BOJENJE KAPSULE: OBRAZLOŽENJE I TEHNIKE - BIOLOGIJA - 2026

Bojenje kapsula je diferencijal bojenje tehnika koja ima svojstvo naprezanja strukture polisaharida okružuje određene bakterije i kvasce zove kapsula. Koristi se u kliničkim laboratorijama kako bi se dijagnosticirale određene patologije uzrokovane kapsuliranim mikroorganizmima.

Također se koristi u nastavnim laboratorijima za demonstraciju ove morfološke strukture studentima zdravstvenih nauka, kao što su: medicina, bioanaliza, sestrinstvo ili citotehnologija, između ostalih.

Mrlje Klebsiella pneumoniae obojene mrlje od kapsule. Indijska tinta metoda sa safraninom. Izvor: A.A.V

Postoji nekoliko jednostavnih tehnika kojima se može dokazati prisutnost kapsule u mikroorganizmima koji je posjeduju, a to su: negativna mrlja, Anthony mrlja i varijanta koja kombinira prethodne dvije.

Negativno bojenje koristi se uglavnom u uzorcima CSF-a kada se sumnja na prisutnost kvasca Cryptococcus neoformans. Ovaj kvas je čest uzrok meningitisa.

Ova tehnika koristi nigrosin ili indijsku tintu i temelji se na stvaranju kontrasta između pozadine pripravka i neprobojne kapsule mikroorganizma. Pozadina postaje tamna, a kapsula je bezbojna. Na taj se način ta struktura otkriva.

Što se tiče Anthony tehnike, može se reći da se ona najčešće koristi u nastavnim laboratorijima za demonstriranje strukture polisaharida u bakterijama kao što su Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae i Neisseria meningitidis.

Upotreba ove tehnike u dijagnostičke svrhe vrlo je rijetka, jer postoje i drugi rutinski testovi koji omogućuju identifikaciju ovih mikroorganizama.

osnova

Kapsula je snažne strukture polisaharidne naravi. To štiti mikroorganizme od fagocitoze, pa je stoga teško probiti strukturu.

Zato se mrlje na kapsulama temelje na kontrastu. Boje boje mrlje na dnu preparata dok kapsula ostane bezbojna.

Stoga je s ovim tehnikama kapsula lako prepoznatljiva. Ako mikroorganizam nema kapsulu, neće se razlikovati s ovom vrstom obojenja, jer će sve biti obojeno istom bojom.

Sve tehnike koje se koriste za bojanje kapsule imaju isti razlog bez obzira na korištenje različitih boja i postupaka.

Tehnike par

-Anthony mrlja

Anthony mrlja koristi kristalnu ljubičastu mrlju. To će obojati tijelo bakterija i pozadinu ljubičasto.

S druge strane koristi se 20% bakreni sulfat. Ovo služi kao otopina za pranje, odnosno uklanja višak ljubičastog kristala iz pripravka, čineći kapsule bistrim, ali bez bakterijskog tijela ili pozadine gube boju.

materijali

- Iridescentno mlijeko.

- Klizni.

- 1% ljubičasti kristal.

- 20% bakrenog sulfata.

- optički mikroskop.

- Ulje za uranjanje.

Postupak

Ova se tehnika sastoji od:

1. Kultivirajte mikroorganizam u iridescentnom mlijeku 36 sati.
2. Na kraj tobogana stavite kap kulture, a pokraj nje stavite kap ljubičastog stakla, pomiješajte i pospite kraj drugog tobogana.
3. Zrak je suh i ne podnosi vrućinu.
4. Isprati s 20% otopinom bakrenog sulfata, ostaviti da se osuši na zraku.
5. Promatrajte pod mikroskopom s ciljem uranjanja. Pretražujte prema krajevima namaza.

Važno je ne koristiti toplinu niti za fiksiranje niti za sušenje jer to oštećuje kapsulu. Također ne perite vodom.

Tumačenje

Iridescentno mlijeko je izvrstan medij za kulturu jer pruža potrebne hranjive tvari mikroorganizmu za razvoj istaknute kapsule.

S druge strane, iridescentno mlijeko formirat će gusta i kompaktna dna koja će se obojati ljubičasto zajedno s bakterijskim tijelom, ali kapsula koja okružuje mikroorganizam ostat će bezbojna. Stoga se oko bakterijskog tijela opaža bistri halo.

Grafički prikaz mikroskopskog promatranja brisa Klebsiella pneumoniae obojenog Anthonyjevom mrljom. Izvor: Autor autor MSc. Marielsa Gil.

