BOJENJE U KINJAUNU: OBRAZLOŽENJE I TEHNIKE - BIOLOGIJA - 2026

Bojenje na Kinyoun-u je tehnika bojenja koja se koristi za bojenje kiselina alkohola otpornim na bakterije i parazite. Nastala je iz modifikacije Ziehl-Neelsenove boje; Obje tehnike se tumače na isti način, ali se razlikuju u dva elementa: u pripremi glavnog reagensa i u tome što tehnika Kinyoun ne koristi toplinu.

Iz tog razloga je poznata i kao hladno modificirana hladna mrlja Ziehl-Neelsen ili Kinyoun. Indicirano je za bojenje Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atipičnim mikobakterijama, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris i Cyclosporas cayetanensis.

Cryptosporidium parvum obojen Kinyoun mrlje. Punlop Anusonpornperm, iz Wikimedia Commons

Vrijedno je napomenuti da se Nocardia slabo mrlje ovom tehnikom jer su djelomično otporne na kiselinu, pa za ovaj rod postoji modifikacija metodologije.

Zauzvrat, tehnika hladnog Kinyouna kombinirana je s tehnikom trihroma koju je Didier modificirao za otkrivanje kokcidije (Cryptosporidium parvum i Isospora belli) i spore mikrosporidije (Enterocytozoon bieneusi i Encephalitozoon intestinalis).

osnova

Glavni reagens za bojenje je karbolfuksin ili karbol fuksin koji se ima svojstvo vezanja na karbolne kiseline koje postoje unutar voskastog staničnog zida bogate lipidima (mikolične kiseline) mikobakterija i nekih parazita.

Kiselim izbjeljivačem ne sprečava se ta veza; stoga su mikroorganizmi definirani kao brzo-kiselinski.

Za razliku od tehnike Ziehl-Neelsen-a koja fiksira boju toplinom, u tehnici Kinyoun ovaj korak nije potreban, jer karbolička otopina fuksina pripremljena za ovu tehniku ​​sadrži visoku koncentraciju fenola.

Fenol otapa lipidni materijal u staničnoj stijenci, omogućujući unos karbolfukssinske boje. Nakon što boja prodre, ostaje fiksirana unatoč ispiranju kiselim alkoholom.

Na taj način mikroorganizmi koji brze kiseline poprimaju karakterističnu crvenu boju, dok sve što nije brzo kiselina postaje razbarušeno i obojava se u plavu boju.

Tehnika

materijali

- Modificirani karbolni fuksin.

- Alkohol -kiselina.

- Metilen plava.

Priprema Kinyoun karbolnog fuksina

- Osnovni fuksin: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destilirana voda: 100 ml.

Osnovni fuksin treba polako otopiti u alkoholu, neprestano miješajući. Zatim se kristalizirani fenol otopi u vodenoj kupelji na 56 ° C. Kad se otopi, dodaje se 8 ml u gornju otopinu fuksina.

Priprema kiselo-alkoholnog

- koncentrirana klorovodična kiselina: 3 ml.

- etanol (95%): 97 ml.

Mora se mjeriti, spajati i miješati.

Priprema kontrastne boje metilen plave boje

- Metilen plavi: 0,3 g.

- Destilirana voda: 100 ml.

Izvaga se i otopi.

Tehnika bojenja Kinyounom

1- Pripremite mrlju izravno iz uzorka, što može biti sputum, plućna tekućina, sediment urina, cerebrospinalna tekućina ili izmet; ili iz suspenzije mikroorganizama dobivenih iz čistih kolonija razvijenih u mediju primarne kulture.

2- Fiksirajte razmaz toplinom.

3- Stavite mrlju na most za bojenje i prekrijte pripremljenim Kinyoun karbol fuksinskim reagensom. Ostavite da odstoji 3 do 5 minuta.

4- Operite destiliranom vodom.

5- Izbjeljivati ​​ga kiselim alkoholom 3 minute i ponovo isprati destiliranom vodom.

6- Izbjeljite ponovo kiselim alkoholom 1 ili 2 minute dok se više ne obojite.

