Bizmut sulfit agara je krutina medij selektivan i diferencijal kulture, posebno formulirani za izolaciju Salmonella enterica podvrsta enterica serotipa typhi, među ostalim vrstama Salmonella. Medij je poznat i kao BSA agar po akronimu na engleskom Bismuth Sulfite Agar.
Izvornu formulu za bizmut sulfit agar stvorili su 1927. Wilson i Blair (željezni medij glukoze bizmut sulfata); sadržavao je natrijev sulfit, glukozu, rastvor bizmuta, amonijev citrat, željezni sulfat i agar-agar.
Rast od 48 sati inkubacije Salmonella sp na bizmut sulfit agaru. Izvor: Pixnio.com Autor: Dr. WR Erving, USCDCP
Danas postoji modifikacija izvornog medija, koji se sastoji od ekstrakta mesa, mesa i kazeinskih peptona, indikatora bizmut sulfita, glukoze, dinatrijevog fosfata, željeznog sulfata, svijetlo zelene boje i agar-agarja.
Postoji mnogo sredstava za izolaciju vrsta salmonele, ali kada je u pitanju oporavak serotipa Typhija, bizmut sulfit agar ima značajnu prednost nad njima, jer se u većini slučajeva dobiva vrlo nizak ili nikakav oporavak ovog mikroorganizma., Međutim, potrebno je koristiti više vrsta medija prilikom pokušaja izolacije enteropatogena, jer je bizmut-sulfit agar manje učinkovit za ostale vrste salmonele i za rod Shigella koji su inhibirani ili se razvijaju vrlo slabo. u ovom agaru.
Valja napomenuti da je od svih vrsta salmonele, serotip Typhija jedan od najvažnijih enteropatogena u ljudi, a to je njegov jedini rezervoar. Ovaj serovar uzrokuje tifusnu groznicu, gastroenteritis, bakteremiju i septikemiju.
Iz tog razloga je relevantno uključiti ovaj agar prilikom analize vode, izmeta ili uzoraka hrane kod kojih se sumnja na njegovu prisutnost.
osnova
Kao i većina medija kulture, bizmut sulfitni agar sadrži hranjive tvari za promicanje rasta bakterija, kao što su peptoni i ekstrakt mesa. Isto tako, glukoza djeluje kao izvor energije i ugljika.
Međutim, neće rasti sve bakterije na ovom mediju, jer je bizmut sulfitni agar selektivni medij. Sadrži spojeve koji inhibiraju rast gram-pozitivnih mikroorganizama i određenih gram-negativnih bakterija. Ti spojevi su: indikator bizmut sulfita i svijetlo zelene boje.
Sa svoje strane, dinatrijev fosfat održava osmolarnost i pH medija.
Dodatno, bizmut sulfit agar medij je diferencijalna zahvaljujući prisutnosti željeznog sulfata, koji pokazuje formiranje H 2 S. H 2 S, koji tvore bakterije reagira s željeznog sulfata i oblici jasno vidljiv netopljivi crni talog.
Konačno, agar-agar daje čvrstu konzistenciju mediju.
priprema
Odvažite 52,3 g dehidriranog medija i otopite u jednoj litri vode. Zagrijte smjesu da kuha 1 minutu uz često miješanje, dok se potpuno ne otopi. Ne pregrijavajte se previše. Ovaj medij nije autoklasivan, jer ekstremna toplina oštećuje medij kulture.
Ostaviti na 45 ° C i protresti prije posluživanja u sterilnim Petrijevim posudama. Preporučuje se izrada ploča dobre debljine. Da biste to učinili, u svaku se ploču mora uliti 25 ml. Pustite da se stvrdne. Kako se radi o mediju koji nije steriliziran, normalno je da se sugerira njegova neposredna upotreba.
Međutim, istraživanje koje je proveo D'aoust 1977. pokazalo je da postoji bolji oporavak Salmonella typhimurium i Salmonella enteritidis kao srednjeg starenja bizmut sulfita agar, što ne utječe na performanse za serovare Typhi i Paratiyphi B.
D'aoust preporučuje da se ploče koriste na hladnom danu 4, iako upozorava da kako srednja starost selektivnost opada, a sojevi Proteus vulgaris lakše se razvijaju.
Iz tog razloga za visoko kontaminirane uzorke, poput izmeta, poželjno je koristiti svježe pripremljeni medij. U protivnom koristite 4. dan njegove pripreme. Drugi autori preporučuju upotrebu tanjura dan nakon pripreme, pohranjene u hladnjaku.
Ohlađene ploče moraju se temperirati prije upotrebe. PH sredstva treba biti 7,5 ± 0,2. Sirovi medij je bež, a pripremljeni medij je zelenkasto-sivi opalescentni.
Prijave
Među uzorcima koji se mogu saditi u ovom mediju su uzorci fekalija, pitke ili otpadne vode i hrane.
Da bi se poboljšali izolati, preporučuje se provesti tretman pred obogaćivanje bujonom laktoze i nakon obogaćivanja s juhom od tetrationata ili s cistinom selenita, prije sjetve na bizamut sulfit agar.
Ploče se inkubiraju na 35 ° C ± 0,2 tokom 24 do 48 sati, u aerobiozi.
Karakteristike kolonija na agramu bizmut sulfita
Kolonije salmonele tipike obično se vide na ovom agaru u roku od 24 sata s crnim središtem i okruženi su svijetlozelenim oreolom. Dok za 48 sati postaju potpuno crne zbog stvaranja sumporovodika.
-Ovaj medij inhibira većinu vrsta roda Shigella.
- S. Typhi i S. arizonae mogu dati vrlo slične kolonije.
-U koliformi koje proizvode H 2 S, kao što su i Proteus Citrobacter proizvode kolonija sličnim onima salmonele, tako da je potrebno provesti biokemijske identifikacijskih testova.
- Mora se izvesti dobra pruga kako bi se dobile izolirane kolonije; To je jedini način promatranja tipičnih karakteristika kolonija roda Salmonella.
QA
Za kontrolu sterilnosti, nekinolirana ploča se inkubira na 37 ° C, očekuje se da neće doći do rasta ili promjene boje.
Za kontrolu kvalitete poznati sojevi kao što su:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Očekuje se da će Escherichia coli i Shigella flexneri djelomično inhibirati razvijanjem zeleno-smeđe i smeđe kolonije. Dok obje salmonele moraju imati izvrstan razvoj s crnim kolonijama s metalnim sjajem, i konačno, Enterococcus faecalis mora biti totalno inhibiran.
Reference
- Wilson, W., i EM McV. Blair. Upotreba željeznog medija glukoznog bizmut-sulfata za izolaciju vrste B. typhosus i B. proteus. Časopis za higijenu, 1927; 26 (4), 374-391. Preuzeto s.jstor.org
- D'aoust JY. Učinak uvjeta skladištenja djelovanja bizmut sulfitnog agara. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Dostupno na: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD laboratoriji. Vismut-sulfitni agar prema WILSON-BLAIR. 2009.Dostupno na: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2).pdf
- HMI Laboratoriji. Bizmut sulfit agar. 2017. Dostupno na: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G i Ybarra M. Bakteriološka kvaliteta sirovog kozjeg mlijeka proizvedena u Miravallesu, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54