Prednost

To je jednostavna tehnika izvođenja. Ne zahtijeva fiksiranje.

Također treba napomenuti da se mogu koristiti i drugi kulturi, ali mlijeko je poželjno jer ima prednost pružanja istaknutijih kapsula.

Nedostaci

To je malo intenzivnija tehnika od negativnog bojenja, a za njezinu vizualizaciju potrebno je čekati da se priprema potpuno osuši.

-Negativno bojenje

materijali

- Klizne slajdove.

- Kultura s mikroorganizmom.

- kineska tinta ili nigrosin.

- optički mikroskop.

- Fiziološka fiziološka otopina.

Postupak

Stavite kap fiziološke fiziološke otopine na pokrivač i otopite mali dio mikrobne kulture. Važno je da pripravak nije previše gust. Zatim stavite kap kineske tinte ili nigrosina i pomiješajte.

Potom se preko preparata stavi pokrovni lim bez preljevanja tekućine. Pod mikroskopom se promatra tako što se prvo usredotočuje na 10X cilj, a zatim prelazi na 40X.

Ova se tehnika također može izravno koristiti na CSF uzorcima. To jest, umjesto da se stavi kap mikrobne kulture, stavlja se kap CSF-a.

Prednost

To je jednostavna metoda za izvedbu i istovremeno jeftina. Ne zahtijeva fiksaciju ili sušenje pripravka.

Nedostaci

Nedostatak je taj što ga se mora promatrati pod mikroskopom prije nego što se pripravak osuši, jer ako se to dogodi, mikroorganizmi će se skupiti, što će vizualizaciju otežati.

S druge strane, lažno pozitivno djelovanje može se dogoditi ako analitičar nije iskusan, budući da se leukociti često miješaju s kvascima.

Promatranje kapsula kvasca tehnikom kineske tinte ili nigrosina trebalo bi smatrati pretpostavljenom dijagnozom Cryptococcus neoformans dok se ne pokaže s kulturom.

To je zato što postoje i drugi kvasci koji bi mogli biti uzrok meningitisa, a ne samo Cryptococcus neoformans, poput roda Candida i Rhodotorula, kao i drugih vrsta Cryptococcusa.

Tumačenje

Ako postoje kapsulirani mikroorganizmi, primijetit će se tamna pozadina, a prozirna tijela lebde u tekućini, naglašavajući prisutnost kapsule.

Kapsula Cryptococcus neoformans obojena kineskom tintom. Izvor: Fotografski podaci: Davatelji sadržaja: CDC / Dr. Leanor haley

-Indijska tehnika tinte

Ova se tehnika može obaviti i s nigrosinom. To je kombinacija ranije opisanih tehnika. Ova tehnika koristi kristalno ljubičastu i indijsku tintu ili nigrosin.

Tijelo bakterija postaje ljubičasto od kristalno ljubičaste jer je negativno nabijeno, dok nigrosin oboji dno mrlje. Ako bakterija ima kapsulu, ona će se pojaviti kao prozirni halo oko mikroorganizma.

Kristalna ljubičica može se zamijeniti bilo kojom od ovih boja: safraninom, osnovnim fuksinom ili metilen plavom bojom.

materijali

- Ljubičasto staklo.

- Nigrosin ili indijska tinta.

- Klizne slajdove.

- Mikroskop.

Postupak

- Uzgajati mikroorganizam u kulturi.

- Stavite kap kulture na kraj slajda, a pokraj nje stavite kap kristalne indijske tinte ili nigrosina, pomiješajte i pospite kraj drugog tobogana.

- Zrak se suši i ne pričvršćuje na toplinu.

- Prekrijte ljubičastom kristalnom otopinom 1 minutu, operite destiliranom vodom, ali vrlo nježno (mekim mlazom), ostavite da se osuši na otvorenom.

- Promatrajte pod mikroskopom sa ciljem uranjanja. Pretražujte prema krajevima namaza.

Tumačenje

Vidjet će se grimizno tijelo bakterija i tamna pozadina. Kapsula će se pojaviti bezbojna oko bakterija.

Reference

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Osnovne tehnike mikrobiologije. Promatranje bakterija. Reduka (biologija). Serija mikrobiologije. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Osnovne mrlje u mikrobiološkom laboratoriju. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Dostupno na: medigraphic.com
3. Gil M. Negativno bojenje: racionalnost, tehnika, prednosti i nedostaci. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiološka dijagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Mrlja od kapsule: načelo, postupak i rezultati. 2019. Medicinski vodič za mikrobiologiju. Dostupno na: microbeonline.com