BIURET: OBRAZLOŽENJE, REAGENSI, POSTUPAK, UPOTREBE - BIOLOGIJA - 2026

Biureta je reagens koji se koristi za određivanje proteina dugog lanca i kratkog lanca. Posebno se koristi u području analitičke kemije i analize mokraće za ispitivanje koncentracije ukupnih proteina u serumu, plazmi i urinu.

Vrijednosti proteina mogu se povećati ili smanjiti kod određenih patologija. Simptomi hipoproteinemije obično se javljaju kod bolesnika s bubrežnom bolešću, kod neuhranjenih bolesnika i kod bolesnika s kroničnim infekcijama.

Kemijska struktura kompleksa formirana testom Biureta s pozitivnim biuretom. Izvor: Yikrazuul / flickr

Dok se hiperproteinemija opaža u patologijama kao što su multipli mijelom, sistemski eritematozni lupus, bakterijski endokarditis, bakterijski meningitis, Waldenstromova makroglobulinemija, među ostalim.

S druge strane, prisutnost proteina u mokraći nastaje zbog filtracije albumina putem bubrega. Ovo je patološko ponašanje koje se mora proučiti.

U tom je smislu biuret vrlo koristan jer omogućuje kvantificiranje prisutnosti proteina u serumu, plazmi, urinu, među mnogim drugim uzorcima.

Čak se i Biuret može koristiti za ispitivanje prisutnosti i koncentracije proteina u slabo istraženim uzorcima ili uzorcima nepoznatog sastava. Stoga se široko koristi u istraživačkom području.

Biuretov test temelji se na otkrivanju peptidnih veza. Ispitivanje se odvija u alkalnom mediju. Uzorak mora sadržavati najmanje dvije peptidne veze da bi se mogao oblikovati ljubičasto-ljubičasti kompleks. Kompleks nastaje spajanjem veza i iona bakra.

osnova

Biuretov reagens sastoji se od kalijevog hidroksida, kurirskog sulfata, te natrijevog i kalijevog tartarata. Natrijev hidroksid koristi se za alkalizaciju medija jer je ovo stanje bitno za reakciju.

Tvari koje reagiraju s proteinima je kapriov sulfat, dok natrijev tartarat ima funkciju ne dopuštajući stvaranje bakrenog hidroksida, koji ima tendenciju taloženja i ometa reakciju.

Ako se u uzorku nađu tvari s peptidnim vezama (polipeptidi ili proteini), test će biti pozitivan.

Reakcija se tumači kao pozitivna kad otopina postane ljubičasta. Boja se dobiva formiranjem kompleksa između najmanje dvije peptidne veze koje imaju CO-NH skupinu i kaprionske katione.

Ljubičasti kompleks može se formirati na dva načina: jedan je gubitkom protona iz amidnih skupina koje se vežu za metal (depronotacija), a drugi sjedinjenjem elektrona kisika i dušika koji su slobodni i vežu se s bakrom.

Ova reakcija može varirati u intenzitetu i boji, ovisno o vrsti proteina.

Ispitivanje se može obaviti kvalitativno ili kvantitativno. U kvalitativnom obliku izvještava se kao pozitivno ili negativno. Dok se u kvantitativnom obliku koncentracija može mjeriti spektrofotometrijskom metodom.

Reakcija se očitava između 540-560 nm. Intenzitet boje izravno je proporcionalan koncentraciji peptidnih veza u uzorku.

Reagensi

-20% natrijevog hidroksida (NaOH)

-Cupric sulfat pentahidrat 1% (CuSO _4. 5H ₂ O)

-Mixed natrij i kalij tartarata tetrahidrat (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

Stabilnost reagensa biureta

-To se mora držati u hladnjaku.

Postupak

Tehnika

- Stavite 100 ul uzorka ili standarda koji se analizira u epruvetu.

-Dodajte 2 ml natrijevog hidroksida.

- Dobro miješajte.

-Dodajte 5 ml biuretskog reagensa.

-Miješajte i ostavite da se odmara 25 minuta na sobnoj temperaturi, poklopite i zaštitite od svjetlosti.

- Promatrajte formiranje ili ne boje i izmjerite spektrofotometrijski.

Kalibracijska krivulja

Albumi goveđeg seruma mogu se koristiti kao standard za izvođenje kalibracijske krivulje. Iz njega se pripremaju različite koncentracije. Na primjer 25, 50, 75, 100, 125 i 150%.

Reakcija se postavi sa svim tim poznatim koncentracijama i očita se apsorbancija na valnoj duljini od 540 nm. Uz podatke poznatih koncentracija i očitanja apsorpcije izrađuje se kalibracijska krivulja.

