PRIPREMA MEDIJA U KULTURI: CILJEVI I KORACI - BIOLOGIJA - 2025

Pripreme medija za kulture je rutina metodologija koristi u laboratorijima za rast željenih mikroorganizama. Mediji za kulturu su kruti, tekući ili polučvrsti pripravci koji sadrže sve potrebne hranjive tvari za razvoj mikrobne populacije.

Općenito, sredstva za uzgoj mikroorganizama bogata su proteinima i aminokiselinama i obično sadrže neku komponentu koja pogoduje rastu organizma koji se proučava, poput vitamina, krvi, seruma, između ostalog.

Izvor: pixabay.com

Ne postoji opći ili univerzalni medij za kulturu, jer njegov sastav varira ovisno o potrebama mikroorganizma od interesa. Neke bakterije mogu rasti u bilo kojem kulturi, ali druge imaju posebne zahtjeve.

Od čega se sastoji?

Mikroorganizmi, poput gljivica i bakterija, ne mogu se pojedinačno proučavati zbog njihove malene veličine. Iz tog razloga, moraju se uzgajati na umjetne načine koji omogućuju značajan porast populacije.

Na primjer, ako želimo proučavati bakterije, moramo im osigurati prave uvjete kako bi se oni mogli razmnožavati i formirati koloniju (što se može promatrati golim okom).

Priprema medija za kulturu uvelike varira ovisno o vrsti mikroorganizma koji se uzgaja. Prije pripreme potrebno je znati osnovne prehrambene potrebe radnog organizma.

Niže će biti opisane najčešće sastojke koji se upotrebljavaju u kulturnim medijima kako bi dobili opću predodžbu o njihovoj pripremi:

agar

Koristi se u kulturama kao sredstvo za geliranje i dodaje se kada se traži kruti ili polu-čvrsti medij. Prvo sredstvo za učvršćivanje korišteno u pripremi medija bio je želatina, ali je 1883. godine agar u svijet bakteriologije uveo W. Hesse.

Bakteriološki agar kao svoju glavnu komponentu ima polisaharid s kompleksnim granama izdvojenim iz algi. Ovaj spoj koristi se kao zgušnjivač u uobičajenoj hrani, poput sladoleda i džemova.

To je vrlo vrijedan element u mikrobiologiji iz više razloga. Mikroorganizmi ga uglavnom ne mogu razgraditi te se ukapljuje na temperaturi od 100 ° C i ostaje u tekućem stanju sve dok ne dosegne 45 ° C ili manje.

U slučaju da želite pripremiti kruti medij, koncentracija agara treba biti oko 1,5%, dok polutvrdi pripravci trebaju biti 0,3 do 0,5%.

tekućine

Za uzgoj patogenih organizama potrebna je tjelesna tekućina kako bi se mogli razvijati kao u prirodnom okruženju. Iz tog razloga dodaje se cjelovita ili defibrilirana krv. Tekućina je uzeta iz zdrave životinje i, nakon što je sterilizirana, dodaje se u kulturni medij.

Izvodi

Dobivaju se iz različitih životinjskih dijelova (poput mesa ili jetre) ili povrća (sjemenki), a obrađuju se kako bi se dobio kruti koncentrat u obliku paste ili praha. Najčešći su kvasac, slad i meso.

peptona

Ovi organski spojevi dobivaju se enzimskom ili kemijskom hidrolizom životinjskog ili biljnog tkiva. Svrha je dodavanje sadržaja bogatog aminokiselinama, koje su temeljne jedinice proteina.

Amortizeri

Sustavi "pufera" ili međuspremnika izbjegavaju nagle promjene pH i pomažu u održavanju optimalnog raspona koji tijelo tolerira.

Većina organizama može dobro napredovati pri pH 7, iako neke bakterije preferiraju alkalne medije. Međutim, postoje bakterije koje odolijevaju promjenama pH između vrijednosti 6 i 9.

Kod pH osjetljivih vrsta šteta ne nastaje prekomjernom količinom vodika ili hidroksilnih iona, već povećanjem slabih kiselina ili baza koje mogu ući u stanicu.

Isto tako, dodaju se pokazatelji pH kako bi se pratila i izbjegla odstupanja uzrokovana fermentacijom ili drugim procesima.

ciljevi

Glavni cilj prilikom pripreme medija za kulturu je dodavanje svih potrebnih sastojaka kako bi se omogućio izoliranje uspješnog razvoja organizma. Mora se utvrditi najučinkovitija kombinacija komponenata i hranjivih tvari za postizanje željenog medija.

I priprema i skladištenje sredstva su ključni za postizanje uspješnog rasta, jer sastav i dostupnost hranjivih sastojaka ovise o tim koracima.

Mora se uzeti u obzir da je uzgoj mikroorganizama pod utjecajem nekoliko čimbenika koji nisu u odnosu na kulturni medij, poput intenziteta primljenog svjetla, temperature i razine kiselosti ili lužine medija. Stoga se svaka od tih varijabli mora uzeti u obzir.

Vrste medija

Na temelju njegova sastava

Na temelju njihovog sastava postoje tri glavne vrste usjeva: prirodni ili empirijski, polusintetički i definirani sintetski ili kemijski medij.

Prirodno okruženje

U prirodnim sredinama točan sastav nije poznat. Tu se ubrajaju sastojci poput mlijeka, razrijeđene krvi, biljnih sokova, ekstrakata i infuzija mesa i peptona. Iz ekonomskih razloga se često dodaju jeftine komponente poput ekstrakta soje, surutke, melase itd.

