Agar Endo i Endo medij krutina medij, diferencijal i s nekim stupnjem selektivnosti kultura. Originalnu formulu stvorio je Endo 1904. godine kako bi razlikovao fermentaciju laktoze od bakterija koje ne fermentiraju. U početku je bio dizajniran za izolaciju Salmonella typhi, ali kasnije se cilj medija okrenuo potrazi za coliformima.
Načelo Endo Agara ostalo je, ali njegova je formulacija tijekom godina doživjela bezbroj promjena. Trenutno se medij sastoji od peptidnog probavljanja životinjskog tkiva, laktoze, dikalijevog hidrogen fosfata, natrijevog sulfita, osnovnog fuksina i agara.
O: Virgin Endo Agar B: Sjemenik Endo Agar, u sredini agara možete primijetiti metalni sjaj soja E. coli. Izvor: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Glavna upotreba medija bila je povezana s izolacijom i diferencijacijom Gram negativnih bacila koji pripadaju obitelji Enterobacteriaceae i drugim bliskim obiteljima.
Dugo se koristila u otkrivanju koliformnih uzoraka u uzorcima vode, mliječnih proizvoda i hrane, ali danas su uporabu ovog medija istisnuli drugi sa sličnim funkcijama. Međutim, neke mikrobiološke laboratorije koriste ovaj agar za izolaciju Enterobacteriaceae iz uzoraka kliničkog podrijetla.
osnova
Endo agar sadrži peptone koji služe kao izvor aminokiselina, dušika, ugljika i energije, neophodne za rast nepotrebnih mikroorganizama.
S druge strane, lagano selektivan karakter agara daje se dodatkom natrijevog sulfita i baznog fuksina; obje komponente djelomično ili u potpunosti inhibiraju rast većine Gram pozitivnih bakterija.
Diferencijalni karakter daje prisutnost fermentirajućeg ugljikohidrata, koji je u ovom slučaju laktoza i bazični fuksin, koji ujedno služi kao pokazatelj pH.
Gram-negativne bakterije koje rastu na ovom agaru i sposobne fermentirati laktozu stvorit će jake ružičaste kolonije; koji su patognomoni Escherichia coli stvaranje tamnocrvenih kolonija s iridescentnim zelenkastim metalnim sjajem. To je zbog velike proizvodnje kiselina iz fermentacije ugljikohidrata.
Treba napomenuti da medij oko kolonije također pretvara jaku ružičastu boju. Dok fermentacija bez laktoze Gram negativne šipke tvore blijedo ružičaste kolonije slične srednjim ili bezbojnim.
Dikotalij hidrogen fosfat uravnotežuje pH sredstva i agar je komponenta koja daje čvrstu konzistenciju.
priprema
Endo agar
Odmjeriti 41,5 g dehidriranog medija i otopiti u 1 litri destilirane vode. Zagrijavajte smjesu uz često miješanje dok se potpuno ne otopi medij. Sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C, pri tlaku od 15 lb, tokom 15 minuta.
Kada je izvadite iz autoklava, ostavite da se ohladi na temperaturu od približno 45-50 ° C, protresite smjesu da se homogenizira prije posluživanja. Ulijte 20 ml u sterilne Petrijeve posude.
Ostavite da se tanjuri stvrdne, preokrenite i pohranite u ploču ili omotajte tamnim papirom prije nego što pohranite u hladnjak. Vrlo je važno zaštititi pripremljeni medij od izravnog svjetla. Najbolja praksa je pripremiti točan iznos koji će vam trebati.
Ako se čuvaju u hladnjaku, ploče treba ostaviti da se zagrije prije upotrebe.
PH sredstva treba biti između 7,2 i 7,6, a boja pripremljenog medija je blijedo ružičasta.
M-Endo agar varijanta
Postoji još jedna verzija Endo agara (m-Endo) koja slijedi formulu McCarthyja, Delaneya i Grasso-a, koja sadrži više spojeva i varira u obliku pripreme.
