VOGES-PROSKAUER TEST: OSNIVANJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

Voges-Proskauer test je biokemijski ispitivanje upotrebljava kao pomoć u identifikaciji bakterija iz obitelji Enterobacteriaceae. Posebno je koristan za razlikovanje sojeva Escherichia coli od Klebsiella i Enterobacter, između ostalih.

Ispitivanje se izvodi u tekućem mediju za kulturu nazvanom Metil Red - Voges Proskauer, poznatijem po akronimu RM / VP. Ovaj medij sastoji se od puferiranog polipeptona, glukoze, dikalijevog fosfata i destilirane vode.

Komercijalni medij MSP Red-Voges Proskauer (RM / VP) / test test pozitivan i negativan. Izvor: Fotografiju snimio autor MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15, iz Wikimedia Commons

Postojeći RM / VP medij modifikacija je Clarka i Lubsova medija, koji je u početku sadržavao nižu koncentraciju peptona i glukoze. Tako je proizvedeno manje vodikovog iona, potrebnog za pozitivnu Voges-Proskauerovu reakciju.

Test se temelji na sposobnosti mikroorganizma da koristi glukozu putem butilen-glikola i formira neutralni konačni proizvod zvan acetoin, u prisutnosti kisika i alkalnog pH.

U RM / VP mediju, osim što je mogao otkriti Voges-Proskauer test, može se pokazati i metilno crveni test.

osnova

Voges-Proskauer testna osnova

Pluripeptoni prisutni u mediju pružaju osnovne prehrambene potrebe za rast bakterija. Sa svoje strane, glukoza je glavni spoj. Mnoge bakterije imaju sposobnost metabolizacije glukoze i stvaranja piruične kiseline.

Piroična kiselina je sredina metabolizma glukoze i odatle svaki mikroorganizam može ići različitim putevima. Neki će tvoriti miješane kiseline, poput mliječne kiseline, octene kiseline, mravlje kiseline i jantarne kiseline, a drugi će tvoriti neutralne proizvode poput 2,3-butandiola.

Voges-Proskauer test otkriva sposobnost mikroorganizma da formira acetil metil karbinol (acetoin), intermedijarni produkt 2,3-butandiola u aerobnim uvjetima.

Acetoin je smanjen i tvori 2,3-butandiol, ali ta je reakcija reverzibilna, pa ako se oksidira 2,3-butanediol, nastaje acetoin. Dakle, kisik je neophodan.

Diko kalijev fosfat je pufer koji puferira smjesu pri pH 6,9 ± 0,2.

Otkrivanje dokaza i tumačenje

Kako bi se pokazala reakcija, potrebno je provesti razvoj pomoću dva reagensa (Barrit reagensa), poznatih kao Voges A i Voges B.

Voges A je 5% -tna otopina α-naftola, a Voges B je 40% -tni pripravak kalijevog hidroksida. Ako kalijev hidroksid nije dostupan, može se zamijeniti s 40% natrijevim hidroksidom.

Α-naffol je katalizator koji će povećati intenzitet reakcijske boje, čineći test osjetljivijim. Α-naftol se uvijek mora prvo dodati, tresući cijev, tako da medij dođe u dodir s kisikom. Na ovaj način, prisutni acetoin se oksidira u diacetil, a 2,3-butandiol se oksidira u obliku acetoina, prenoseći ga u dijacetil.

Tako će se α-naftop vezati za diacetil, koji se zauzvrat pridružio jezgru gvanidina koji je prisutan u aminokiselini arginin, a posljednji dolazi iz pluripeptona.

Sa svoje strane, kalijev ili natrijev hidroksid odgovoran je za apsorpciju CO ₂ i reakciju s peptonovima. Ova reakcija uzrokuje stvaranje losos-ružičaste boje, jasno vidljive nakon što je dobro protresovao cijev.

Ispravne količine diacetila, peptona i α-naftola moraju se pomiješati da se boja odmah pojavi. Ako se to ne dogodi, cijev se prije odmora ostavi 15 minuta.

Test je obično pozitivan nakon 2 do 5 minuta, kada se može vidjeti svijetlo ružičasta boja. Ako ostavite da stoji 30 min do 1 sat, intenzitet boje bit će maksimalan (intenzivno crvena).

Negativan test pojavit će se kada juha požuti. Nakon jednog sata, ako je test negativan, može se oblikovati bakrena boja kao rezultat reakcije kalijevog hidroksida na α-naftol.

priprema

Srednja MR / VP

Odvažite 17 g dehidriranog medija za kulturu i otopite u litri destilirane vode. Ostavite da stoji 5 minuta. Zagrijte do vrenja da se potpuno otopi. Poslužite 3 do 4 ml u epruvetama i sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 minuta.

Sredstvo za dehidriranu kulturu je bež boje, a pripremljeni medij svijetlo je jantarne boje.

Konačni pH medija je 6,9 ​​± 0,2.

Voges reagens

Odmjeriti 5 g α-naftola i otopiti u 50 ml etilnog alkohola (apsolutno). Zatim nastavite dodavati etilni alkohol dok ne dostigne 100 ml.

Reagens Voges B

Odvažite 40 g kalijevog hidroksida i otopite u 50 ml destilirane vode u čaši. Čaša se mora staviti u hladnu vodenu kupelj kako bi se kontrolirala temperatura, jer kad se pripravak otopi, temperatura naglo raste.

Nakon što se otopina ohladi, prebacuje se u volumensku tikvicu i dopunjava destiliranom vodom do 100 ml.

Postupak ispitivanja Voges-Proskauera

Za provođenje Voges-Proskauerovog testa, RM / VP juha inokulira se s mikroorganizmom koji se proučava, iz čiste kulture u trajanju od 18 do 24 sata.

Inokulum ne smije biti jako gust. Inkubira se na 35-37 ° C tokom 24 do 48 sati, mada je ponekad potrebna i inkubacija nekoliko dana. Cowan i Steel smatraju da je pet dana minimalno vrijeme inkubacije potrebno za otkrivanje svih pozitivnih vrsta Voges-Proskauer (VP) iz porodice Enterobacteriaceae.

Razvoj testa

Odvojite 1 ml alikvota u epruvetu i razvijte kako slijedi: Stavite 12 kapi (0,6 ml) Vogesa reagensa i 4 kapi (0,2 ml) Vogesa B. Izmiješajte da prozračite i ostavite da se naseli 5 - 10 minuta prije tumačenja. Međutim, ako je test i dalje negativan, ostavite ga i promatrajte epruvetu nakon 30 minuta do 1 sata.

Pojava ružičasto-crvene boje ukazuje na to da je Voges-Proskauerova reakcija pozitivna. Ako medij ostane žut, reakcija je negativna.

Dodavanje programera u navedenom redoslijedu i količini ključno je kako bi se izbjegli lažni negativi.

Koristiti

Voges-Proskauer test koristan je za razlikovanje sojeva E. coli koji su negativni na VP, rodova Klebsiella, Enterobacter, Serratia, koji su VP pozitivni.

Izvor: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.

QA

Kontrolni sojevi mogu se koristiti za testiranje kvalitete pripremljenog medija, uključujući Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium i Enterobacter cloacae ATCC 13047.

Očekivani rezultati su pozitivne Voges-Proskauerove reakcije samo za K. pneumoniae i E. cloacae. Ostali daju negativne reakcije.

Reference

1. Britannia Laboratories. MR-VP Medium. 2015. Dostupno na: www.britanialab.com
2. Microkit Laboratories. M-identitet Voges Proskauer. 2014. Dostupno:
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testovi za identifikaciju bakterija kliničkog značaja. 3. izd. Uredništvo Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.