MASLAC OD JUHE: TEMELJ, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

Malonata bujon je tekući medij kulture se koristi za test dijagnozu (malonat), koji se koristi za razlikovanje neke rodova obitelji Enterobacteriaceae. Stvorio ga je Leifson 1933., a kasnije ga je modificirao Ewing, koji je maloj količini ekstrakta dekstroze i kvasca dodao u originalnu formulu.

Medij se trenutno sastoji od ekstrakta kvasca, amonijevog sulfata, dikalijevog fosfata, monokalijevog fosfata, natrijevog klorida, natrijevog malonata, dekstroze i bromotidol plave boje. Ovaj se test općenito uključuje u biokemijsku identifikacijsku bateriju za Enterobacteriaceae, što pomaže u razlikovanju određenih rodova i vrsta.

Grafički prikaz malonatnog testa. A. Negativni test, B. (zakiseljavanje) Negativni test, C. (Srednja alkalizacija) Pozitivan test. Izvor: cijevi u boji publicdomainpictures.net

Test malonata uglavnom se temelji na sposobnosti nekih mikroorganizama da natrijev malonat koriste kao jedini izvor ugljika, a amonijev sulfat kao izvor dušika.

Malonatni test je obično pozitivan kod nekih vrsta roda Enterobacter, Klebsiella i Citrobacter. Dok većina vrsta rodova Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus i Providencia daje negativne reakcije.

osnova

Malonatni test sastoji se od prikazivanja bakterija koje su sposobne koristiti natrijev malonat kao jedini izvor ugljika, a amonijev sulfat kao izvor dušika.

Većina enterobakterija koje ne koriste malonat mogu rasti u ovom mediju, uzimajući dekstrozu i ekstrakt kvasca kao hranjive tvari.

U ovom slučaju, svaki pokušaj alkalizacije upotrebom peptona sprečit će proizvodnju kiselina koje nastaju fermentacijom dekstroze. Isto tako, kalijev i monokalijev fosfat djeluju kao pufer, održavajući pH na 6,7.

Zbog toga, kad je test negativan, juha ostaje iste izvorne boje (zelena). U rijetkim slučajevima medij može postati kiseo zbog fermentacije dekstroze; bez upotrebe peptona i pH indikatora pretvorio bi boju medija u žutu. Da bi se to dogodilo, pH mora pasti na 6.

Sada, kad je ovaj test pozitivan, kaže se da je mikroorganizam koristio malonat i amonijev sulfat kao izvore ugljika i dušika, a da pritom nisu upotrijebili ostale komponente.

U ovom slučaju, medij postaje alkalan zbog oslobađanja natrija i posljedičnog stvaranja NaOH. U tom smislu, pH indikator (bromotimol plavi) pretvara boju medija iz zelene u plavu kada je pH jednak ili veći od 7,6. Plava boja može biti lagana ili intenzivna (pruska plava).

Konačno, natrijev klorid održava osmolarnost medija, a voda razrjeđivač svih komponenti.

Tumačenje

Bujon iste boje (zeleni) - negativni test

Žuti brod: negativni test

Svjetlo ili tamno plava juha: test pozitivan

Postoji varijanta koja se zove fenilalanin malonat juha, koja se također naziva i Shaw i Clarkeov medij. U ovom slučaju mogu se analizirati dva ispitivanja, uporaba malonata kao izvora ugljika i proizvodnja piruične kiseline iz fenilalanina.

priprema

Mahunat od juhe

Izmjerava se broj grama koji je određen umetkom odabranog trgovačkog poduzeća (može varirati od jednog do drugog). Izmjereni grami se suspendiraju u jednoj litri destilirane vode. Zagrijte malo dok se potpuno ne otopi. Raspodijelite 3 ml medija u epruvete od 13/100 s pamučnim čepovima.

Sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 do 20 minuta.

Prije upotrebe ohladiti. Ako se neće odmah koristiti, čuvajte u hladnjaku do upotrebe. Donesite juhe na sobnu temperaturu prije inokulacije.