Ova varijanta sadrži: laktozu, triptozu, enzimatsku probavu kazeina, enzimatsku probavu životinjskog tkiva, natrijev klorid, dvoslojni kalijev fosfat, natrijev sulfit, ekstrakt kvasca, monobazni kalijev fosfat, osnovni fuksin, natrijev deoksilat, lauril sulfat natrij i agar.
U tom se slučaju 51 g dehidriranog medija izvaga i suspendira u 1 litri destilirane vode koja sadrži 20 ml etanola.
Zagrijavajte lagano miješajući dok se medij potpuno ne otopi. Ne smije se pregrijavati i ne smije se autoklavirati. Nakon što je smjesa homogena, poslužite u sterilnim Petrijevim posudama i ostavite da se stvrdne.
Koristiti
U nekim se zemljama još uvijek koristi ukupni i fekalni koliform u uzorcima hrane i vode, posebno prisutnost Escherichia coli kao glavnog pokazatelja fekalne kontaminacije.
M-Endo Agar preporučuje Američko udruženje za javno zdravstvo (APHA) za nadgledanje i kontrolu programa dezinfekcije i pročišćavanja otpadnih voda, kao i za procjenu kvalitete pitke vode.
Najčešće korištena metoda je membranska filtracija, nakon obogaćivanja uzorka s Lauril sulfatnom juhom tijekom 2 do 4 sata.
Može se koristiti i kao zamjena za agar EMB u mikrobiološkoj analizi hrane i vode najvjerojatnijom brojevnom tehnikom (MPN), posebno u potpunom potvrdnom stadiju za potvrđivanje prisutnosti E. coli iz oblačnih EC bujona.
QA
Poznati ili certificirani kontrolni sojevi zasijavaju se za procjenu kvalitete pripremljene serije Endo agar.
Među sojevima koji se mogu upotrijebiti za ovu svrhu su: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 12022, Sojevi su zasijani iscrpljenošću i inkubiraju se na 37 ° C tokom 24 sata u aerobiozi.
Očekivani rezultati su:
- Za Escherichia coli: jake crvene kolonije, s metalnim sjajem.
- Za E. cloacae i K. pneumoniae kolonije bi trebale biti ružičaste mukoide.
- Kod S. typhimurium, S. flexneri i P. mirabilis kolonije su obično blijedo ružičaste ili bezbojne.
- Konačno, očekuje se da će E. faecalis biti djelomično inhibiran, pa njegov rast mora biti slab s vrlo malim, jakim ružičastim kolonijama.
Ograničenja
-Endo medij ima malu selektivnu snagu, pa je moguće da neki Gram pozitivni mikroorganizmi poput stafilokoka, enterokoka, pa čak i kvasca mogu rasti.
-Ostali bacili koji ne pripadaju obitelji Enterobacteriaceae mogu se razviti u ovom mediju, poput Pseudomonas sp i Aeromonas sp. Karakteristike ovih sojeva su bezbojne nepravilne kolonije.
-Ovaj pripremljeni medij vrlo je osjetljiv na svjetlost, stoga, produljeno izlaganje njemu pogoršava indikatorski sustav i nepovratno oštećuje medij.
-Sastavni dijelovi medija smatraju se kancerogenim, pa treba izbjegavati izravan kontakt.
- Dehidrirani medij je vrlo higroskopan i mora se čuvati u originalnoj posudi na sobnoj temperaturi, dobro zatvoren i na suhom.
Reference
- BD Laboratoriji. Endo Agar. 2013. Dostupno na: bd.com
- Neogeni laboratoriji. M Endo Agar. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
- Endo Agar. Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 7 rujna 2017, 08:27 UTC. 28. veljače 2019., 22:55. Dostupno na: en.wikipedia.
- MercK laboratorij. Endo agar. 2019. Dostupno na: merckmillipore.com
- Laboratoriji s tehničkim listovima. M –Endo Agar LES. 2015. Dostupno na: liofilchem.net