija trebao bi biti 7,0 ± 0,2.
Treba napomenuti da je boja dehidriranog medija bež, a pripravak je svijetla i prozirna jantarna.
Varijanta selenitsko-cistinske juhe
Sadrži iste spojeve kao i juha iz selenita, ali dodaje se 10 mg cistina. Ostatak postupka je potpuno isti kao što je gore opisano.
Prijave
Ovaj je medij poseban za primjenu u epidemiološkim studijama, u slučajevima kada bolest nije u akutnom stadiju, kod asimptomatskih bolesnika ili zdravih nositelja.
Izolacija roda Salmonella općenito je teška, jer su obično samo slabo kontaminirani uzorci. Budući da je u malim količinama, lako se prekriva rastom ostalih bakterijskih rodova koji se nalaze u većoj količini.
S druge strane, sirovina od koje se proizvodi prerađena hrana često je izložena vrućini, postupcima dehidracije, upotrebi dezinfekcijskih sredstava, zračenja i konzervansa, između ostalog.
Stoga se salmonele prisutne u sirovini maltretiraju podvrgavanjem proizvoda gore navedenim industrijskim postupcima. Isto tako, u slučaju kliničkih uzoraka kao što su izmet, sojevi mogu biti slabi ako potječu od pacijenata koji su liječeni antibioticima.
Stoga je svaki uzorak u kojem se sumnja na prisutnost salmonele potrebno unaprijed obogatiti laktoznom juhom, a potom obogatiti selenitom kako bi se optimizirao njen oporavak u selektivnom mediju, kao što su SS agar, ksilozni agar, lizin deoksiholat (XLD), enterički Hektoen agar (HE) i svijetlo zeleni agar, između ostalih.
sije
Za uzorke stolice uzmite 1 g uzorka i suspendirajte u epruveti s 10 do 15 ml juhe selenita. Ako su stolice tekuće, uzmite 1 ml i suspendirajte juhu. Za rektalne brisove istisnite materijal iz brisa u juhu.
U uzorcima čvrste hrane uzima se 1 gr i suspendira u juhi selenita.
U tekućoj hrani pomiješajte u jednakim dijelovima s juhom selenita u dvostrukoj koncentraciji.
Za uzorke urina centrifugirajte, odbacite supernatant, uzmite sav talog i suspendirajte ga u juhu selenita.
Bujoni se inkubiraju na 37 ° C tokom 24 sata inkubacije. Rast bakterija dokazuje zamućenost. Dodatna epruveta po uzorku također se može uključiti za inkubaciju na 42 ° C. Potom je sijanje selektivnog krutog medija iz juhe iz selenita.
QA
Za kontrolu sterilnosti, selenitski juh iz svake neinokulirane šarže inkubira se 24 sata na 37 ° C. Očekuje se da nema zamućenja ili promjene boje medija.
Poznati sojevi se mogu koristiti za kontrolu pravilnog funkcioniranja medija, kao što su:
Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 i Proteus mirabilis ATCC 43071.
Očekivani rezultati su:
- Za prva tri soja bakterija rast mora biti zadovoljavajući.
- Za djelomičnu inhibiciju Escherichia coli.
- Za Proteus umjeren rast.
Ograničenja
Sredstvo juhe iz juha toksično je za ljudsku kožu, pa treba izbjegavati izravan kontakt.
Reference
- Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Usporedba između kulture kulture natrijevog selenita i natrijevog tetrationata, oba inkubirana na 37 ° C i 42 ° C za izolacija Salmonella spp iz izmeta nosača. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
- Britannia Laboratories. Juha iz Selenita. 2015. Dostupno na: britanialab.com
- Neogeni laboratoriji. Juha od selenita. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
- González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal-Camacho J. Mikrobiološka izolacija Salmonella spp. i molekularni alati za njegovo otkrivanje. Zdravlje, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Dostupno s:
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.