THAYER MARTIN AGAR: OSNIVANJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

Agar Thayer Martin je vrlo hranjiv i krutina selektivni medij za izolaciju Neisseria meningitidis i Neisseria gonorrhoeae; obje poznate kao patogene ili klinički važne Neisserije.

Jedna od najvažnijih posebnih karakteristika Thayer Martin Agar je njegov visoki sadržaj prehrambenih dodataka. Ovo svojstvo je bitno jer su Neisserije prehrambeni mikroorganizmi vrlo zahtjevni i stoga ne rastu u uobičajenim medijima.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin poslovni medij. Slika izvora 1: Snimio autor MSc. Marielsa Gil, slika 2. Pixinio.com bakterizirane, modificirane, Thayer, Martin, agar.

S druge strane, budući da se ti mikroorganizmi normalno nalaze u nesterilnim područjima, dodavanje inhibitora je potrebno kako bi se spriječio rast prateće flore, bez utjecaja na razvoj roda Neisseria.

Ovaj agar sastoji se od GC baznog agara, hemoglobina, dodatnih dodataka prehrani i kompleksa inhibicijskih tvari (antibiotika i antifungalnih lijekova). Komercijalne kuće prodaju svaki dodatak zasebno.

Uzorak koji će se sijati u ovaj medij ovisit će o mikroorganizmu koji se traži. Za Neisseria gonorrhoeae idealni su uzorci iz vagine i uretre. Dok su za Neisseria meningitidis najčešće korišteni uzorci su CSF, faringealni i nazofaringealni eksudati.

osnova

Neisserije su mikroorganizmi klasificirani kao dosadni i zato je njihova izolacija teška. Stoga je Thayer Martín složen medij i svaka njegova komponenta ispunjava funkciju koja je objašnjena u nastavku:

GC bazni agar

GC agar sadrži proteozni pepton, kukuruzni škrob, natrijev klorid, kalijev fosfat, mono kalijev fosfat i agar-agar. Njegove komponente pružaju osnovne hranjive tvari za razvoj mikroba, neutraliziraju otrovne masne kiseline, pomažu u održavanju osmotske ravnoteže, definiranju pH i mediju daju čvrstu konzistenciju.

Hemoglobin

Hemoglobin osigurava faktore V i X (nikotinamid adenin dinukleotid NAD i hemin, respektivno). Iz tog razloga, u ovom mediju raste i vrsta Haemophilus. Hemoglobin se može dobiti komercijalno u dehidriranom obliku ili se u medij može dodati svježa defibrinirana goveđa krv.

Dodatak obogaćivanju

S druge strane, u Thayer-Martin mediju treba dodati i dodatak za obogaćivanje, jer hranjive tvari sadržane u baznom agaru nisu dovoljne za potrebe roda Neisseria.

Dodatak obogaćivanju koji se najčešće koristi naziva se isovitalex. Sadrži glutamin, adenin, NAD, kokarboksilazu, gvanin, željezni nitrat, p-amino benzojevu kiselinu, vitamin B12, tiamin i glukozu. Svi su ovi spojevi potrebni za pravilan razvoj patogenih Neisserija.

inhibitori

Kako je riječ o visoko hranjivom mediju, moraju se koristiti inhibitori koji sprječavaju rast mikroorganizama iz uobičajene flore područja i na taj način pogoduju izolaciji roda Neisseria.

Inhibitorski kompleks sastoji se od vankomicina, kolistina i nistatina. Vankomicin inhibira rast gram-pozitivnih bakterija, kolistin sprečava rast gram-negativnih bakterija kao što su pseudomonas i neke saprofitne neisserije, a nistatin djeluje na kvasce poput Candida albicans.

Međutim, Thayer Martin Agar kasnije je modificiran; promjene su se sastojale od dodatka trimetoprima, povećanja količine agara i dodatka dodatne glukoze. Te su promjene značajno poboljšale oporavak vrsta Neisseria gonorrhoeae.

Treba napomenuti da trimetoprim inhibira rast roda Proteus i njegovo posljedično formiranje rojeva. U tom smislu, antibiotici pružaju selektivni karakter mediju Thayer Martin.

priprema

Originalni agar Thayer Martin

-GC agar

Odvažite 8,2 g dehidriranog GC medija i suspendirajte u 100 ml. Pomiješajte i kuhajte 1 minutu uz često miješanje da se potpuno otopi. Sterilizirajte smjesu u autoklavu na 121 ° C 15 minuta.

