KOAGULAZNI TEST: OBRAZLOŽENJE, POSTUPAK I UPOTREBE - BIOLOGIJA - 2025

Koagulaza Test je laboratorij tehnika koja se koristi da bi se otkrilo prisustvo enzima koagulaza. Ovaj enzim ima svojstvo koagulacijske plazme. Loeb je 1903. prvi opisao ovaj enzim.

Ovaj se test provodi na gram-pozitivnim, katalazno-pozitivnim kokama koji omogućuju razlikovanje sojeva Staphylococcus aureus od ostalih stafilokoka, jer je to jedini mikroorganizam koji je klinički važan koji ga proizvodi.

Obje slike otkrivaju pozitivan test koagulaze. Izvor: Lijeva slika: Philippinjl. Slika desno: Fotografiju snimio autor MSc. Marielsa Gil.

U tom smislu, članovi porodice Staphylococaceae koji negativno testiraju često se nazivaju koagulazno negativnim stafilokokom.

Postoje neki sojevi osim S. aureus koji mogu proizvesti koagulazu, poput Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius i S. delphini.

No, prve su tri kliničke važnosti na veterinarskoj razini te bi se vrlo rijetko mogle naći kao uzročnici infekcija kod ljudi, dok se S. delphini nalazi samo u morskim sredinama.

Nadalje, lako se razlikuju jer S. hyicus i S. intermedius ne fermentiraju manitol, a S. schleiferi spp coagulans ne fermentira maltozu ili trehalozu, dok S. aureus fermentira ove ugljikohidrate.

Prisutnost enzima koagulaze povezana je s virulentnošću sojeva. Međutim, ova se teorija raspada, jer su uočene druge virulentne vrste negativne koagulaze koje mogu stvoriti značajne infekcije.

osnova

Tumačenje

Aglutinacija unutar 5-20 sec (snažan pozitivan test).

Promjenjiva aglutinacija koja se javlja između 20 sekundi i jedne minute (odgođen pozitivan test).

Neki stupanj aglutinacije nakon jedne minute (sumnjivi dokazi). Preporuča se ponoviti test ili potvrditi metodom cijevi.

Ne postoji aglutinacija (negativan test).

Rezultat s SSF-om. Uvijek mora dati negativan rezultat, ako automatski daje pozitivan rezultat, rezultat testa je nevažeći.

-Tube koagulazni test

materijali

-Sterilna epruveta

-Plazma

-Koplje od Marije na 37 ° C.

Tehnika

Pipetirajte 0,5 ml plazme u epruvetu dimenzija 12 x 75 sterilnom pipetom. Stavite platinastu petlju s 2 do 4 čiste kolonije da se tijekom 18 do 24 sata prouči iz čvrste kulture i otopi se u plazmi. pažljivo miješati i inkubirati 4 sata na 37 ° C.

Ispitajte cijev u prvih sat vremena bez da je protresete, samo je lagano nagnite. Ako se ugrušak još uvijek ne vidi, može ga se promatrati svakih 30 minuta do završetka 4 sata. Ako je nakon 4 sata i dalje negativan, može se ostaviti najviše 24 sata, ali na sobnoj temperaturi. Promatrajte i izvijestite o rezultatu.

Na temelju iskustva, neki mikrobiolozi preporučuju korištenje 500 µl bakterijske suspenzije iz 18-satne kulture u tekućem mediju za provođenje testa.

Čini se da nudi brže i pouzdanije rezultate nego kad se emulgiraju kolonije iz čvrstih medija, posebno ako se koristi ljudska plazma dobivena iz banke krvi.

Upotreba sojeva iz juhe pomaže u razrjeđivanju moguće prisutnosti humanih antistafilokoknih antitijela u plazmi koji mogu inhibirati djelovanje koagulaze.

Tumačenje

Ako se vidi ugrušak koji obuhvaća svu tekućinu (potpuni zgrušavanje) ili ugrušak bez ičega u preostaloj tekućini (djelomični zgrušavanje), to bi se trebalo smatrati pozitivnim testom.

Ako ne nastane ugrušak, to jest suspenzija ostaje homogena, test je negativan.

-Koagulaza test upotrebom fibrinogena

Fibrinogen se koristi isto kao i plazma, a koristi se i za klizne i epruvete. Postupak kako je opisano u plazmi i protumačite na isti način.

Koristiti

Koristi se za razlikovanje Staphylococcus aureus od koagulaznih negativnih stafilokoka.

QA

Neka su svježe kulture soja S. aureus dostupne za pozitivnu kontrolu. Soj S. epidermidis dostupan je i kao negativna kontrola.

Ograničenja

-Pozitivni test ne treba ostaviti u inkubaciji 24 sata, jer S. aureus proizvodi fibrinolizin koji otapa ugrušak.

-Za pouzdan test treba koristiti svježu ili tek obnovljenu plazmu, kao i važno je koristiti svježe bakterijske kulture (18 do 24 h). Tako se izbjegavaju lažni negativi.

-Test se mora izvesti zajedno s negativnom i pozitivnom kontrolom.

-Neki kruti mediji mogu ometati test koagulaze. Ne preporučuje se upotreba kolonija iz slanog manitola agar.

-Ako se koristi citrirana plazma, preporučuje se stavljanje 5 jedinica heparina po ml plazme da se izbjegnu lažni pozitivni efekti. To je zato što neki mikroorganizmi osim S. aureusa mogu razgraditi citrat i uzrokovati zgrušavanje plazme. U ovom slučaju, preporučljivo je napraviti Gram i katalazni test.

-Važno je, u ispitivanju epruvete, nadzirati reakciju svakih 30 minuta, jer postoje sojevi S. aureus koji stvaraju visoke koncentracije fibrinolizina i brzo će razrijediti novotvoreni ugrušak. Izbjegavajte lažne negativnosti.

-Kada nadzirate test, izbjegavajte naglo tresanje cijevi, to može uništiti pokretanje ugruška koji se kasnije neće obnoviti, uzrokujući lažne negativnosti.

Reference

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testovi za identifikaciju bakterija kliničkog značaja. 3. izd. Uredništvo Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Pro-Lab Laboratories. Kunić koagulira plazmu. Dostupno na: pro-lab.com
5. „Koagulaza”. Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 12. veljače 2019. godine, 04.23 UTC. 22. travnja 2019., 15:50 wikipedia.org.