Agar Hektoen ili enterički Hektoen agar krutom mediju je selektivno i diferencijal kulture. King i Metzger stvorili su ga u Institutu Hektoen radi izolacije enteropatogenih bakterija rodova Shigella i Salmonella.
Medij se sastoji od proteoznog peptona, ekstrakta kvasca, žučnih soli, laktoze, saharoze, salicina, natrijevog tiosulfata, natrijevog klorida, željeznog citrata, amonijevog citrata, bromotimolne plave boje, kiselog fuksina i agara. Ova formulacija omogućava razlikovanje roda Shigella i Salmonella od ostalih bakterija koje mogu rasti u ovom mediju.
A. Djevica Hektoen agar B. Sjeme Hektoen agar. Izvor: Flickr.com/ Originalni učitavač bio je Philippinjl na francuskoj Wikipediji.
Iako postoje i drugi mediji sa istom funkcijom kao Hektoen agar, on ima veću prednost u odnosu na druge medije, posebno kada želite obnoviti vrste Shigella.
Vrste obaju spolova uzrokuju teške gastrointestinalne probleme kod ljudi zbog konzumiranja kontaminirane hrane; stoga je prijenos fekalno - oralni. Zato je upotreba Hektoen agara uglavnom indicirana u mikrobiološkoj analizi uzoraka stolice i hrane.
osnova
Hektoen Agar sadrži peptone i ekstrakt kvasca kao izvor hranjivih sastojaka koji pružaju bitne elemente za razvoj mikroba.
Međutim, on ima i žučne soli koje djeluju inhibirajući rast nekih bakterija, posebno gram-pozitivnih i nekih gramno negativnih. Iz tog razloga se smatra selektivnim medijem.
S druge strane, Hektoen agar je diferencijalni medij. Ovo svojstvo dodjeljuje prisutnost fermentibilnih ugljikohidrata poput laktoze, saharoze i salicina, zajedno sa sustavom pH indikatora, koji su predstavljeni bromotimol plavim i kiselim fukssinom.
Sve bakterije koje mogu rasti na ovom mediju koje ne pripadaju rodu Salmonella i Shigella razvit će kolonije lososa ili naranče s izuzetkom roda Proteus. To je zbog fermentacije jednog ili više prisutnih ugljikohidrata, koji zakiseljuje medij, zbog čega se pH indikator okreće.
Sa svoje strane, rodovi Shigella i Salmonella nisu sposobni fermentirati nijedan od prisutnih ugljikohidrata, koristeći samo peptone kao izvor energije, koji alkalizira medij i stoga su njihove kolonije plavozelene.
U ovom mediju mogu se razlikovati i bakterije sposobne formirati sumporovodik (bezbojni plin). Natrijev tiosulfat djeluje kao izvor sumpora, dok je željezni citrat razvijač. Oba spoja omogućuju stvaranje crnog precipitata željeznog sulfida koji pokazuje reakciju.
Crni talog u središtu kolonije, s prozirnim haloom oko njega, daje izgled ribljeg oka. Ova karakteristika sugerira prisutnost roda Salmonella.
Konačno, natrijev klorid održava osmotsku ravnotežu i agar daje čvrstu konzistenciju mediju.
priprema
Odvažite 76 g dehidriranog medija i otopite u litri destilirane vode. Snažno protresite smjesu, a zatim ostavite da odmara 10 do 15 minuta. Može se grijati i kuhati, dajući rotacijske pokrete do potpunog otapanja. Ovaj medij nije autoklavljen.
Kad medij dosegne temperaturu od približno 45 ° C, u 20 ml sterilnog Petrijeva posuđa ulijeva se volumen od 20 ml.
Ostavljeno je da se agar očvrsne. U to su vrijeme spremni za upotrebu. Preporuča ih se odmah koristiti. Ako to nije moguće, čuvajte ih u hladnjaku do upotrebe.
Ploče treba izvaditi iz hladnjaka unaprijed prije sadnje kako bi se doveli do sobne temperature.
PH sredstva treba biti 7,5 ± 0,2. Boja dehidriranog medija je ljubičasta, a pripremljeni medij je smeđe-zelena.
Koristiti
Upotreba Hektoen agarja preporučuje se u potrazi za bakterijama roda Shigella i Salmonella u uzorcima stolice i hrane.
Mogućnost izolacije ovih bakterija znatno se povećava ako se uzorak prethodno obogati posebnim bujonima, kao što je juha selenita, juha od cistin selenita, tetrationati juha itd.
Inokulum mora biti jak, a sjetva se vrši prosijavanjem. Ploče se inkubiraju u aerobiozi 24 do 48 sati na 37 ° C.
Inkubacija za 48 sati preporučuje se jer su karakteristike kolonija jasnije za njihovu interpretaciju i diferencijaciju u ovom trenutku.
QA
Za provođenje kontrole kvalitete na ovom mediju koriste se certificirani bakterijski sojevi, kao što su: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 i Shigella sonnei ATCC 25931.
Očekivani rezultati su sljedeći: Salmonella typhimurium i Salmonella enteritidis trebaju razviti plavo-zelene kolonije sa ili bez crnog središta. Dok će vrsta Shigella rasti kao plavo-zelene kolonije.
Također se mogu uključiti sojevi Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.
U tim su slučajevima promatrane karakteristike sljedeće: E. coli i K. pneumoniae razvit će lososove narančaste kolonije u ovom mediju s oborinom iste boje oko njih. Dok će Proteus razviti plavo-zelene kolonije sa ili bez crnog središta.
Dok se S. aureus i E. faecalis moraju inhibirati, E. faecalis povremeno uspijeva rasti kao vrlo male, žute kolonije.
S druge strane, budući da ovaj medij nije autoklaviran, važno je procijeniti sterilnost medija. Stoga se od svake pripremljene šarže treba u aerobiozi inkubirati jednu do dvije neinokulirane pločice 24 sata na 37 ° C.
Očito se ne očekuje rast bilo koje vrste na tanjuru.
Ograničenja
- Vrste Proteus mogu se razviti u ovom mediju, a karakteristike njihovih kolonija mogu se pobrkati sa Salmonella ili Shigella vrstama. Iz tog razloga, svaka sumnjiva kolonija mora biti potvrđena biokemijskim testovima.
-Potrebno je pratiti upotrebu ovog medija s drugim manje selektivnim agarima, jer ako se traženi mikroorganizam nađe u niskim koncentracijama, on se možda neće razvijati u ovom mediju.
-Ne pregrijavajte se tijekom pripreme, jer pretjerana toplina mijenja sastav sredstva.
-Neobično, mogu se pojaviti kolonije salmonele koja fermentira laktozu i mogu proći neopaženo.
Reference
- Suradnici na Wikipediji. Hektoen enteric agar. Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 13. ožujka 2019. godine, 23:38 UTC. Dostupno na:.wikipedia.org / Pristupljeno 16. ožujka 2019.
- BD Laboratoriji. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Dostupno na: bd.com
- Britannia Laboratories. Hektoen Enteric Agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Hektoen agar. Dostupno na: f-soria.es
- Difco & BBL priručnik, Hektoen Enteric Agar. 2. izdanje. Dostupno na: bd.com/europe