Agar Biggy je krutina medij selektivan i diferencijal kulture. Dizajniran je za izoliranje i pomoć u identifikaciji glavnih vrsta Candida. Ime BIGGY dolazi od akronima na engleskom Bismuth Glycose Glycine Kvasac.
Izvornu formulu stvorio je Nickerson, zbog čega je ovaj medij poznat i kao Nickerson agar. Trenutno se sastoji od ekstrakta kvasca, glicina, dekstroze, amonijevog citrata, bizmut-citrata, natrijevog sulfita i agara.
Grafički prikaz BIGGY agara. Izvor: Flickr.com
VELIKI agar pripravljen je za diferencijaciju vrsta Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei i C. kefyr, ali rastu i druge vrste poput Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum i Saccharomyces cerevisiae.
Ima dobru osjetljivost i specifičnost, međutim, u usporedbi s drugim medijima sa sličnom funkcijom, na drugom je mjestu, kada ga je nadmašio CHROMagar. Zbog toga mnogi laboratoriji preferiraju potonji, iako je on puno skuplji.
Treba biti jasno da uporaba BIGGY agara, kao i drugih sličnih sredstava, pomaže u brzoj pretpostavci, ali nikad potvrdnoj. Stoga moraju biti dostupne dodatne metode identifikacije; na primjer, Vitek 32 i API 20 sustavi identifikacije.
osnova
BiGGY agar smatra se djelomično selektivnim medijem za izolaciju kvasca, posebno roda Candida, iako mogu narastiti i drugi rodovi.
To je i diferencijalni medij jer će se, ovisno o uključenoj vrsti, primijetiti različite karakteristike u pogledu izgleda, boje, oblika i veličine. Smatra se kromogenim medijem, zbog razvoja različitih boja u kolonijama.
Boja kolonija kvasca nastaje zbog prisutnosti bizmut sulfita u agaru. Nickerson je shvatio da kvasci roda Candida izvode izvanćelijsku redukciju bizmut sulfita, pretvarajući ga u bizmut sulfid (netopljiva crna tvar). To rezultira od svijetlo smeđe do crne kolonije.
Ovaj agar sadrži ekstrakt kvasca i dekstrozu, koji pruža izvor osnovnih hranjivih sastojaka i energije za razvoj kvasca. Glicin je stimulans rasta kvasaca, dok inhibira rast određenih bakterija.
U tom istom smislu, amonijev i bizmut citrat, kao i natrijev sulfit djeluju kao inhibitori rasta bakterija. Agar je sredstvo koje daje srednje čvrstu konzistenciju.
priprema
Odmjerite 45 g dehidriranog medija kulture i otopite u litri destilirane vode. Protresite i zagrijte smjesu, kuhajući 1 minutu do potpunog otapanja. Ovaj kulturni medij nije autoklavljiv.
Nakon hlađenja na oko 45 ° C u vodenoj kupelji, izlijte 20 ml u sterilne Petrijeve posude.
Boja dehidriranog medija je žućkasto siva, a pripremljen je žućkasto-bijeli gel u kojem se može primijetiti lagano flokulirajući talog.
PH bi trebao biti 6,8 ± 0,2.
Pripremljeni medij čuvati u hladnjaku (4 ° C) i zaštititi od svjetlosti. Kako se radi o mediju koji se ne može autoklavirati, treba ga koristiti što je prije moguće. Njegova se upotreba preporučuje prije 3 dana nakon pripreme.
Koristiti
Ploče se inkubiraju na sobnoj temperaturi (25 ° C) 24, 48 i 72 sata, a vrijeme inkubacije može se produžiti do 5 dana.
Svaka vrsta Candida razvija određene karakteristike zbog kojih se razlikuju jedna od druge. Proizvođači medija opisuju sljedeće karakteristike za svaku vrstu:
-Candida albicans kompleks: razvija se na ovom agaru kao glatke, okrugle, smeđe ili crne kolonije, s laganom micelijskom obrubom. S izuzetkom što tamna boja ne difundira do sredine.
-Candida tropicalis: svijetle, male, tamno smeđe kolonije s crnim središtem i blagim micelarnim obrubom. Tamna boja se širi prema sredini, što je tipično za ovu vrstu, nakon što se inkubirala 72 sata.
-Candida krusei razvija velike, ravne, grube kolonije sa smeđom do crnkastom obrubom.
-Candida parakrusei: kolonije srednje veličine, većinom hrapave, ravne. Boja može varirati od svijetle tamno crvenkastosmeđe do svijetlo crvenkastosmeđe. Granica kolonija ima opsežan, žućkasti micelij.
-Candida stellatoidea: razvija srednje ravne kolonije, tamno smeđe, gotovo crne. Razvoj micelija je vrlo oskudan.
Ispitivanje koje su proveli Yücesoy i Marol 2003. godine pokazalo je da medij CHROMagar ima bolju osjetljivost i specifičnost za diferencijaciju i identifikaciju različitih vrsta Candida u odnosu na BIGGY agar.
QA
Za kontrolu sterilnosti, neinokulirane pločice inkubiraju se na 25 ° C, u mraku 24 do 48 sati, očekuje se da nema nikakvog rasta ili promjene boje.
ATCC sojevi preporučeni za kontrolu kvalitete medija su:
Candida albicans ATCC 60193 kompleks, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. U svima njima se očekuje rast kao što je gore opisano.
Sljedeći sojevi se također mogu koristiti:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 i Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. U prva dva se očekuje potpuna inhibicija, ali u slučaju djelomičnog rasta kolonije će biti krem boje.
U slučaju S. aureus očekuje se da ga potpuno inhibira, ali ako djelomično raste, njegove kolonije su bijele.
Ograničenja
Neke su bakterije sposobne rasti u ovom mediju i mogu čak postati tamne boje, simulirajući koloniju Candida, ali kada je kolonija razmazana i promatra pod mikroskopom, lako se odbacuje.
Tablica: Karakteristike kolonija nekih kvasca na BIGGY agaru prema radu Yücesoy M i Marol S.
Izvor: Yücesoy M, Marol S. Izvedba CHROMAGAR candida i BIGGY agara za identifikaciju vrsta kvasca. Ann Clin Microbiol Antimikrob. 2003; 2 (8): 1-7
Reference
- Yücesoy M, Marol S. Učinkovitost CHROMAGAR candida i BIGGY agara za identifikaciju vrsta kvasca. Ann Clin Microbiol Antimikrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Tehnički list BIGGY Agar. Dostupno na: mcdlab.net/
- Laboratorijski neogen. VELIKI Agar. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. VELIKI agar. Dostupno na: condalab.com
- BD Laboratoriji. BD BiGGY Agar (bizmut glikozni glukozni kvasni agar). 2011. Dostupno na: bd.com