Centrimid agara ili centrimid selektivni medij kulture krutina namijenjen za izolaciju Pseudomonas aeruginosa. Temelji se na prikazivanju proizvodnje karakterističnih pigmenata ove vrste, a načinjena je iz modifikacije Tech agar, koju su stvorili King, Ward i Raney.
Izvorna formula sadržavala je soli magnezijevog klorida, kalijevog sulfata, digestiju želatine i gušterače. Modifikacija formule sastojala se od dodatka cetrimida (cetil trimetil amonijev bromid) i glicerola.
Cetrimidni agar zasijan Pseudomonas aeruginosa Izvor: BiotechMichael, iz Wikimedia Commons
Cetrimidni agar koristan je za mikrobiološko ispitivanje uzoraka kod kojih se sumnja na prisustvo Pseudomonas aeruginosa. Treba napomenuti da je ova bakterija izuzetno važna, jer se, iako je dio normalne mikrobiote okoliša, često ponaša kao oportunistički patogen.
Iz tog razloga, jedan od najčešćih problema uzrokovanih ovom klicom su nosokomijske infekcije, odnosno one koje se javljaju u bolničkom okruženju, a napadaju pacijente koji imaju depresivni imunološki sustav.
S druge strane, zbog afiniteta koji taj mikroorganizam ima s vlagom, najosjetljivije mete zagađenja su: pomoćna oprema za disanje, lijekovi, nebulizatori, izvori vode, klima uređaji, dezinfekciona sredstva, sapunske otopine, otopine za ubrizgavanje, otvorene rane, kateteri, mokraćne cijevi, između ostalog.
U tom smislu, cetrimidni agar je koristan za provođenje mikrobioloških kontrola i kultura na prethodno spomenute elemente.
osnova
Cetrimidni agar zasnovan je na mogućnosti medija da potiče rast P. aeruginosa, stimulira proizvodnju njegovih pigmenata i zauzvrat inhibira rast drugih mikroorganizama.
Ova svojstva nastaju zbog funkcije svake njegove komponente. Prisutni želatinski pepton služi kao izvor dušika, vitamina i minerala. Glicerol ili glicerin djeluju kao izvor ugljika.
Sa svoje strane, cetrimid (cetil trimetil amonijev bromid) tvar je koja inhibira rast bakterija osim P. aeruginosa, uključujući i druge vrste iz istog roda.
Inhibicija nastaje zato što cetramid djeluje kao kationski deterdžent, uspijevajući destabilizirati plazma membranu većine bakterija, osim P. aeruginosa i nekih drugih koji uspijevaju preživjeti.
S druge strane, sadrži magnezijev klorid i kalijev sulfat. Ovi spojevi stimuliraju fenotipsku ekspresiju povezanu sa sposobnošću Pseudomonas aeruginosa da proizvodi različite pigmente, uključujući: piocijanin, pioverdin, pirrubin, pomelanin i fluorescein. Konačno, sadrži agar-agar koji mu daje čvrstu konzistenciju.
Tumačenje
Interpretacija rasta dobivenog u ovom agaru provodi se kako slijedi:
Promatranje okruglih, glatkih kolonija s pravilnim rubovima, uz proizvodnju plavo-zelenkastih, zelenih, smeđih ili crvenkastih pigmenata, plus emisija voćnog mirisa (aminoacetofenona), pretpostavljeni je rezultat prisutnosti ove bakterije u navedenom uzorku.
S druge strane, opažanje svijetlog zelenkasto-žutog pigmenta na kolonijama pokazatelj je P. aeruginosa kada je ploča izložena ultraljubičastoj svjetlosti.
Fluorescencija kolonija P. aeruginosa na cetrimidnom agaru pod ultraljubičastom svjetlošću.
