TRAŽENI AGAR: OBRAZLOŽENJE, UPOTREBA I PRIPREMA - BIOLOGIJA - 2026

CLED agar (cistin-Laktoza elektrolita deficijentnih) je čvrsti medij kulture diferencijal koji se koristi za dijagnosticiranje infekcija mokraćnog sustava. Sastav kultivacijskog medija dizajniran je za dobar rast mokraćnih patogena i idealan je za kvantifikaciju jedinica koje tvore kolonije (CFU).

Medij za kulturu CLED nije selektivan, budući da u njemu mogu rasti Gram negativni i Gram pozitivni mikroorganizmi. Ali to nije problem, jer je većina UTI uzrokovana samo jednom vrstom mikroorganizama.

CLED agar

U slučaju polimikrobnih infekcija mogu se dobiti 2 ili 3 različite bakterije, ali vrlo su rijetke i većinom su to kontaminirani uzorci.

Među Gram negativnim bakterijama koje mogu rasti u ovom mediju su bacili koji pripadaju obitelji Enterobacteriaceae i drugi enterički bacili, pri čemu su uropatogeni najčešće izolirani u uzorcima urina, a to su: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, između ostalih.

Isto tako, među Gram pozitivne bakterije koje mogu rasti u ovom mediju mogu se uzgajati Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp, pa čak i kvasci, poput kompleksa Candida albicans, mogu rasti.

Međutim, zbog kemijskog sastava medija, on ne dopušta rast nekih zahtjevnih genitourinarnih patogena, poput Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, između ostalih.

CLED agarsko obrazloženje

Medij za kulturu CLED kao izvor energije sadrži ekstrakt mesa, hidrolizat pankreasa, kazein i hidrolizat želatine. Omogućuju hranjive tvari za razvoj nezahtjevnih bakterija.

Sadrži i cistin, aminokiselinu koja omogućava rast koliformnih oblika, razlikovanih po maloj veličini.

Isto tako, sadrži laktozu kao fermentirani ugljikohidrat, zbog čega je ovaj medij različit; moći razlikovati fermentacijske bakterije od ne-laktozne fermentacije.

Bakterije koje fermentiraju uzrokuju da se pH medija promijeni uslijed proizvodnje kiselina, razvijajući žute kolonije, dok bakterije koje ne fermentiraju ne stvaraju promjene u mediju, pa poprimaju boju izvornog agara, zelenu.

Reakcija fermentacije otkriva se zahvaljujući prisutnosti pH pokazatelja, koji je u ovom mediju bromothimol plav.

S druge strane, niska koncentracija elektrolita u mediju inhibira tipični invazivni rast roda Proteus, nazvan efekt rovanja. To stvara prednost u odnosu na druge medije, jer omogućava brojanje CFU-a, uključujući i ako je prisutan rod Proteus.

Međutim, niska koncentracija elektrolita inhibira rast nekih vrsta roda Shigella, što predstavlja nedostatak u odnosu na druge podloge.

Obrazloženje za CLED agar (Bevis)

Postoji varijanta ili modifikacija ovog medija koju je napravio Bevis, koji je u originalni sastav ubacio kiselinski fuksin (Andradeov pokazatelj). Djeluje zajedno s bromothymol plavom bojom kako bi se razlikovalo fermentiranje od bakterija koje ne fermentiraju.

Razlika između konvencionalnog i modificiranog medija je boja koju kolonije poprimaju. U slučaju bakterija koje fermentiraju laktozu, kolonije postaju crvenkasto-narančaste s ružičastim ili crvenim halo, dok su one koje ne fermentiraju plavkasto-sive.

Prijave

CLED agar koristi se isključivo za sijanje uzoraka urina. Upotreba ovog medija osobito je česta u europskim laboratorijima, dok se u Americi manje koristi.

