CZAPEK AGAR: OBRAZLOŽENJE, PRIPREMA, UPOTREBA I OGRANIČENJA - BIOLOGIJA - 2025

Czapek (CZA) traje je selektivni medij krutina posebno dizajniran za uzgoj saprofitskih bakterije i gljivice. Stvorili su ga botaničar Friedrich Johann Franz Czapek, poljskog porijekla, i američki kemičar Arthur Wayland Dox; zbog toga je ovaj agar poznat i kao medij Czapek-Dox.

Izvorni medij je bio tekuć, ali je kasnije dodan agar da bi postao čvrsti medij. Czapek medij sastoji se od natrijevog nitrata, bikokalijevog fosfata, magnezijevog sulfata, kalijevog klorida, željeznog sulfata, saharoze, agara i destilirane vode.

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Izvor: A. Medmyco / B. Foto: dr. David Midgley. Wikipedia.com

PH Czapekovog agara je 7,3, ali postoji varijanta kojoj je dodano 10% mliječne kiseline, čiji pH ostaje na 3,5. Ovaj kiseli medij koristi se za uzgoj acidofilnih mikroorganizama.

S druge strane, neke su trgovačke kuće izmijenile sastav Czapekovog agara promjenom magnezijevog sulfata i bikalijevog fosfata u glicerofosfat; Ova modifikacija sprječava da se formira talog magnezijevog fosfata promatran uobičajenom formulom. Isto tako, postoji još jedna varijanta kojoj se dodaje ekstrakt kvasca.

Napokon, agar Czapek preporučuje Američko udruženje za javno zdravstvo APHA za proučavanje Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp i Penicillium sp. Ove vrste karakteriziraju mikroorganizmi u okolišu i oportunistički patogeni.

osnova

Ovaj medij sadrži saharozu; Taj ugljikohidrat služi kao izvor ugljika, dok je natrijev nitrat izvor dušika, ali za razliku od ostalih medija dušik je anorganski.

Iz tog razloga, Czapekov medij smatra se selektivnim, jer mogu rasti samo mikroorganizmi koji mogu koristiti anorganske spojeve kao jedini izvor dušika.

Kao regulirajuća tvar osmolarnost medija je bipotalijev fosfat. Sa svoje strane, magnezijev sulfat, kalijev klorid i željezni sulfat pružaju bitne minerale za rast saprofitnih (slobodno živih) mikroorganizama. Ova formula tvori talog magnezijevog fosfata.

Konačno, agar-agar je spoj koji daje čvrstu konzistenciju mediju, a voda otapalo za sve komponente.

S modificiranom formulom Czapek agar, ne nastaje talog i poboljšava performanse rasta nekih gljivica.

Ekstremna kiselost kiseline Czapek Agar čini ga selektivnijim sredstvom, omogućavajući samo rast acidofilnih mikroorganizama, sposobnih za korištenje anorganskog dušika. U međuvremenu, Czapek-kvasni agar poboljšava rad određenih gljiva.

priprema

Srednja Czapek-Dox

Odmjeriti 49 g dehidriranog medija kulture i otopiti u destiliranoj vodi. Primijenite toplinu do vrenja. Smjesu tresti često dok se potpuno ne otopi.

-Czapek Agar Klinovi

Otopljenu smjesu raspodijelite u epruvete i autoklavite na 121 ° C tokom 15 minuta. Pri uklanjanju iz autoklava homogenizirajte prije polaganja epruveta i pustite da se stvrdne.

-Czapek ploče s agarima

Sameljite otopljenu smjesu na 121 ° C 15 minuta i ostavite da se ohladi na 50 ° C, homogenizirajte i ulijte 20 ml u sterilnu Petrijevu posudu. Ostavite da se stvrdne, preokrenite i čuvajte u hladnjaku do upotrebe.

PH bi trebao ostati na 7,3 ± 0,2. Boja dehidriranog medija je bijela, a pripremljeni medij svijetlo žuta, blago mutna zbog prisutnosti taloga flokulacije.

Czapek medij kiselog pH

Pripremite se kako je već opisano, ali dodajte 10 ml sterilne 10% mliječne kiseline u svaku litru pripremljenog medija. Modificirani Czapekov medij trebao bi biti pri pH 3,5 ± 0,2.

Izmijenjeni Czapek Medium

Odvažite 45,4 g dehidriranog medija i otopite u 1 litri vode. Ostatak pripreme je isti kao što je gore opisano. Boja dehidriranog medija je bijela, a pripremljeni medij je bjelkasti. Konačni pH medija je 6,8 ± 0,2.

