MRLJA OD GRÜNWALD-GIEMSA: OBRAZLOŽENJE, TEHNIKA I NAČINI UPOTREBE - BIOLOGIJA - 2026

May Grünwald-Giemsa ili Pappenheim mrlja je diferencijal bojenje tehnika koja se miješa Giemsinom i May Grünwald reagensi. Upotrebljava se za diferencijaciju normalnih i abnormalnih krvnih stanica u perifernom razmazu krvi i koštane srži, kao i za bojenje histoloških odsjeka i citoloških uzoraka.

Oba reagensa - Giemsa i May Grünwald - izvedena su iz bojenja Romanowskog, tehnike koja se temelji na kombinaciji kiselih i bazičnih boja.

Razmaz koji pokazuje segmentirani neutrofil i mileocit u slučaju kronične mijeloidne leukemije, obojen bojom May Grünwald Giemsa. Dr. Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) putem Wikipedije.org.

Giemsa je poboljšala tehniku ​​stabiliziranjem smjese eozina, metilen plave boje i njihovih derivata s glicerolom. Umjesto toga, May Grünwald koristi eozin i metilen plavu boju, koristeći metanol kao otapalo. Ova strateška kombinacija dala je izvrsne rezultate.

Iako u pogledu promatranja stanične morfologije djeluje na sličan način kao na mrlje Giemsa i Wright, ova tehnika poboljšava prethodnu rafinirajući mrlje parazitima koji uzrokuju malariju, Chagasovu bolest, leishmaniasis i trihomonijazu.

Uz to, pokazalo se da je vrlo korisna tehnika za citološko istraživanje spermatične tekućine. Izdvojio se ne samo pokazujući morfološke karakteristike sperme, već i omogućavajući diferencijaciju leukocita, epitelnih stanica i stanica spermatogeneze s velikom učinkovitošću.

osnova

Tehnika slijedi temelj Romanowskog mrlja u kojem kisela bojila imaju selektivni afinitet prema osnovnim staničnim komponentama, a kisele komponente privlače osnovne mrlje.

Objašnjeno na drugi način, i stanične strukture i boje imaju pozitivne ili negativne električne naboje; poput odbijanja naboja, a različiti naboji privlače.

Na primjer, osnovne boje poput metilen plave boje pozitivno su nabijene i privlače ih negativno nabijene strukture. Zbog toga ova boja mrlja jezgre bogate DNK i RNK koje imaju negativno nabijene fosfatne skupine.

Granule segmentiranih bazofila i citoplazme mononuklearnih bijelih krvnih stanica koje sadrže RNA također su obojene.

Isto tako, kisela boja nosi negativan naboj, zbog čega se veže na pozitivno nabijene strukture poput eritrocita i granula segmentiranih eozinofila. Što se tiče granula segmentiranih neutrofila, ove fiksiraju obje boje.

Raznolikost boja

U ovoj tehnici postoji kombinacija reakcija između ortohromatskih i metahromatskih boja. Ortohromatika (eozin i metilen plavo) veže se na staničnu strukturu s kojom su povezani i daje stabilnu boju koja ne varira.

S druge strane, metahromati (derivati ​​metilen plave boje azura A i azura B) mijenjaju svoju izvornu boju nakon što se dodaju određenoj strukturi, pa čak mogu biti i razne nijanse.

Konačno, korak koji poduzima otopina May Grünwald zahtijeva prisustvo vode, jer bez toga boja će prodrijeti u strukture, ali se neće učvrstiti. Da bi se to dogodilo, boja mora postati polarna ili ionizirati i na taj način se moći istaložiti i vezati za povezane strukture.

Tehnika

materijali

- Klizne slajdove.

- Mostovi bojanja.

- rješenje May-Grünwald.

- Giemsa mrlja.

- Destilirana voda.

Neka Grünwald oboji koncentriranu otopinu

0,25 g eozin-metilen plave boje (mrlja prema May Grünwald) mora se izvagati i otopiti u 100 ml metanola. Zatim se pripravak miješa 1 sat i ostavi da odmara 24 sata. Kad vrijeme istekne, filtrira se.

Da bi se primijenila tehnika, May Grünwald boja treba razrijediti na sljedeći način: za 200 ml razrijeđene boje izmjeriti 30 ml koncentrirane otopine, dodati 20 ml otopine pufera i 150 ml destilirane vode prilagođene na pH 7,2-7,3, Kasnije se miješa i filtrira.

Giemsa koncentrat za mrlje

0,5 g azurno-eozin-metilen plave boje (mrlja prema Giemsa) mora se izvagati, otopiti u 50 ml metanola i 50 ml glicerina dodati u smjesu.

Za izvođenje tehnike razrijedite 1:10 s puferskom otopinom i ostavite da se odmara 10 minuta. Može se filtrirati ako je potrebno.

Priprema puferske otopine kod pH 7,2

Treba ih izvagati:

- 40 mg kalijevog di-hidrogenfosfata (KH2PO4).

- 151 mg di-natrij hidrogen fosfata 12-hidrata (Na2HPO4).

