NEUBAUEROVA KOMORA: POVIJEST, KARAKTERISTIKE, UPORABE - BIOLOGIJA

Neubauer komora, hematometer ili hemocitometra je laboratorijska sredstvo se sastoji od posebnog guste staklene ploče. Ovaj fotoaparat koristi se za određivanje broja nekih tipova stanica poput crvenih krvnih zrnaca, bijelih krvnih zrnaca i trombocita, iako se može koristiti za brojanje spora, sperme, parazita itd.

Predstavlja neke vrlo osebujne karakteristike, jer se sastoji od 3 zone, središnje za brojanje i dvije potporne zone. Svaka komora ima dvije zone brojanja ili križne dlake, jednu na vrhu i jednu na dnu.

Neubauerova komora. Izvor: SantiBadia. Uređena slika.

Oni imaju više podjela u obliku rešetke. Područja za brojanje su srednji kvadratni kvadratići na 4 ugla obje mreže, plus središnji trg.

Sastavljanje fotoaparata mora biti vrlo pažljivo jer bilo koji detalj utječe na broj ćelija. Moguće je mnogo grešaka, no ako se dogodi bilo koja od njih, fotoaparat je potrebno rastaviti, očistiti i ponovno sastaviti. Glavne pogreške uključuju sljedeće:

Prelijevanje komore ili nedovoljno punjenje, ostavlja komoru da se osuši, pokušaj uklanjanja viška tekućine gazom, naginjanje komore prilikom transporta, punjenje prljave ili mokre komore, ne miješanje razrjeđenja ili uzorka, između ostalog. Sve ove pogreške rezultirat će nestvarnom vrijednošću.

Povijest

Neubauerova komora je precizan instrument, a proces proizvodnje prolazi strogu kontrolu kvalitete. Stvoren je za precizno brojanje čestica ili formiranih elemenata po mm ³, poput stanica u raznim tekućinama. Njegova osjetljiva grafika uklesana je dijamantskom olovkom.

Karakteristike Neubauerove komore

Čitava komora je veličine normalnog tobogana tako da se može postaviti na pozornicu mikroskopa.

Komora se sastoji od tri središnje pravokutne površine (a, b, c). U zoni „b“ nalazi se R zona ili zona brojanja, koja se još naziva i retikulum. Jedna sa svake strane kamere, odvojena zonom "d".

Grafički dijagram Neubauerove komore. Izvor: Praktični vodič za hematologiju. Škola bioanalize na Sveučilištu Carabobo, Venezuela.

Svaka rešetka je polirano područje koje sadrži ugravirano područje za brojanje. Sastoji se od kvadrata s površinom od 9 mm ² i interno je podijeljen na 9 kvadrata s površinom od 1 mm ² svaki. Četiri kvadratna ugla podijeljena su na 16 manjih kvadrata (površine 0,0625 mm ²).

Ove mreže formirane su nizom milimetarskih linija koje se presijecaju jedna s drugom, a čine savršeno grabljene rešetke ograničene na specificirana mjerenja. Ove su crte urezane dijamantskim vrhom.

Poboljšani Neubauerov retikulum. Izvor: Praktični vodič hematologije škole bioanalize Sveučilišta u Carabobou, Venezuela.

Četiri strane odgovaraju području za brojanje. Upravo se na tim stranama ili na uglovima broji većina stanica (crvenih krvnih zrnaca i leukocita), dok se trombociti broje u središnjem području.

Središnja zona ima više odjela, sastoji se od 1 mm ² kvadrata podijeljenog u 25 kvadrata s površinom od 0,04 mm ². Oni su zauzvrat podijeljeni u 16 rešetki s površinom od 0,0025 mm ².

Opis poboljšanog Neubauerovog retikuluma. a) kvadrat ugla, b) središnji trg, c) medijalni kvadrat središnjeg trga. Izvor: Praktični vodič hematologije škole bioanalize Sveučilišta u Carabobou, Venezuela.

Zone „a“ i „c“ služe kao potpora za postavljanje posebnog pokrovnog predmeta koji se naziva hematometrički poklopac ili hematimetar.

Visina između folije i površine za brojanje je 0,1 mm. Mjerenja površine polja za brojanje, kao i visine komore i razrjeđivanje uzorka, potrebni su za konačne proračune.

Prijave

Koristi se za brojanje stanica. Osobito je od pomoći u hematološkom području jer omogućuje brojanje tri serije krvnih stanica; tj. crvena krvna zrnca, bijela krvna zrnca i trombociti.

