EC JUHA: TEMELJ, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

Bujon EC ili bujon Escherichia coli je selektivni tekući medij kulture. Standardne metode preporučuju ovaj medij za brojanje ukupnih i fekalnih koliformi, najvjerojatnijom brojevnom tehnikom (MPN) u uzorcima vode i hrane, gdje je glavni uzročnik Escherichia coli.

EC juha se sastoji od tripteina, laktoze, žučnih soli, dikalijevog fosfata, monokalijevog fosfata, natrijevog klorida i vode. Njegova je formula strateški zamišljena da favorizira rast ukupnih i fekalnih koliformi i spriječi razvoj drugih pratećih mikroorganizama.

Grafički prikaz pripreme EC bujona. Izvor: Pixabay.com

Bakterija Escherichia coli glavni je fekalni koliform prisutan kao zagađivač u izvorima vode i hrane, uzrokujući važne probavne smetnje.

Treba napomenuti da postoji mnogo serotipova Escherchia coli; Među njima možemo spomenuti enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopatogeni (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) i enteroagregativ (EAEC).

Ovaj medij ima mogućnost omogućiti razvoj svih njih, ali bez mogućnosti da ih se razlikuje. Ovo zahtijeva dodatno ispitivanje.

Mikrobiološka studija vode i hrane po najverovatnijem broju (MPN) radi pretraživanja ukupnih i fekalnih koliformi protokol je koji se sastoji od nekoliko faza; pretpostavljena faza, potvrdna faza i završna faza. EC juha koristi se u potvrdnoj fazi.

osnova

EC juha

EC medij zasnovan je na pružanju prehrambenih elemenata potrebnih za optimalan razvoj ukupnih i fekalnih koliforma u koje su uključene bakterije Escherichia coli.

Ove prehrambene elemente osigurava triptein, što je izvrstan izvor peptida i aminokiselina. Uz to, sadrži i laktozu, fermentirani ugljikohidrat koji daje energiju i omogućava pokazati da li bakterije proizvode plin.

S druge strane, medij sadrži žučne soli koje daju selektivni karakter, jer inhibira rast gram-pozitivnih mikroorganizama koji mogu biti prisutni u uzorku.

Isto tako, kalijev fosfat i mono kalijev fosfat djeluju kao sustav za uravnoteženje pH. Ovaj sustav je potreban, jer laktoza koja se nalazi u juhi teži zakiseljavanju medija kada fermentiraju mikroorganizmi, ali to nadoknađuju fosfatnim solima.

Stoga su ovi elementi od ključne važnosti, jer nekontrolirana kiselost može utjecati na pravilan razvoj traženih mikroorganizama.

Natrijev klorid sa svoje strane osmotski stabilizira medij, dok je voda otapalo za prisutne otopljene tvari i pruža tekuću konzistenciju mediju.

Novobiocin modificirani EC brod

Okrend i Rose stvorili su razni EC juha, koja se naziva novobiocinski modificirani EC juha. Modifikacija se sastojala od smanjenja koncentracije žučnih soli i dodavanja 20 mg / dl novobiocina.

Ova modifikacija pogoduje oporavku enterohemoragičnih sojeva Escherichia coli (O157: H7).

Ovaj bakterijski serotip uzrokuje teški hemoragični kolitis koji može dovesti do hemolitičkog uremičkog sindroma (HUS); što zauzvrat može stvoriti akutno zatajenje bubrega, s visokom stopom smrtnosti koja u starijih osoba može doseći i do 50%.

Zbog morbiditeta i smrtnosti koje ova bakterija godišnje izaziva uslijed konzumiranja kontaminirane hrane, Ministarstvo poljoprivrede Sjedinjenih Država (USDA) toplo preporučuje uporabu ovog medija.

priprema

EC juha

Masira se 37,4 g dehidriranog medija i otopi se u 1 litri destilirane vode. Smjesu treba ostaviti da stoji 5 minuta. Zatim se u izvoru topline završava otapanjem uz često miješanje.

Kad se otopi, distribuira se u prethodno pripremljene epruvete s Durhamovom epruvetom. Sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 minuta.

PH sredstva treba biti 6,9 ± 0,2. Boja dehidriranog medija je bež, a pripremljeni medij svijetlo je jantarna.

Bujoni se čuvaju u hladnjaku do upotrebe. U vrijeme upotrebe, juhe moraju biti na sobnoj temperaturi.

S druge strane, EC juha se može pripremiti i u dvostrukoj koncentraciji.

Novobiocin modificirani EC brod

Odvažite 36,7 g dehidriranog medija i otopite u 1 litri vode. Ostatak pripreme je isti kao što je gore opisano.

Koristiti

Totalna i fekalna analiza koliforma

EC juha je idealna za potvrdnu fazu ispitivanja koliformnih oblika NMP metodom, kako u uzorcima vode, tako i u farmaceutskim proizvodima i hrani.

Mutne, bujne laktozne bujone dobivene u pretpostavljenoj fazi treba ponovno zasijati u 2% žučne i zelene juhe.

Za ukupne koliforme, EC bujice inkubiraju se aerobno 24 do 48 sati na 37 ° C, a za fekalne koliformu se aerobno inkubiraju 24 do 48 sati na 44 ° C.

U oba se slučaja tumači na sljedeći način: mutne cijevi s proizvodnjom plina smatraju se pozitivnim. Ako ne dođe do proizvodnje plina za 24 sata, inkubacija se nastavlja do 48 sati.

EC pozitivni brojevi prelaze u potpunu potvrdnu fazu koja se sastoji od ponovne ponovne selekcije medija kao što su Mac Conkey agar, EMB agar ili Endo agar.

Ako se juha koristi EC iz novobiocina, preporučuje se ponovno zalijevanje pozitivnih epruveta na Mac Conkey agar sorbitolom.

QA

Svaka šarža pripremljenog medija mora biti kontrolirana kvalitetom. Prvo, mora se procijeniti sterilnost medija. U tom smislu, jedan ili dva podloga inkubiraju se bez inokulacije u aerobiozi tijekom 24 sata na 37 ° C. Očekivani rezultat je proziran preljev, bez zamućenja ili promjene boje.

Drugo, mora se procijeniti rast poznatih sojeva, za to se mogu koristiti sljedeće bakterije: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

U svim slučajevima se očekuje zadovoljavajući razvoj mikroba, promatrajući oblačan juh s proizvodnjom plina za E. coli i bez plina za salmonelu.

Ostali sojevi koji mogu biti uključeni u kontrolu su: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Ovi sojevi moraju se potpuno inhibirati.

preporuke

-Postavljanje Durhamovih epruveta važno je za proučavanje koliformnih oblika.

-Podijelite medij u epruvetama prije sterilizacije, nikako nakon.

-Ne upotrebljavajte ako je medij stariji od 3 mjeseca.

-Ne koristiti ako primijetite bilo kakve promjene uobičajenih karakteristika medija.

Reference

1. Britannia Laboratories. EC Medium. 2015. Dostupno na: britanialab.com
2. Enterohemoragični E. coli. Centar za sigurnost hrane i javno zdravstvo. 2010. Dostupno na: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. EC medij. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Novobiocin modificiran EC medij. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Otkrivanje, izolacija i karakterizacija Escherichia coli koja proizvodi Shiga toksin iz svježeg mljevenog mesa mesara u Concepción, provincija iz Tucumána. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Dostupno na: www.scielo.org.