Oba spoja su otopljena u 100 ml vode.

Postupak bojenja mrlja krvi ili koštane srži

Postoje dva načina: klasični i brzi.

Klasični način rada

1. Pokrijte mrlje 2 do 3 minute razrijeđenom otopinom May-Grünwald.
2. Isperite s puferiranom destiliranom vodom da biste uklonili prethodnu otopinu.
3. Pokrijte istom puferiranom otopinom za pranje i ostavite 1 minutu. Ideja je da se prethodna boja pričvrsti na strukture i da su stanice istovremeno hidrirane.
4. Dodajte 12 kapi razrijeđene tinkture Giemsa u puhanu vodu i proključate da se pomiješa i homogenizira. Ostavite da odmara 15 do 20 minuta.
5. Operite mrlje s puferiranom destiliranom vodom i stavite da se osuši na zraku.
6. Usredotočite se i pregledajte obojene krvne stanice pod svjetlosnim mikroskopom pomoću cilja 40X. Po potrebi se može koristiti 100X.

Brzi način rada

1. Prekrijte razmazanu razrijeđenom majskom Grünwald mrljom 1 minutu.
2. Isperite vodom s puniranom destiliranom vodom.
3. Prekrijte puhanom vodom i ostavite da odstoji 1 minutu.
4. Dodajte razrijeđenu mrlju Giemsa i ostavite 5 minuta.
5. Operite s puniranom destiliranom vodom i ostavite da se osuši na zraku.

Ovdje opisane tehnike su smjernice, ali treba uzeti u obzir da se postupci i vrijeme bojenja razlikuju ovisno o trgovačkoj tvrtki koja distribuira reagense. Preporučljivo je slijediti korake strogo naznačene od svake trgovačke kuće.

Tehnika bojanja razmaza spermatične tekućine

1- Prekrijte razmaz tankim slojem May Grünwald otopine 4 minute.

2- Uklonite boju i isperite destiliranom vodom.

3- Stavite sloj razrijeđene Giemse (1:10) u destiliranu vodu na 15 minuta.

4- Uklonite boju i isperite destiliranom vodom.

5- Ostavite da se osuši i promatrajte pod mikroskopom.

Očekivane boje s May Grünwald Giemsa mrljom

Važne specifikacije

Tehnika zahtijeva da reagensi i otopine za pranje imaju pH podešen na 7,2 -7,3, tako da afiniteti boja za stanične strukture ne budu narušeni i očekivana konačna boja ne varira.

Prijave

Ovu tehniku ​​klinički laboratoriji koriste za bojenje mrlja periferne krvi i koštane srži, presjeka tkiva i citologije.

U hematološkom polju ova je tehnika od vitalne važnosti u proučavanju abnormalnosti stanica u pogledu oblika, veličine i broja. Vrlo je vrijedan alat za dijagnosticiranje određenih bolesti, poput leukemije i anemija.

Uz to, od izuzetne je koristi kada tražite parazite u hematološkom (Plasmodium sp i Trypanosoma cruzi) ili histološkom (Leishmanias sp) području.

Vaginalna citologija

Kada je riječ o vaginalnoj citologiji, ova je tehnika posebno povoljna za promatranje Trichomonas vaginalis. Ovo je važan nalaz, budući da njegova prisutnost simulira karcinom in situ slika koji kasnije nestaju kada se parazit eliminira.

Uzorak sperme

Bio je idealan alat za proučavanje uzoraka sperme, jer daje vrijedne informacije o kvaliteti sperme.

Podaci koje nudi uglavnom se odnose na broj i morfologiju, kao i na popratne stanice koje mogu biti prisutne i koje su od vitalnog značaja, poput klica, leukocita i epitelnih stanica.

Ovom analizom moguće je opisati abnormalnosti koje su zabilježene u spermi u glavi, vratu, poluprenosu i glavnom komadu.

Uz to, mogu pomoći i prikazivanju slučajeva hemospermije (prisutnost crvenih krvnih zrnaca u sjemenu) i leukospermije ili piospermije (povećani broj leukocita u sjemenu).

Reference

1. Costamagna S, Prado M. Validacija svježeg testa, mrlje od Grünwald-Giemsa i Grama i kultura medija za dijagnozu Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Dostupno na: scielo.
2. Merck KGaA laboratorij. Svibanj Grünwald eozin metilen plavi za mikroskopiju.
3. "Mrlja od svibnja-Grünwald-Giemsa." Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 15 stu 2018, 14:37 UTC. 8. siječnja 2019. godine, 04:29: en.wikipedia.org
4. Panreac Laboratorij za staklene kemikalije. Reagensi za histološke tehnike, hematologiju i mikrobiologiju. Dostupno na: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Preporuka za mrlje u krvnim mrljama za čitanje hemograma. Nacionalni i referentni biomedicinski laboratorij. Institut za javno zdravstvo Čilea.
6. Sarabia L. Spermiogram prema kriterijima WHO. Razvojni program anatomije i biologije. Medicinska škola. Sveučilište u Čileu. Dostupno na: pp.centramerica.com