Czapek-kvasac medij

Također se naziva i ekstrakt kvasca Aga Czapek (CYA). Sadrži elemente klasičnog Czapekovog agara plus ekstrakt kvasca.

Koristiti

Medij Czapek koristi se između ostaloga za traženje saprofitnih mikroorganizama u uzorcima zemlje, povrća, žitarica, zraka, insekata.

Czapekov agar s kiselim pH koristi se za rast acidofilnih mikroorganizama, dok je modificirani Czapekov agar posebno koristan za stvaranje klamidospora u vrstama Candida albicans kompleksa.

Konačno, Czapek-kvasni agar vrlo je koristan za izolaciju Aspergillusa i Penicilliuma.

sije

-Czapek agar

Za pretragu aktinomiceta u tlu postupite na sljedeći način: uzorak se tretira fenoliziranom vodom 30 minuta, a zatim se sije 1 ml suspenzije na Czapekov agar. Inkubirajte 5 do 7 dana na 28 ° C.

Za uzorke povrća, žitarica i insekata stavljaju se izravno na agar. Na površini agara možete napraviti i razrjeđenja i sjeme 0,1 ml.

-Modificirani Czapek agar

Za sijanje se koristi ravna petlja ili igla, impregnira se brisom i agar se inokulira probijanjem dok ne dotakne bazu ploče. Inkubirajte 24 sata na 28 ° C i pregledajte pod mikroskopom iznad i ispod ploče da biste vidjeli je li klamidospor nastao.

Temperatura i vrijeme inkubacije

Temperatura i vrijeme inkubacije variraju ovisno o vrsti mikroorganizma kojeg treba izolirati. Ploče se obično inkubiraju jedan do dva tjedna u temperaturnom rasponu od 20 do 25 ° C.

Međutim, postoje specifični uvjeti za neke sojeve. Na primjer, većina vrsta roda Aspergillus optimalno raste na 30 ° C; međutim A. fumigatus raste na 50 ° C.

S obzirom na vrijeme inkubacije jedan ili dva tjedna je normalno, međutim, Candida albicans može se razviti za 24 do 48 sati pri 25 ° C.

Karakteristike nekih kolonija na ovom mediju

-Penicillium atrovenetum

Razvija se u 12 dana inkubacije na 27 ° C. Njihove kolonije su male (25 mm).

Kolonije su baršunaste pojave, s izraženim bijelim obrubom i plavo-zelenom nijansom u središtu koja sa godinama postaje siva. Naličje kolonije je narančasto, a sredina je iste boje zbog proizvodnje pigmenta.

-Aspergillus niger

Razvija se s bijelim do žutim micelijem i crnim sporama.

-Candida albicans

Razvijaju se kremaste svijetlo bež kolonije. U modificiranom Czapekovom agaru tvori klamidospore.

-Aspergillus parasiticus

Tamnozeleni micelij razvija se za 7 dana na 25 ° C.

QA

Da bi se procijenila kvaliteta kulture kulture, mogu se zasaditi certificirani kontrolni sojevi, poput: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger razvija bijeli do žuti micelij i crne spore za oko 5 dana, dok će Candida albicans imati zadovoljavajući rast u 24 sata inkubacije na 25 ° C; kolonije su krem ​​boje.

Ograničenja

Neke studije otkrile su da je za oporavak aktinomiceta agar s najboljim prinosom agar dekstroze krumpira, a na drugom mjestu je agar Czapek, ali za oporavak Aspergillusa i penicilliuma, Czapek agar je onaj koji pruža najveću stopu oporavka.

Reference

1. Dávila M i sur. Antagonistički aktinomiceti protiv fitopatogenih gljiva od poljoprivrednog značaja. Vlč. Mex. Znanost. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Dostupno na: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Pšenice Á. Izolacija sojeva Aspergillus niger, koji proizvode ohratoksin A, u pohranjenoj zelenoj kavi (Coffea arabica). Vlč. Mex. Mikrofon. 2010; 32: 63-68. Dostupno na.scielo.org.
3. Suradnici na Wikipediji. Czapek srednja. Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 13. siječnja 2019. 20:30 UTC. Dostupno na: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Izmijenjeni Czapek-Dox Agar. Dostupno na: condalab.com
5. Microkit Media Media. Czapek-Dox Agar. Diosponible u: Medioscultivo.com