Treba napomenuti da svaka opažena boja nastaje zbog proizvodnje određenog pigmenta. Plavo-zeleni pigment odgovara proizvodnji piocijanina, zeleni do pioverdina, crvenkasti do pioubin, smeđi do piomelanin, a svijetlo žuto-zelena fluorescencija pod UV svjetlom do fluoresceina.
priprema
Odmjeriti 43 g dehidriranog medija i otopiti u destiliranoj vodi. Dodajte 10 ml glicerola. Odvedite smjesu na izvor topline. Ostavite da kuha nekoliko minuta do potpunog otapanja.
Autoklavite na 121 ° C 15 minuta. Ostavite stajati i poslužite u sterilnim Petrijevim posudama kada je temperatura oko 50 ° C.
Ostavite da se stvrdne, preokrenite, narežite na ploče i pohranite u hladnjak do upotrebe. Ploče s cetrimidnim agarima treba unaprijed izvaditi iz hladnjaka za sadnju i ostaviti da dosegnu sobnu temperaturu.
Konačni pH medija trebao bi biti 7,2 ± 0,2.
Boja dehidriranog medija je bež, a pripravak je neprozirna bijela.
Prijave
Sve vrste uzoraka u kojima se sumnja na prisustvo Pseudomonas aeruginosa mogu se sijati na cetrimidni agar. Stoga je koristan u svim područjima mikrobiologije (okolišna, industrijska, klinička, vodena i hrana).
Od velike je važnosti analizirati bolničko okruženje i na taj način biti u mogućnosti primijeniti korektivne mjere, budući da ovaj mikroorganizam dolazi do pacijenata putem kontaminirane opreme, lijekova, otopina i potrepština koje pacijent koristi.
Na taj način mikroorganizam može zaraziti donji respiratorni trakt, mokraćni trakt i rane oboljelih od imunosupresije.
Broj kolonija P. aeruginosa može se provesti i mikrobnim graničnim testovima.
sije
Cetrimidni agar može se upotrijebiti kao primarna kultura. Ploča se inokulira na jednom njenom rubu i odatle se iscrpljenjem distribuira na ostatak ploče. Tekući uzorci mogu se površinski zasijati drigalskim lopaticom.
Ploče se inkubiraju aerobno na 37 ° C tokom 24 sata inkubacije.
Ograničenja
- Mali postotak sojeva Pseudomonas aeruginosas ne proizvodi pyocyanin, pa se lažni negativ može protumačiti.
-Neke vrste Pseudomonas kliničkog značaja su inhibirane u ovom mediju.
-Uprkos promatranju karakteristika opisanih za Pseudomonas aeruginosa, one moraju biti potkrijepljene dodatnim identifikacijskim testovima. Test koji se ne smije propustiti je test oksidaze, mora dati pozitivan rezultat.
-Neke enterobacteriaceae mogu rasti u ovom mediju i razviti žuti pigment, ali razlikuje se od Pseudomonas aeruginosa po tome što kada je ploča izložena ultraljubičastoj svjetlosti nema fluorescencije.
- Serratia marcescens uspijeva razviti i stvoriti ružičasti pigment.
-Ako ploče zasađene cetrimidnim agarom budu izložene neko vrijeme na sobnoj temperaturi, sojevi P. aeruginosa mogu izgubiti fluorescenciju koja se opaža pod ultraljubičastom svjetlošću, međutim svojstvo se obnavlja ako se ponovno inkubiraju na 37 ° C.
QA
Za analizu dobre izvedbe cetrimidnog agara mogu se upotrijebiti kontrolni sojevi, poput: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Očekivani rezultati su:
- Dobar rast za P. aeruginosa, s plavo-zelenim pigmentom i pozitivnim fluoresceinom.
- S. maltofilija i S. aureus djelomično će se potpuno inhibirati.
- Očekuje se da će Escherichia coli biti potpuno inhibirana.
Reference
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotipska i serološka karakterizacija kliničkih izolata Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1–9.
- Conda Pronadisa Laboratories. Baza cetrimidnog agara. 2014. Dostupno na: condalab.com
- Britannia Laboratories. Cetrimidni agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com
- BD Laboratoriji. BD Pseudosel agar (Cetrimid agar). 2013. Dostupno na: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laboratorij, CA agar Cetrimid. 2009. Dostupno na: