LAKTOZIRANI JUHA: TEMELJ, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2025

Laktoza bujon je sredstvo ne - selektivnom mediju za kulturu tekućina koriste u prvom redu kao u pre-obogaćivanje u izolaciji od sojeva Salmonella mikrobiološku do obrađene hrane, mliječni proizvodi ili vode. To preporučuje Međunarodna komisija za mikrobiološke specifikacije za hranu (ICMPF).

Sredstvo sadrži enzimatsku probavu želatine, ekstrakt mesa i laktozu, tvari potrebne za rast bakterija. Nadalje, laktoza je fermentirajući ugljikohidrat, pa su je neki koliformi sposobni razgraditi proizvodnjom plina.

Laktirane juhe s mutnoćom. Izvor: Fotografiju snimio autor MSc. Marielsa gil

Iz tog razloga, mliječni odjel preporučuje Američko udruženje za javno zdravstvo (APHA) za pretpostavljeno istraživanje ukupnih i fekalnih koliformnih bakterija, kvalificirajući ga kao izvrsnu alternativu za zamjenu triptoze lauril sulfatnog bujona u standardnoj tehnici najvjerojatnijeg broja (MPN).), koristi se za mikrobiološku analizu uzoraka hrane, mlijeka i površinskih voda, podzemnih, rekreacijskih, kućnih i industrijskih otpadaka.

osnova

Za mikrobiološku analizu nekih uzoraka, korak prethodnog obogaćivanja neophodan je za vraćanje određenog mikroorganizma koji može biti u vrlo maloj količini ili u nepovoljnim uvjetima koji narušavaju ili minimiziraju njegovu održivost.

Takav je slučaj suhe i prerađene hrane, moguće onečišćene Salmonellas sp. U tim slučajevima, ako su prisutne bakterije, pretrpjele su fizičku i kemijsku zlouporabu tijekom procesa proizvodnje proizvoda.

Na takav način da su mikroorganizmi izloženi nepovoljnim čimbenicima kao što su dehidracija, izloženost inhibicijskim ili toksičnim proizvodima i preklapanje nastalo prisustvom drugih bakterija u većoj količini, između ostalih.

U tom smislu, laktozni bujov ima popravljajući učinak na oštećene strukture mikroorganizma, zbog čega se on oporavi i razmnožava, na takav način da ga se otkrije.

Isto tako, laktozni juha ima sposobnost razrjeđivanja inhibicijskih tvari koje mogu utjecati na njegovu vitalnost, omogućavajući njegov razvoj. Uz to, prehrambeni sastav laktozne juhe strateški je favorizirati rast Salmonella sp u odnosu na druge mikroorganizme.

Za konačno prepoznavanje mora se subkultivirati drugim konačnim kulturama.

S druge strane, sastav medija omogućuje i otkrivanje mikroorganizama koji fermentiraju laktozu koji stvaraju plin.

priprema

Za pripremu litre laktozne juhe potrebno je izvagati 13 grama dehidriranog medija i otopiti u 1000 ml destilirane vode.

Da bi se otopio medij u vodi, otopina se može malo zagrijati, ali ne previše.

Jednom kada je homogena, otopina se priprema na sljedeći način: ako se juha koristi za traženje koliformnih oblika, priprema se stalak za epruvete u koji se stavljaju Durhamove epruvete za fermentaciju naglavačke.

Durhamova cijev vrlo je važan detalj, jer će omogućiti otkrivanje stvaranja plinova, podataka od velike vrijednosti u potrazi za koliformama.

Nakon što su epruvete spremne, u njih se raspodijeli 10 ml laktozne juhe, količina koja mora biti dovoljna da pokrije cijelu Durhamovu epruvetu.

Ako se juha od laktoze koristi kao podloga za obogaćivanje, nije potrebno stavljati Durhamovu epruvetu za fermentaciju. U ovom slučaju potrebna je veća količina medija (225 ml) koja će se poslužiti u bočicama od 500 ml, širokih usta i s termo-otpornim vijčanim poklopcem.

Nakon toga epruvete ili tikvice se autoklaviraju na 121 ° C tokom 15 minuta.

Medij mora ostati pri krajnjem pH od 6,9 ± 0,2 pri 25 ° C.

Bujoni se čuvaju u hladnjaku do upotrebe.

Prije upotrebe, juhe se moraju dovesti na sobnu temperaturu.

S druge strane, laktozni juha se može pripremiti i u dvostrukoj koncentraciji.

Neki laboratoriji dodaju bromokresol ljubičasti laktozni bujon kao pH indikator, kako bi pokazali epruvete u kojima je laktoza fermentirala zbog promjene boje. U tom slučaju juha poprima ljubičastu boju, a ako postoji fermentacija, postaje žuta.

Prijave

U mikrobiološkim laboratorijima laktozni juh se široko koristi, jer je relativno jeftin medij koji nudi pouzdane i brze rezultate (24-48 sati).

Može se koristiti za analizu ukupnih i fekalnih koliforma u hrani i vodi ili kao pre-obogaćujuća juha na salmonelu.

Pre-obogaćivanje

Pred obogaćivanje je korak prije obogaćivanja uzorka, što uvelike poboljšava oporavak bakterija roda Salmonella u prerađenoj hrani.

Da biste to učinili, uzorak čvrste hrane (25 grama) ili tekućine (25 ml) zasijava se u 225 ml laktozne juhe, inkubirajući 24 do 48 sati. Nakon toga će se subkultivirati u obogaćenom mediju kao što je selenitni cistinski bujon ili tetrationatirani juh. Zatim prijeđite na XLD i SS selektivne medije.

Totalna i fekalna analiza koliforma

Odličan je medij kao pokazatelj fekalne kontaminacije.

Iz tog razloga, laktozni juh je idealan za pretpostavljenu fazu ispitivanja koliformnih oblika metodom najvjerojatnijeg broja.

Za uzorke u kojima se sumnja na veliku količinu koliformi, inokulirat će se manja količina (1 ml), dok će se za uzorke u kojima postoji sumnja na manju količinu koliformi povećati volumen uzoraka (10 ml).

Za analizu se prave 10 ^-1, 10 ^-2, 10 ^-3 razrjeđenja, tvoreći bateriju s 3-5 epruveta za svaku upotrijebljenu koncentraciju.

Svakim razrjeđivanjem iznose se isti volumen u mliječne mehurice.

Epruvete se inkubiraju 24 sata. Negativne juhe se inkubiraju tokom narednih 24 sata.

Tumačenje rezultata provodi se promatranjem dvije karakteristike: prva je prisutnost ili odsutnost zamućenosti, a kako ovaj medij ne sadrži pH indikator, neće doći do promjene boje.

Drugi je proizvodnja plina ili ne. Plin se lako vidi u Durhamovoj cijevi pojavom jednog ili više mjehurića zraka unutar njega.

Smatra se pozitivnim ako se promatraju obje karakteristike, odnosno zamućenost pri proizvodnji plina. Pozitivne epruvete treba ponovo posijati u sredstva za potvrđivanje (2% Briljantni zeleni žuč i EC bujon).

Kontrola kvalitete medija

- Prilikom pripreme medija važno je ne zaboraviti staviti Durhamsove epruvete, ako je svrha iste ispitivanje koliformi.

- Nemojte pregrijavati medij prije sterilizacije.

- Raspodijelite u epruveti prije sterilizacije, nikako nakon sterilizacije.

- Ne koristite ako je medij stariji od 3 mjeseca.

- Ne koristite ako primijetite bilo kakve promjene uobičajenih karakteristika medija.

- Prilikom pripreme šarže laktozne juhe testirajte njezinu kvalitetu sjetvom poznatih sojeva poput Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii i Klebsiella pneumoniae. Raste vrlo dobro, uz proizvodnju plina (pozitivna kontrola).

- Može uključivati ​​i Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium ili Enterococcus faecalis, koji dobro rastu, ali bez proizvodnje plina (Negativna kontrola).

- Treba napomenuti da je izvorna boja dehidriranog medija bež, a boja pripremljenog medija vrlo svijetla i prozirna žuta. Ako se primijeti promjena u boji ili izgledu, može se pogoršati.

Reference

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biološka okoliš i mikrobiologija. (2013) 1. izdanje. Sveučilište Cartagenas, Kolumbija.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B i Velázquez O. (2009). Tehnike mikrobiološke analize hrane. 2. izd. Kemijski fakultet, UNAM. Meksiko.
3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Laktozna juha dvostruka koncentracija (Europska Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Usporedba tehnika ekstrakcije koliformnih bakterija iz sedimenta jezera Xochimilco, Meksiko. Vlč. Microhiol. 2013 45 (3): 180-184. Dostupno na: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Određivanje mikrobiološke kvalitete arterijskih bušotina u područjima središnjih odjela, Cordillera i glavni grad. Mem. Inst. Istražiti. Znanost. Zdravlje 2013; 11 (1): 5-14. Dostupno od: scielo.iics.