- 2% hemoglobina

Suspenzirati 2 g dehidriranog hemoglobina u 2 ili 3 ml vruće destilirane vode dok se ne stvori jednolika smjesa. Dodajte malo po malo vode da biste ispunili volumen od 100 ml. Suspenzija mora biti homogena prije sterilizacije.

Sterilizirajte u autoklavu 15 minuta.

-Naplata za obogaćivanje

Rekonstituirajte komercijalnu bočicu s razrjeđivačem koji nudi isto trgovačko poduzeće. Dobro promiješajte. Količina sredstva za razrjeđivanje bit će navedena u uputama o kompletu.

Dodatak inhibicije VCN (vankomicin, kolistin, nistatin)

Rekonstituirajte bočicu s razrjeđivačem koji nudi komercijalno poduzeće. Dobro promiješajte. Količina sredstva za razrjeđivanje bit će navedena u uputama o kompletu.

-Prepared

Za svakih 100 ml GC agara postupite kako slijedi:

Kad GC agar napusti autoklav, ostavite ga da se ohladi na temperaturu od približno 50 ° C i dodajte 2 ml pripremljene otopine hemoglobina, 2 ml dodatka za obogaćivanje (izobitalex ili britalex) i 2 ml dodatka inhibicije. Pomiješajte i poslužite u sterilnim Petrijevim posudama.

Ostavite da se stvrdne i pohranite u hladnjak do upotrebe.

Boja pripremljenog medija je trešnja crvena. Konačni pH medija je 7,2 ± 0,2

Izmijenjeni Thayer Martin agar

Odvažite 8,2 g dehidriranog GC medija i suspendirajte u 100 ml. Dodajte 1 g agar-agara i dodajte 0,3 g glukoze. Pomiješajte i kuhajte 1 minutu uz često miješanje da se potpuno otopi. Sterilizirajte smjesu u autoklavu na 121 ° C 15 minuta.

Pripremite dodatak hemoglobinu i obogaćivanju kako je ranije opisano.

Dodatak za suzbijanje je VCNT (vankomicin, kolistin, nistatin, trimetoprim).

-Prepared

Postupite kako je opisano za izvorni agar Thayer Martin.

Koristiti

Thayer Martin Agar treba pustiti da se ugrije prije nego što se uzorci nasuku. Uobičajeni uzorci su faringealni bris, bris nosa, vaginalni, uretralni i / ili rektalni iscjedak i CSF.

Koristite svježe uzorke i napravite snažne inokule na agaru. Uzorci se sjedaju izravno istjecanjem materijala, a zatim se iscrpka izlije na površinu.

Ploče se inkubiraju na 35-37 ° C, tijekom 24 do 48 sati u microaerophilic posudu (5% CO ₂). Na kraju vremena inkubacije ploče se pregledavaju na male, sive i ponekad mukoidne kolonije.

Izvršite Gram i potvrdne biokemijske testove na sumnjivim kolonijama.

QA

Sljedeći mikrobni sojevi mogu se koristiti za kontrolu kvalitete Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 i Neisseria meningitidis ATCC 13090; očekuje se zadovoljavajući razvoj u oba soja.

Treba uključiti i sljedeće sojeve: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 i Candida albicans ATCC 10231. U svim njima se očekuje potpuna ili djelomična inhibicija u ovom mediju.

Ograničenja

-Moramo imati na umu da bakterije koje su rezistentne na inhibitore mogu koristiti u mediju.

- Postoje sojevi bakterije Neisseria gonorrhoeae koji mogu biti osjetljivi na koncentraciju vankomicina koji se koristi. Iz tog razloga, preporučuje se upotreba čokoladnog agarja s dodatkom izovitalex, ali bez inhibitora.

- Postoje sojevi kvasca otporni na nistatin koji mogu rasti u ovom mediju i ometaju izolaciju patogenih Neisserija, posebno gonokoka.

Reference

1. Valtek dijagnostičke laboratorije. Thayer-Martin Agar, 2016. Dostupno na: com
2. Britannia Laboratories. Thayer Martin Medium Modified. 2010. Dostupno na: britanialab.com
3. Suradnici na Wikipediji. Thayer-Martin agar. Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 26. listopada 2017. 16:33 UTC. Dostupno na: wikipedia.org 4. Pristupljeno 28. veljače 2019. godine.
4. Britannia Laboratories. GC agar. 2010. Dostupno na: britanialab.com.
5. Laboratoriji BBL ™ srednje obogaćivanje osjetljivih mikroorganizama. 1999. Dostupno na: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.