TRYPTICASEIN SOJIN AGAR: OBRAZLOŽENJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

Soja agar triptona ili triptikaza Soy Agar je krutina medij kulture i prehrambene selektivan. Označen je slovima TSA zbog akronima na engleskom Trypticase Soy Agar. Sastoji se od tripteina, sojinog peptona, natrijevog klorida i agar-agara.

Zbog svoje velike hranjive moći, idealan je za uzgoj umjereno zahtjevnih i nezahtjevnih mikroorganizama. Sredstvo bez dodatnih dodataka ne preporučuje se za primarne kulture, ali je vrlo korisno za subkultiviranje čistih sojeva i održavanje njihove održivosti, između ostalih namjena.

Klinovi Trypticasein soje agar u epruvetama s kapicama od bakelitita. Izvor: Fotografija koju je snimio autor MSc. Marielsa Gil.

Također, ovaj agar služi kao osnova za pripremu obogaćenog medija kao što je krvni agar, posebno kada je potrebno promatrati uzorke hemolize i montirati takto optoquina i bacitracina, potrebnih za dijagnozu Streptococcus pneumoniae i Streptococcus pyogenes.

S druge strane, u kombinaciji s antibioticima, korisno je za izoliranje klinički važnih fakultativnih i strogih anaerobnih mikroorganizama iz uzoraka sa miješanom florom.

Konačno, sastav tripicasein soje agar i njegova učinkovitost udovoljavaju zahtjevima koje su utvrdile različite farmakopeje (europska, japanska i sjevernoamerička).

osnova

Za pravilan razvoj bakterija potrebno je prisustvo zaliha energije, poput aminokiselina, vitamina, purskih i pirimidnih baza.

U tom smislu, tripteinski i sojin pepton daju ove hranjive tvari mikroorganizmima, omogućujući tako njihov puni razvoj. Međutim, za brze bakterije potrebno je ovaj agar dopuniti defibriniranom ili zagrijanom krvlju kako bi se povećalo njegovo obogaćivanje.

S druge strane, dodaju li se antibiotici medijumu, on postaje selektivni medij. Može se dodati i 0,6% ekstrakta kvasca koji favorizira izolaciju vrsta roda Listeria, dok je dodatak cistin telurita i janjeće krvi idealan za Corynebacterium diphteriae.

Konačno, natrijev klorid daje osmotsku ravnotežu mediju, a agar daje čvrstu konzistenciju.

priprema

Ploče sojeg agarita Trypticasein

Za pripremu tripsinaseinog sojinog agara treba digitalno izmjeriti 40 g dehidriranog komercijalnog medija. Otapa se u jednoj litri destilirane vode koja se nalazi u tikvici.

Smjesa se ostavi 5 minuta da odmara, a zatim se prebaci u izvor topline kako bi se otopio medij. Treba ga često miješati i kuhati 1 do 2 minute. Nakon toga, medij se sterilizira u autoklavu na 121 ° C 15 minuta.

Ostaviti na 50 ° C i rasporediti u sterilnu Petrijevu posudu. Ostavite da se očvrsne, preokrenite, narežite na ploče i čuvajte u hladnjaku.

Konačni pH medija trebao bi biti 7,3 ± 0,2.

Treba napomenuti da je boja dehidriranog medija kulture svijetlo bež boje i treba je čuvati na temperaturi od 10 do 35 ° C, na suhom mjestu.

Sa svoje strane, pripremljeni agar svijetlo je jantarne boje. Pripremljene ploče čuvajte u hladnjaku (2-8 ° C) do upotrebe.

Ploče moraju prije upotrebe dostići sobnu temperaturu.

Ploče tripicasein soja agar nadopunjene krvlju

Krvni agar pripravlja se dodavanjem 5% defibrinirane krvi u vrijeme hlađenja tripsina sojinog agara na 50 ° C. Smjesa se homogenizira rotiranjem nježnim pokretima.

Poslužite u sterilnim Petrijevim posudama. Srednja boja trebala bi biti trešnja crvena.

