- karakteristike
- Koristiti
- Tehnike u području bakteriologije
- Castañeda mrlja za r bojenje
- Koster mrlja modificirana za
- Bojenje bakterijske kapsule
- Bojenje spora
- Gram-Huckerova mrlja
- Tehnike u području histologije
- Bojanje Kulchitske stanice (enterochromaffins)
- Mrlja od osteoartritisa
- Mrlja za identifikaciju makroalgi
- Toksičnost
- Reference
Safranina je meriquinoide boja, nazvan po kemijskoj strukturi ima dva benzenoidnih prstena i 2 quinoid prstena, potonja onih koji daju boju u crvenu.
Naziva se i dimetil safraninom ili osnovnim crvenim 2 u svom kratkom obliku, budući da je njegov znanstveni naziv 3,7-diamino-2,8-dimetil-5-fenil-fenaziniumkloro dimetil safranin, a kemijska formula je C 20 H 19 N 4 cl.
Kemijska struktura safranina ukazuje na benzenoidne i kinoidne prstenove / Vodena otopina safranina. Izvor: NEUROtiker uredio MSc. Marielsa Gil / LHcheM
Postoji varijanta koja se naziva trimetil-safranin, ali nema značajne razlike između dvije tvari.
Safranin je jednobojno bojilo, ovisno o karakteristikama kemijske formule, pozitivno nabijena tvar. Stoga ima afinitet prema negativno nabijenim strukturama. Te će strukture biti obojene crveno.
Ovo svojstvo mu daje primjenu u mnogim histološkim tehnikama za bojenje različitih staničnih struktura, i to eukariotskih i prokariotskih organizama.
Safranin se koristi kao kontrastna boja u važnim i dobro poznatim tehnikama za rutinsku upotrebu u bakteriologiji. Te su tehnike: mrlja po Gramu-Huckeru, mrlja Schaeffer Fulton za spore ili bojenje bakterijskih kapsula, među ostalim.
karakteristike
Boja šafrana (začin dobiven iz stigme cvijeta Crocus sativus) bila je inspiracija za imenovanje ove boje. Od naziva šafran potječe i naziv safranin. To je zbog velike sličnosti boje šafrana i boje koja ova boja pruža.
Safranin je dostupan u obliku kristala ili praha, a oba su proizvoda topiva u vodi. Boja safranina nema miris. Strukture mrlja crvene. Strukture koje privlače safraninsku boju nazivaju se safranofili.
Strukturno je safranin složen, na krajevima ima dva benzenoidna prstena, a u sredini su dva kvinoidna prstena gdje se nalazi kation N +. Središte strukture je sustav zadužen za pružanje boje. Zbog ove karakteristike, ovo je bojilo razvrstano u kategoriju II.
Koristiti
Safranin se koristi za bojenje različitih struktura. Posebno se ističu Kulchitske stanice prisutne u gastrointestinalnom traktu, koji se nazivaju i enterokromaffin stanicama.
Sposobna je bojati mikroorganizme iz obitelji Rickettsiaceae. Isto tako, koristi se u raznim tehnikama, poput Koster metode, modificirane za obojenje bakterija roda Brucella.
S druge strane, safranin se koristi u tehnici bojenja spore Schaeffer Fulton i u bojenju po Gramu-Huckeru. U obje tehnike, safranin djeluje kao kontrastna boja.
U prvom, spore poprimaju boju malahitne zelene, a ostale strukture crveni je safranin. U drugoj fazi Gram negativne bakterije gube boju ljubičaste kristale u koraku promjene boje, pa je safranin onaj koji Gram negativne bakterije oboji u crveno.
Uz to, safranin se koristi u bakteriologiji za pripremu Brucella agar medija s razrjeđivanjem safranina 1: 5000. Ovaj medij služi za razlikovanje vrsta Brucella suis od ostalih vrsta. Brucella melitensis i Brucella abortus rastu na ovom mediju, ali B. suis je inhibiran.
U agroindustrijskom polju safranin je korišten u 2,25% i razrijeđen 1:10 za mrlje uzoraka stabljika iz biljke šećerne trske.
Ovu biljku najčešće pogađaju bakterije Leifsonia xyli subsp. ksili, koja oštećuje ksilem biljke. Obojene stabljike ocjenjuju se kako bi se odredila funkcija krvnih žila.
Tehnike u području bakteriologije
Castañeda mrlja za r bojenje
Razmazivanje krvi ili tkiva stavi se u pufernu otopinu (fosfatni pufer pH 7,6). Ostavite da se spontano osuši, a zatim pokrijte metilen plavim bojama 3 minute i premažite safraninom. Rickettsiae su obojeni plavo, kontrastno crvenoj pozadini.
Koster mrlja modificirana za
Napravi se razmaz i zapali se u upaljaču za fiksaciju. Potom se prekriva smjesom 2 dijela zasićene vodene otopine safranina s 3 dijela 1 mol / L otopine KOH, tokom 1 minute. Izvodi se ispiranje destiliranom vodom i suprotstavlja se 1% karbolnom metilen plavom bojom.
Ako uzorak sadrži bakterije roda Brucella, one će se pojaviti narančasto na plavoj pozadini.
Bojenje bakterijske kapsule
Izrađuje se mješavina suspenzije bakterija s indijskom tintom i dodaje se safranin. Pod mikroskopom oko svake bakterijske kapsule pojavit će se crvenkast halo s crnom pozadinom.