Polusintetički mediji

Naziva se polusintetičkim medijem ako je njegov sastav djelomično poznat. Bilo koji medij koji sadrži agar postaje polusintetički medij.

Među njima imamo agar dekstroze krumpira, agar czapek-dox, zobni agar, mesni peptonski agar, između ostalih primjera.

Sintetički ili kemijski definirani medij

U ovom je slučaju sastav medija - s obzirom na količinu izvora ugljika, dušika, sumpora, fosfora i bilo kojeg drugog potrebnog faktora rasta - u potpunosti poznat. Vrlo je korisno ako želite dobiti obnovljive rezultate za druge istraživače.

Za takozvane "mikroorganizme sa posebnim zahtjevima rasta" potrebno je dodati potrebne komponente. Primjer ove vrste je Lactobacillus.

Na temelju vrste mikroorganizma

Slično tome, postoji i druga klasifikacija za kulturne medije temeljenu na vrsti mikroorganizma koji na njemu može rasti. Slijedom ovog načela imamo slijedeća opća, obogaćujuća, selektivna i različita sredstva. Svaka je opisana u nastavku:

Opći mediji

Oni podržavaju razvoj širokog spektra mikroorganizama. Ako bilo koji organizam treba posebne uvjete za svoj rast, on se neće moći uspješno razvijati u ovoj vrsti kulture.

Mediji za obogaćivanje

Mediji za obogaćivanje podržavaju rast određene vrste mikroorganizama, ali nije dodana nijedna supstanca koja bi spriječila da druge vrste mikroba rastu u njemu.

Selektivni mediji

Oni traže specifičan rast mikroorganizma, među ostalim ga zovu gljivice, bakterije, protozoje. Da bi to postigli, inhibiraju razvoj drugih.

Da bi se postigao ovaj cilj, mogu se dodati kemijski spojevi koji su smrtonosni za široku skupinu mikroorganizama i bezopasni za organizam od interesa ili se mogu dodati izvori energije koji mogu biti asimilirani samo pomoću ciljanog mikroba.

Za uzimanje medicinskih uzoraka koriste se selektivni mediji za uzgoj patogenog mikroorganizma. Ovdje je potrebno promicati rast patogena i inhibirati razvoj normalne mikrobne flore od pacijenta.

Na primjer, bizmut sulfit agar ne dopušta rast gram-pozitivnih bakterija i velikog broja bakterija koje se nalaze u gastrointestinalnoj šupljini. Iz tog razloga koristi se za uzgoj gram-negativnih bakterija koje uzrokuju tifusnu groznicu, Salmonella typhi u fekalnim uzorcima.

Diferencijalni mediji

Ova vrsta koristi neke dijagnostičke karakteristike organizma koji je zanimljiv (na primjer posebnosti u njegovom metabolizmu) kako bi ih mogao prepoznati prema drugoj vrsti koja raste u istom okolišu.

I diferencijalni i selektivni mediji vrlo su korisni u području kliničke mikrobiologije i javnog zdravlja, jer ove discipline trebaju otkriti prisutnost specifičnih mikroorganizama povezanih s patologijama ili lošim higijenskim uvjetima.

U kulturu se mogu dodati tvari s pokazateljima koje daju karakteristične karakteristike traženoj koloniji. Na primjer, laktoza i pH indikator dodaju se agar-eozin-metilen plavi (skraćeno EMB) i MacConkey agar.

Stoga, kad se u tim medijima razvije kolonija sa sposobnošću fermentacije laktoze i stvaranjem aldehida, može ih se primijetiti u posebnoj boji.

koraci

Trenutno se kultura može kupiti u liofiliziranom obliku. Stoga je priprema lakša, a jedino što preostaje je rehidrirati proizvod. Sadržaj se mora izvagati (uzimajući u obzir konačnu količinu koja se priprema) i otopiti u destiliranoj vodi slijedeći sve naznake proizvoda.

Sadržaj tekućeg medija mora se podijeliti u željene posude (Petrijeve posude, epruvete itd.) Za naknadnu sterilizaciju. Za raspodjelu krutog medija potrebno ga je otopiti mikrovalnom ili podložiti materijal vodenoj kupelji. PH medija mora se prilagoditi.

Obično se agar koristi u epruvetama ili Petrijevim posudama. Ako se agar otvrdne u nagnutom položaju, pravilnim kutom, tako da je krajnji rubni rub dijagonalno, ovaj raspored poznat je kao kljun ili nagnuta cijev. Kada se agar ukruti u potpuno vertikalnom položaju, naziva se "dubokim".

Nakon sterilizacije medija - pomoću autoklava - oni se ohlade. S njima se mora rukovati u okruženju bez mikroorganizama, a najčešći je rad s upaljačem koji osigurava aseptično okruženje u njihovoj blizini.

Reference

1. Celis, JE (2006). Stanična biologija: laboratorijski priručnik (svezak 2). Elsevier.
2. Finegold, SM, Bailey, WR, Baron, EJ, Fineglod, SM, & Scott, EG (1991). Bailey Scott: mikrobiološka dijagnoza. Panaamerički medicinski.
3. Olivas, E. (2004). Priručnik iz prakse mikrobiologije I i II i parazitologije. Autonomno sveučilište Ciudad Juarez.
4. Schlegel, HG, & Zaborosch, C. (1993). Opća mikrobiologija. Cambridge University Press.
5. Tortora, GJ, Funke, BR, & Case, CL (2007). Uvod u mikrobiologiju. Panamerican Medical Ed.