No može se koristiti i u drugim područjima, na primjer za prebrojavanje sperme, spore, bakterija ili drugih važnih predmeta, ovisno o vrsti uzorka.

Kako koristiti?

Priprema uzoraka

Da bi se odredio broj stanica, obično se započinje s prethodnim razrjeđivanjem. Primjer: za brojanje bijelih krvnih zrnaca pripremite razrjeđenje 1:20 s Turkinovom tekućinom. Razrjeđivanje se miješa dobro prije punjenja pipete i ugradnje Neubauerove komore.

Postoje slučajevi kad razrjeđivanje od 1:20 nije dovoljno za brojanje. Na primjer, u bolesnika koji pate od određenih vrsta kroničnih leukemija. U tim slučajevima treba napraviti veća razrjeđenja poput 1: 100.

Ako je, s druge strane, brojka vrlo mala, kao kod teških leukopenija, može se postići manja razrjeđenja za koncentriranje uzorka. Primjer: možete napraviti razrjeđenje od 1:10.

Promjene koje su napravljene utječu na izračune.

Ugradnja Neubauerove komore

Neubauerova komora sastavlja se postavljanjem hematometrijskog klizača u središnje područje. Oba moraju biti vrlo čista i suha. Za postavljanje lamele ona se uzima za rubove i lagano se spušta na kameru.

To se puni postavljanjem vrha Thoma automatske pipete ili pipete pod kutom od 35 ° na rub zone utovara. Tekućina se glatko odvodi, a područje utovara popunjava kapilarno. To se radi s obje strane kako bi se učvrstile dvije križne glave.

Ne smije se preopterećivati mrežicama, niti ih treba uskratiti. Opterećenje mora biti točno. Važno je da se punjenje vrši homogeno, odnosno da ne bi trebalo biti mjehurića.

Jednom kada se komora sastavi, ostavi se da odmara 2 minute kako bi se stanice taložile na dnu i njihova vizualizacija i brojanje je lakše.

Nakon vremena odmora postavlja se na pozornicu svjetlosnog mikroskopa radi promatranja. Prvo se fokusira s 10X ciljem, a ako je potrebno onda prelazi na 40X.

Da bi se poboljšala njegova vizualizacija, propušta se svjetlost iz mikroskopa. Da biste to učinili, kondenzator se spušta, a dijafragma je lagano zatvorena.

brojanje

Za brojanje bijelih krvnih stanica ili leukocita mora se računati cijela površina četiriju srednjih kutnih kvadrata i središnji kvadrat svakog retikuluma.

Brojanje započinje s kvadratom u gornjem lijevom kutu. Počinjete od prvog kvadrata prvog reda, dakle s lijeva na desno sve dok ne dođete do suprotnog kraja.

Tamo se spustite i pogledate natrag s desna na lijevo dok ne dođete do drugog kraja, i tako dalje, ćelije unutar svake rešetke broje se cikcak. Računa se 16 rešetki svakog srednjeg trga.

Da biste izbjegli brojanje ćelija dva puta, postoje pravila o ćelijama koje se nalaze na graničnim linijama svake mreže. Stanice u lijevoj i gornjoj liniji broje se, a stanice u desnoj i donjoj liniji se zanemaruju.

Ručni brojač ćelija mora biti dostupan tako da operater pritisne tipku uređaja onoliko puta koliko je promatranih ćelija. Pomoću brojača, operator može računati bez potrebe za gledanjem iz mikroskopskog polja. Na kraju brojanja vidjet ćete ukupan broj prebrojanih ćelija.

izračuni

Za izračune možete nastaviti na nekoliko načina. Jedna se mrežica može računati ili se oboje mogu prebrojati i obje su prosječne. U ove dvije situacije prebrojane ćelije moraju se pomnožiti s faktorom, što bi u ovom slučaju bilo 40. I tako se dobiva ukupno brojanje po mm ³.

Ali ako se računaju dvije mreže, a ne uzima se prosjek, mora se pomnožiti s različitim faktorom, u ovom slučaju s 20.

- Faktor množenja

Evo kako se izračunava faktor množenja.

Za proračun se uzimaju u obzir različiti podaci, uključujući titar razrjeđenja, visinu komore i prebrojanu površinu.

Razrjeđivanje

Korišteno standardno razrjeđenje je 1:20 za broj leukocita.

Visina komore

Visina između komore i lima krvnih stanica je 0,1 mm.