Bojenje spora
Proširi se bakterijska suspenzija. Zatim se fiksira na toplinu. Prekriven je 5% malahitnim zelenom bojom, plamteći često do ispuštanja para. Postupak se ponavlja 6-10 minuta. Na kraju se ispere vodom i protistava 0,5% safranina 30 sekundi. Bacili se mrlje crveno, a spore zeleno.
Gram-Huckerova mrlja
Način se razmazivanje bakterijskom suspenzijom i učvrsti na toplini. Pokrijte tobogan kristalno ljubičicom 1 minutu. Potom se lugol stavlja u obliku mordantne otopine u trajanju od 1 minute. Nakon toga se izbjeljiva acetonskim alkoholom i na kraju protistava safraninom u trajanju od 30 sekundi.
Gram pozitivne bakterije mrljaju plavkasto ljubičastu, a gram negativne bakterije crveno.
Neki su laboratoriji prestali koristiti Gram-Hucker tehniku kako bi usvojili modificiranu Gram-Kopeloff tehniku. U potonjem, safranin je zamijenjen osnovnim fuksinom. To je zato što safranin slabo obojava vrste roda Legionella, Campylobacter i Brucella.
Tehnike u području histologije
Bojanje Kulchitske stanice (enterochromaffins)
Odjeljci tkiva iz gastrointestinalnog trakta obojeni su srebrnim kloridom. Zatim se dekolorizira s natrijevim tiosulfatom i na kraju kontrapira safraninom.
Kulchitske stanice odlikuju se prisutnošću crno-smeđih granula.
Mrlja od osteoartritisa
Budući da safranin ima pozitivan naboj, vrlo se dobro veže na karboksilne i sulfatne skupine glikozaminoglikana. To su dio proteoglikana koji čine zglobnu hrskavicu. U tom smislu, prilikom bojenja safraninom O, moguće je utvrditi postoji li ili ne postoji gubitak hrskavice.
Gubitak hrskavičnog tkiva može se mjeriti pomoću Mankinove ljestvice ili se također naziva i skala osteoartritisa.
Tehnika je objašnjena u nastavku: histološki dio je uronjen u ladicu s Weigertovom otopinom željeznog hematoksilina, zatim propušten kroz kiseli alkohol i ispran vodom.
Nastavite postupak bojanja uranjanjem lista u brzo zelenu boju, ispere se octenom kiselinom, a sada je uronjen u safranin O. Za završetak postupka dehidrira se upotrebom alkohola u različitim koncentracijama u uzlaznom redoslijedu. Posljednji korak zahtijeva da se ksilen ili ksilen uzorak razjasni.
Klizači su uvjetovani kanadskim balzamom ili sličnim koji se može promatrati pod mikroskopom.
Ovom tehnikom jezgre se oboje u crno, a kost je zeleno i hrskavica gdje su proteoglikani crveni.
Mrlja za identifikaciju makroalgi
Pérez i suradnici su 2003. godine predložili jednostavnu i jeftinu tehniku bojenja makroalgi. Uzorci se pripremaju u parafinskim histološkim odjeljcima. Odjeljci su fiksirani s 1% glicerina, što im omogućuje da se potpuno osuše. Zatim se stavlja u ksilol radi uklanjanja parafina.
Odjeljak se rehidrira prolazeći ga kroz niz pladnjeva koji sadrže etanol u različitim stupnjevima koncentracije (silazni redoslijed), po 2 min u svakoj.
Potom se 5 minuta oboji sa 3: 1 smjesom 1% safranina s 1% toluidin plave boje, obje pripreme s 50% -tnim etanolom. U smjesu se dodaju tri kapi pikrične kiseline koja djeluje blagotvorno.
Zatim se dehidrira prolaskom kroz posude za alkohol, ali ovaj put uzlaznim putem. Na kraju se ispere s ksilolom, a uzorak se pripravi s kanadskim balzamom koji se treba promatrati.
Toksičnost
Srećom, safranin je boja koja ne predstavlja opasnost za one koji s njim postupaju. To je bezopasna boja, nije kancerogena i nije zapaljiva.
Izravni kontakt s kožom ili sluznicom može uzrokovati lagano crvenilo na tom području, bez većih komplikacija. Za to se preporuča oprati zahvaćeno područje s puno vode.
Reference
- García H. Colorante safranina O. Tehničar zdravlja, 2012.; 1 (2): 83-85. Dostupno na: medigraphic.com
- Gil M. Gram mrlja: temelj, materijali, tehnika i upotrebe. 2019. Dostupno na: lifeder.com
- Gil M. Bojenje spore: obrazloženje, tehnike i upotrebe. 2019. Dostupno na: lifeder.com
- Safranina. " Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 7 ožu 2017, 10:39 UTC. 3. kolovoza 2019., 20:49 en.wikipedia.org
- Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Korisna tehnika bojenja u anatomskoj interpretaciji Gracilariopsis tenuifrons i Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Glumi Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Dostupno na: scielo.org.
- Crkva Aleika, Peralta Ester Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Odnos funkcionalnosti krvnih žila i prisutnost Leifsonia xyli subsp. xyli. Zaštita od povrća 2007; 22 (1): 65-65. Dostupno na: scielo.sld