7- Isperite destiliranom vodom i ostavite da se ocijedi, postavite tobogan u okomiti položaj.

8- Prekrijte pripravak metilen plavim i ostavite da djeluje 4 minute.

9- Operite destiliranom vodom i pustite da se osuši na zraku.

10 - Ispitajte na 40X, a zatim na 100X.

Da biste poboljšali i ubrzali bojenje mikroorganizama koji brzi od kiselina, dodajte 1 kap sredstva za vlaženje (poput Tergitola br. 7) u 30 do 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.

Neki laboratoriji mijenjaju metilen plavu kontrastnu boju u svijetlo zelenu ili pikiselinsku kiselinu; prvi daje zelenu boju pozadini, a drugi stvara žutu boju.

Posebna Kinyoun tehnika za nocardias

Da bi se poboljšalo bojenje bakterija roda Nocardia koristi se modifikacija Kinyoun-ove mrlje. Tehnika je sljedeća:

1- Pokrijte razmaz s Kinyoun karbol fuksinom 3 minute.

2- Operite destiliranom vodom.

3- Kratko promiješajte boju kiselim alkoholom pripremljenim na 3% sve dok se više ne obojite.

4- Operite ponovo destiliranom vodom.

5- Prekrijte pripravak metilen plavim i ostavite da djeluje 30 sekundi.

6- Operite destiliranom vodom i ostavite da se osuši na zraku.

Kombinirana tehnika karbolnog fuksina i trihroma modificirana od strane Didiera

Ova se tehnika preporučuje istovremeno za analizu uzoraka stolice za spore kokcidije i Microsporidium sp. Postupak koji slijedi je sljedeći:

1- Pokrijte razmaz s Kinyoun karbolnim fuksinom 10 minuta.

2- Uklonite boju i isperite destiliranom vodom.

3- Izbelite 30 sekundi alkoholom klorovodične kiseline.

4- Operite ponovo destiliranom vodom.

5- Prekrijte razmaz s trihromatskom otopinom 30 minuta na 37 ° C.

6- Isperite destiliranom vodom.

7- Izbelite 10 sekundi alkoholom s octenom kiselinom.

8- Operite razmaz 30 sekundi koristeći 95% etanol.

QA

Kao pozitivna kontrola pripremaju se razmazivanja sojevima Mycobacterium tuberculosis i obojavaju se reagentima kako bi se potvrdilo da bakterije poprime odgovarajuću boju (crveno-fuksija).

Negativne kontrole mogu se koristiti i tako da se brzo pripreme mrlje bilo koje vrste osim kiselog alkohola i tako se provjeri da li cijeli uzorak poprima kontrastnu boju.

Kinyoun tehnika u usporedbi s tehnikom Ziehl-Neelsen

Kinyoun tehnika je jednostavnija jer eliminira korak zagrijavanja, ali glavna joj je prednost to što dugoročno izbjegava ispuštanje pare, visoko toksične i uzrokuje rak. Stoga je mrlja od Kinyoun sigurnija za obojenje osoblja.

Važno je uzeti u obzir da se mora paziti da reagensi ne dođu u izravan dodir s kožom, jer su korozivni i izbjeljivač je zapaljiv.

Što se tiče nedostataka, negativan bris ne znači nužno da organizam nije prisutan. Nadalje, prisutnost staničnih krhotina može dovesti do lažnih pozitivnih rezultata, što dovodi do zbrke u dijagnozi.

upućivanje

1. Primjena kliničke kemije. (2016). BK Kinyoun Kit.Dostupno na: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Mrlja od Kinyoun i dvije kokcidije kod HIV-a. Medicinski časopis MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA
5. Saradnici Wikipedije. "Kinyoun mrlja." Wikipedia, Slobodna enciklopedija. Wikipedia, Slobodna enciklopedija, 8. veljače 2018. Web. 5. siječnja 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Primjena tehnike bojenja za istodobnu dijagnozu Coccidia i Microsporidia. Institut za higijenu Sveučilišta u Republici. Montevideo. Urugvaj. Dostupno na: higijena.edu.uy