Prikupljanje uzoraka mora zadovoljiti određene parametre za postizanje pouzdanih rezultata, uključujući:

• Ne uzimati antibiotike prije uzorkovanja.
• Poželjno je uzeti mokraću prvo ujutro, jer je koncentriraniji, kad nije moguće uzeti uzorak invazivnim metodama.
• Genitalije dobro operite prije uzimanja uzorka.
• Odbacite prvi tok mokrenja, a zatim stavite spremnik.
• Sakupite 25 do 30 ml urina u dobro označenoj sterilnoj posudi.
• Odvedite odmah u laboratoriju okruženu ledom.
• Mora se obraditi u roku od 2 sata od izdavanja ili hladiti na 4 ° C najviše 24 sata.

Sjeme uzoraka urina

Uzorak urina treba razrijediti 1:50.

Za razrjeđivanje stavite 0,5 ml bolesničkog urina i razrijedite sa 24,5 ml sterilne fiziološke otopine.

Izmjerite 0,1 ml razrijeđenog urina i površinskog namaza s drigalski lopaticom na CLED mediju. Ovo je najbolja metoda setve za brojanje kolonija. Iz tog razloga se koristi u uzorcima urina jer se rezultati moraju izraziti u CFU / ml.

Da biste odredili dobivene kolonije, postupite na sljedeći način: brojite kolonije na ploči i pomnožite sa 10, a zatim s 50. To vam daje količinu CFU / ml urina.

Tumačenje

Broj iznad 100 000 CFU / ml-ukazuje na mokraćnu infekciju

Broji ispod 1000 CFU / ml- Bez infekcije

Broji između 1000-10 000 CFU / ml - sumnjivo, moguće onečišćenje, ponovljeno uzorkovanje.

iskaznica

Kolonije koje su uzgajane na CLED agaru trebale bi imati Gram, a ovisno o morfotintorialnim karakteristikama mikroorganizma provodi se određena subkultura.

Na primjer, ako se radi o Gram negativnom bacilu, posijat će se na agar MacConkey, gdje se potvrđuje fermentacija ili ne laktoza. Uz to, pričvršćen je hranjivi agar za provođenje testa oksidaze.

U slučaju da Gram otkriva gram-pozitivne koke, može se subkultivirati na slanom manitolskom agaru i na hranjivom agaru. U potonjem se provodi ispitivanje katalaze. Konačno, ako se primijete kvasci, posijat će se na agar Sabouraud.

Mnogi laboratoriji izbjegavaju upotrebu CLED medija i radije upotrebljavaju agar krvi, MacConkey i hranjivi agar za uzorke sjemena urina.

priprema

U tikvici s jednom litrom destilirane vode otopi se 36,2 g CLED praha agar. Nakon 5 minuta stajanja, zagrijavajte ponovo suspendirani agar uz neprestano miješanje da kuha 1 minutu.

Zatim se sterilizirajte na 121 ° C 15 minuta u autoklavu. Na kraju vremena uklanja se iz autoklava i ostavi da se ohladi do temperature od 45 ° C. Nakon toga u svaku sterilnu Petrijevu posudu poslužuje se 15-20 ml.

Postupak posluživanja tanjura mora se izvesti unutar poklopca za laminarni protok ili ispred Bunsenove plamenika kako bi se izbjegla kontaminacija.

Posluženi tanjuri ostave se da stvrdnu, poredaju se u preokrenuti stalak i čuvaju u hladnjaku (2-8 ° C) do upotrebe.

Konačni pH pripremljenog medija trebao bi biti 7,3 ± 0,2.

Reference

1. Preporuke za mikrobiološku dijagnozu urinarne infekcije. dice. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Dostupno na: scielo.org.
2. Panchi J. Identifikacija mikrobnog agensa koji uzrokuje infekcije mokraćnih putova u pacijentima koji su pod kateterizacijom mokraćnog mjehura. 2016. Preddiplomski rad kako bi se kvalificirao za titulu prvostupnika kliničkog laboratorija. Tehničko sveučilište Ambato. Ekvador.
3. Britannia Laboratories. CLED medij. Dostupno na: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Uputa za uporabu, CLED Agar. 2013 Dostupno na: es.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories. Osnovni priručnik mikrobiologije. Dostupno na: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Opcija CLED agar u rutini kulture urina. Moguća i komparativna ocjena. Diagn Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinička mikrobiologija. Sveučilište u Kadizu, drugo izdanje. UCA Služba za publikacije.