Za svako određivanje ili seriju obrađenih uzoraka preporučuje se ugraditi standard. Album goveda serumski albumin 0,1-2 mg / ml može se koristiti kao standard za kalibraciju.

Mjerenja su izvršena na spektrofotometru na 540 nm.

Linearnost je zadovoljena do koncentracije od 12 g / dl.

interferencija

Tvari koje ometaju Biuretov test

Iako nije vrlo čest, treba imati na umu da neke tvari mogu ometati tijekom izvođenja ovog ispitivanja. Na primjer, prisutnost amonijaka može spriječiti stvaranje boja.

Isto tako, druge tvari mogle bi apsorbirati na istoj valnoj duljini, poput određenih pigmenata.

S druge strane, smetnje se mogu stvoriti kada tvar koja nije peptidna veza tvori kompleks s bakrovom soli. Primjer: neki ugljikohidrati i određeni lipidi.

U slučaju da uzorak koji se analizira ima neku vrstu taloga, on se mora filtrirati ili centrifugirati prije postavljanja testa.

Tvari koje ne ometaju Biuretov test

Na test ne utječe prisutnost:

-Bilirubin do koncentracije 20 mg / dl.

-Hemoglobin do koncentracije od 750 mg / dl.

-Dekstran do koncentracije 30 g / L.

-Trigliceridi do koncentracije 4000 mg / dl.

Prednost

-To je jednostavna metoda za izvršenje.

-To je ekonomski test.

-Ima visoku specifičnost za proteine.

-Malo smetnje.

Nedostaci

Ima slabu osjetljivost za otkrivanje male količine proteina. Rad koji su proveli Fuentes i ostali, potvrđuje da biuretska testna metoda ima granicu detekcije od 1 mg / ml proteina i granicu kvantifikacije od 3 mg / ml.

Međutim, druga istraživanja provedena na Sveučilištu u Amazoniji navode mnogo niže vrijednosti. Granica detekcije izviještena u studiji je 0,020 mg / ml, a granica kvantifikacije je 1,33 mg / ml.

Prijave

Biuretov reagens ili test koristi se za određivanje proteina u kliničkim i nekliničkim uzorcima u rutinskim i istraživačkim laboratorijama.

Patologije koje se javljaju s povećanjem ili smanjenjem

U mnogim patologijama važno je odrediti koncentraciju ukupnih proteina u kliničkim uzorcima, koja može biti povećana ili smanjena.

Povišene su u:

-Multipli mijelom, -Sistemski eritematozni lupus, -Bakterijski endokarditis, -Bakterijski meningitis, Waldenstromova makroglobulinemija, među ostalim.

Smanjuje se u:

- bubrežna insuficijencija, -Ljudi s teškim stupnjem neuhranjenosti, - Pacijenti s kroničnim infekcijama, između ostalih.

Klinički uzorci

Najčešći klinički uzorci su serum, plazma i urin. Normalna vrijednost proteina u serumu ili plazmi je 6,0-8,8 gr / dl.

Koncentracija proteina u urinu kod odraslih ne prelazi brojku od 150 mg / 24 sata.

Omjer proteina i urina kreatinin u urinu normalna vrijednost

Dojenčad: <0,50 mg

Djeca 2 godine i starija: indeks: 0,20 mg

Odrasli: <0,2 mg

Neklinički uzorci

Biuretska reakcija može se koristiti za mnoge vrste nekliničkih uzoraka, poput mliječnih proizvoda, antivenom ili bilo koje nepoznate tvari za koju želite istražiti prisutnost proteina.

Reference

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). Fizikalno-kemijska karakterizacija i sadržaj bjelančevina u tekućim ekstraktima mangrove ostrige (Crassostrearizophorae). Kubanski časopis za kemiju, 26 (1), 66-74. Preuzeto 26. lipnja 2019. s http: //scielo.sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Funkcionalna karakteristika badema sjemenki manga (Mangifera indica L.) Revista Ciencia en Desarrollo. 2015 6 (1): 67-75
3. „Biureta”. Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 19. lipnja 2019., 16:37 UTC. 26. lipnja 2019., 22:18
4. Fuentes F, Quispe I, García J. Standardizacija biuretske metode za kvantificiranje ukupnih proteina u polivalentnom antibotropnom serumu proizvedena u Nacionalnom centru za biološke proizvode INS. Bol - Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). Dostupno na: repositorio.ins.gob.pe
5. Winer Laboratories. Ukupni proteini. Kolorimetrijska metoda za određivanje ukupnih proteina u serumu i plazmi. Dostupno na: wiener-lab.com.ar