PH sredstva treba biti 6,7 ± 0,2. Boja pripremljenog medija je boca zelena.

Fenilalanin Malonat juha

Odmjeriti 11 g dehidriranog medija i otopiti u 1 litri destilirane vode. Ostatak pripreme jednak je prethodno opisanom.

Može se pripremiti i dodavanjem 2 g / L fenilalanina u mediju malonatne juhe prije nego što se sterilizira.

Koristiti

Koristi se kao dio biokemijskih ispitivanja koja su sastavljena za identifikaciju bakterija iz porodice Enterobacteriaceae.

Pomaže u razlikovanju između:

-Gladovi Klebsiella i Enterobacter (+) roda Escherichia i Serratia (-).

-Vrste Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame i Salmonella enterica ssp diarizonae (+), vrste Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Od roda Klebsiella općenito (+) iz roda Actinobacillus (-).

- Povremeno može pomoći u diferencijaciji rodova i vrsta bakterija koje ne pripadaju obitelji Enterobacteriaceae, kao što su gramatički negativne bacile Alcaligenes faecalis (+) i Acinetobacter sp (-).

Izvor: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.

Postupak

Pod upaljačem uzima se dio čistog kolonjske vode pomoću pravilno sterilizirane i ohlađene platinske ručke. Uzeti uzorak (lagani inokulum) otopi se u malonatnom juhu. Inkubirajte s poklopcem u aerobiozi na 35 ° C ± 0,2 tijekom 24 do 48 sati.

Malonatni juh se također može inokulirati iz kulture od 18-24 sata u sojinu juhu od tripicataze. U tom slučaju uzima se 0,01 ml sterilnom pipetom i malonatni juh inokulira. Inkubirajte s poklopcem u aerobiozi na 35 ° C ± 0,2 tijekom 24 do 48 sati.

Na kraju vremena interpretiraju se rezultati. Svaki trag plave boje nakon 48 sati inkubacije treba smatrati pozitivnim. Test se ne smije tumačiti kao negativan dok ne prođe 48-satno vrijeme inkubacije.

U slučaju korištenja varijante juha od fenilalanin malonata, prvo se tumači malonat, a zatim se dodaje 5 kapi 1N HCl i 3-5 kapi 8% željeznog klorida. Tamno zelena boja tumači se kao pozitivan test na fenilalanin. Ako s druge strane medij postane blijedo plav, test je fenilalanin negativan.

QA

Za provođenje kontrole sterilnosti medija, jednu ili dvije juhe treba inkubirati na 35 ° C ± 0,2, tokom 24 sata inkubacije. Nakon tog vremena ne bi trebalo biti oblačnosti ili promjene boje.

Za kontrolu kvalitete mogu se koristiti poznati ili certificirani sojevi, poput: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 i Escherichia coli ATCC 25922.

Očekivani rezultati su:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae i Salmonella enterica ssp arizonae daju pozitivnu reakciju (srednje plave boje).
• Za Escherichia coli rezultat mora biti negativan, odnosno očekuje se da neće doći do promjene boje (zelena) ili da će požutjeti zbog fermentacije glukoze.

Ograničenja

Ne koristite juhu koja pokazuje zamućenost, talog, promjenu boje ili bilo kakve znakove propadanja.

Reference

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiološka izolacija Salmonella spp. i molekularni alati za njegovo otkrivanje. Uninorte Health. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73-94. Dostupno na: scielo.org.co
2. BBL. Bulat od mahuna, izmijenjen Ewing 2007. Dostupno na: bd.com
3. Senna Laboratories. Malonato juha. Dostupno na: cientificasenna.com
4. RenyLab. Malonato juha. 2013.Dostupno na: es.renylab.ind.br
5. Mbiolog Dijagnostika. Malonato juha. Dostupno na: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
7. Conda Pronadisa Laboratories. Fenilalanin malonat juha. Dostupno na: condalab.com