Ploče tripicakaina soje agar nadopunjene zagrijanom krvlju

Da biste pripremili agar u krvi temeljen na TSA, postupite prema gore opisanim postupcima, ali kad napustite autoklav, ostavite da se odmori dok temperatura medija ne bude približno 56 do 70 ° C. U to se vrijeme krv stavi i miješa dok medij ne postane smeđi.

Poslužite u sterilnim Petrijevim posudama. Boja medija je čokoladno smeđa.

Trypticasein klinovi sojinog agara

Postupak pripreme agar-a jednak je onome opisanom za tanjure, s razlikom što se umjesto posluživanja medija na Petrijevim posudama, prije sterilizacije, raspoređuje između 10 do 12 ml u epruvetama s bakelitnim poklopcima.

Nakon toga epruvete se autoklaviraju na 121 ° C tokom 15 minuta. Kad odlaze, naginju se uz pomoć oslonca i puštaju se da se učvrsti.

Pripremljeni klinovi zasijavaju se po površini i služe kako bi se određeni zahtjevni mikroorganizmi održali održivim u određenom vremenu.

Prijave

Trypticasein sojin agar koristi se u sljedećim slučajevima:

- Kao baza za pripremu klasičnog agara za krv koji se rutinski koristi u većini laboratorija.

-Izolacija zahtjevnih bakterija.

-Opažanje uzorka hemolize.

-Izvođenje dijagnostičkih testova.

-Kao baza za pripremu specijalnog agenta krvi za Corynebacterium diphteriae, s cistinskim teluritom i janjetinom.

-Kao je baza za pripremu jagnjećeg agamera u krvi, plus kanamicin-vankomicin za rast anaeroba, posebno Bacteroides sp.

- Za održavanje nezahtjevnih sojeva (Bacterioteca).

- Broj aerobnih mikroba u ispitivanju mikrobne granice uzoraka vode, okoliša, hrane i kozmetike.

sije

Uzorci se mogu sijati izravno na površinu Trypticasein sojinog agera uz dodatak krvi ili drugih dodataka. Sije se iscrpljenošću.

Dok se ploče triptaseina soja agar bez aditiva obično koriste za subkultivaciju mikrobnih sojeva (bakterija ili kvasca).

QA

Kontrola sterilnosti

Za provjeru sterilnosti različitih medija pripremljenih s agetom triptikaseinskog soje preporučuje se sljedeće: od svake pripremljene šarže treba inkubirati 1 ili 2 neinokulirane pločice ili epruvete na 37 ° C tijekom 24 sata kako bi se pokazala njihova sterilnost. U svim slučajevima mora ostati bez rasta.

Ako se utvrdi zagađenje, mora se odbaciti cijela serija.

Kontrola rasta

Sljedeći bakterijski sojevi mogu se upotrijebiti za proučavanje ispravnog funkcioniranja triptikaseinskog sojinog agara: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 i Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Sojevi se sjeme i inkubiraju aerobno na 37 ° C tokom 24 sata.

U svim slučajevima rast mora biti zadovoljavajući.

Takođe se mogu koristiti gljivice poput Candida albicans Complex ATCC 10231 i Aspergillus niger ATCC 16404. Dobar rast očekuje se za oba soja.

Obrazac kontrole i hemolize rastvornog sojinog agara sa dodatkom krvi nadopunjen krvlju

Za provjeru ispravnog funkcioniranja krvnog agara pripremljenog s ovom bazom mogu se upotrijebiti sljedeći sojevi: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 i Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Sjeme se i inkubira na 37 ° C u mikroaerofilnosti 24 sata.

U svim slučajevima, rast bi trebao biti zadovoljavajući, uzimajući u obzir da treba primijetiti beta-hemolizu (svjetlosni halo oko kolonije) kod S. pyogenes, a alfa hemolizu (zelenkastu halo oko kolonije) u oba soja S. pneumoniae. kolonije).

Reference

1. Suradnici na Wikipediji. Trypticase Ja sam agar. Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 17. prosinca 2018., 15.47 UTC. Dostupno na:
2. Britannia Laboratories. Triptein sojin agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com
3. Neogeni laboratoriji. Triptični sojin agar. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
5. BD Laboratoriji. Trypticase Ja sam Agar. 2014. Dostupno na:.bd.com