Brojčano područje

Ako se računa 5 kvadrata površine 1 mm ², to znači da je ukupna površina brojanja 5 mm ². Ti se podaci moraju pomnožiti s visinom komore da bi se dobio ukupni prebrojeni volumen. Odnosno, 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³.

Formule i proračuni

Uz podatke koje imamo, kaže se:

Ako je u 0,5 mm ³ - broji se broj stanica

U 1 mm ³ --- postojat će - X n ° stanica

X broj stanica = (br. Broja stanica broji x 1) / 0,5 mm ³

Ali razrjeđivanje se također mora uzeti u obzir. Stoga je formula sljedeća:

(broj prebrojanih stanica x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Konačno, ukratko, broj prebrojanih stanica može se pomnožiti s 40. Tako se dobiva vrijednost leukocita po mm ³.

Ako se računaju dvije mrežice, podaci za prebrojano područje se mijenjaju, što bi u ovom slučaju bilo 10 kvadrata, to jest 10 mm ². I ukupni prebrojeni volumen od 1 mm3. Formula bi bila:

(broj prebrojanih stanica x 1) x 20/1 mm ³

Stoga bi u ovom slučaju faktor množenja bio 20.

greške

-Ako se prilikom utovara fotoaparata premaši ili premaši tekućina, visina kamere će se razlikovati. Zbog toga je brojbroj veći od stvarnog. Ako pokušate ukloniti višak gazom ili pamukom, ovo je ogromna pogreška. Ovo djelovanje dovest će do koncentracije stanica, povećavajući broj.

-Ako se loše učita, broj će biti manji od stvarnog.

-Ako je kamera montirana i ostavljena da se osuši, više je nije moguće brojati, jer će dati pogrešne rezultate.

-Ako se razrjeđivanje uzorka ne pomiješa dobro prije punjenja komore, postoji rizik od pogreške u očitanju, jer stanice neće biti homogeno raspodijeljene. Zbog toga će doći do niže ili veće koncentracije stanica, ovisno o tome uzima li se uzorak s površine tekućine, odnosno s dna epruvete.

- Prisutnost mjehurića smanjuje količinu tekućine koja mora ući u retikulum ometajući pravilnu vizualizaciju i raspodjelu stanica. Sve to značajno utječe na rezultate.

- Tijekom brojanja, ne podižite pogled sa mikroskopa sve dok svaki veliki kvadrat nije dovršen kako se ne biste izgubili.

-Jedan razlog pogreške je naginjanje fotoaparata nakon montiranja. Iz tog razloga pozornicu mikroskopa treba pažljivo podići.

Preporuka

Ako iz bilo kojeg razloga otkrijete nepravilnosti u punjenju komore, preporučuje se rastaviti taj pripravak, očistiti komoru i sastaviti ispočetka.

Pri čišćenju fotoaparata budite vrlo oprezni kako ne biste ogrebali poprečne dlake. S druge strane, budite svjesni da je hematometrički tobogan osjetljiv i krhki. Nepravilno rukovanje može ga slomiti.

Prije nego što započnete brojanje, provjerite je li ćelije dobro raspoređene. Neravnomjerna raspodjela stanica nastala je lošim miješanjem uzoraka ili razrjeđivanjem. Ako se to dogodi, montaža se mora ponoviti.

Jedan od načina da se zna jesu li stanice dobro raspoređene je usporedbom broja svakog velikog kvadrata, broj stanica za svaki kvadrat ne bi trebao biti pretjerano različit od jedne do druge.

-Ako je broj bijelih krvnih stanica iznad 50 000 mm ^3, preporučljivo je ponoviti brojanje, što je veće razrjeđivanje.

-Ako promijenite razrjeđenje, morate ponovno izračunati faktor množenja, jer to utječe na formulu.

Reference

Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Usporedba koncentracije sperme pomoću Maklerove komore i Neubauerove komore. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Dostupno na: scielo.
Neubauerova komora. (2018., 27. ožujka). Wikipedia, Slobodna enciklopedija. Datum savjetovanja: 04:10, 23. lipnja 2019. s es.wikipedia.org
Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Primjena alternativne metode brojanja u Neubauerovoj komori za određivanje koncentracije Trichomonas vaginalis. Vlč. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Dostupno na: researchgate.net
Gómez-Pérez Roald E. Analiza spermograma. Vlč. Venez. Endocrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Dostupno na: ve.scielo
Praktični vodič za hematologiju Škole za bioanalizu Sveučilišta u Carabobou. Venezuela, 1998

NEUBAUEROVA KOMORA: POVIJEST, KARAKTERISTIKE, UPORABE - BIOLOGIJA - 2026