BHI AGAR: OSNIVANJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

BHI agara ili mozak srce infuzijski agar medij je hranjiva krutina kulture. Na španjolskom to nazivamo agarom za infuziju srca u mozgu. To je neselektivni medij za kulturu, što znači da se mogu razviti sve vrste gram-pozitivnih i gram-negativnih bakterija, kao i neke kvasne i nitaste gljivice.

Sastoji se od infuzije mozga i srca teleta, peptičnog hidrolizata iz životinjskih tkiva, hidrolizata pankreasa kazeina, natrijevog klorida, glukoze, dinatrijevog fosfata i agara.

BHI ploče. Izvor: Fotografiju snimio autor MSc. Marielsa Gil.

Treba napomenuti da je BHI agar jedan od najčešće korištenih kultura u laboratorijima bakteriologije. Može se koristiti bez suplemenata kao primarna kultura, subkultura kolonija dobivenih na drugim selektivnim medijima ili za održavanje sojeva u laboratoriju.

S druge strane, idealan je medij koji se koristi kao baza u pripremi obogaćenih medija, poput krvnog agara i čokoladnog agara. Oba su idealna za izoliranje zahtjevnih mikroorganizama s prehrambenog gledišta. Međutim, treba napomenuti da, jer sadrži glukozu, nije prikladan za promatranje obrazaca hemolize.

Isto tako, BHI agar može se koristiti za pripremu posebnih medija za izolaciju teško rastućih patogenih mikroorganizama u uobičajenim medijima, među kojima su: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae i Histoplasma capsulatum.

Uz aditiv antibiotika, BHI agar postaje selektivni medij za izolaciju gljivica.

osnova

Hranjiv je kulturni medij za izoliranje umjereno zahtjevnih mikroorganizama, a njegovo obogaćivanje može se povećati dodatkom krvi i drugih dodataka prehrani.

To je neselektivni medij za kulturu, pa omogućava rast većine Gram pozitivnih i gram negativnih bakterija, kao i nekih gljiva. Međutim, može se učiniti selektivnim dodavanjem antibiotika.

Medij sadrži infuziju teleta mozga i srca, peptički hidrolat životinjskog tkiva i pankreasni hidrolat kazeina; Svi ovi spojevi djeluju kao izvori vitamina, aminokiselina, dušika i ugljika.

Glukoza je ugljikohidrat koji pruža energiju mikroorganizmima nakon što je fermentiraju. U međuvremenu, natrijev klorid i dinatrijev fosfat održavaju osmotsku ravnotežu i osiguravaju pH blizu neutralnosti. Konačno, agar daje srednje čvrstu konzistenciju.

priprema

Odvažite 52 grama dehidriranog medija i otopite u jednoj litri destilirane vode. Dovedite smjesu do izvora topline do vrenja, često miješajući tijekom postupka otapanja.

BHI agar ploče ili klinovi mogu se pripremiti bez dodataka.

klinovi

Za izradu klinova poslužite pripravak dok se polovina svake epruvete ne napuni, poklopite i sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 minuta, a kada odlazite, položite na bazu dok se ne stvrdnu. Kasnije čuvajte u hladnjaku do upotrebe.

BHI klinovi za bakterioteku. Izvor: Fotografiju snimio autor MSc. Marielsa Gil.

ploče

Otopljena smjesa se autoklavira na 121 ° C 15 minuta, ostavi se da se ohladi na 50 ° C i 20 ml medija se posluži u sterilnim Petrijevim posudama. Omogućeno im je očvršćivanje, preokrenuto je i čuvano u hladnjaku do upotrebe. Ostavite da ploče dođu na sobnu temperaturu prije sadnje.

PH sredstva mora ostati na 7,4 ± 0,2.

Sirovi medij je bež boje, a pripremljeni medij svijetlo je jantarne boje.

Priprema agar u krvi

Nakon sterilizacije medija, ohladite na temperaturu od otprilike 45 do 50 ° C, a zatim dodajte krv (50 ml), lagano promiješajte da se homogenizira i poslužite aseptično 20 ml u svakoj Petrijevoj posudi. Ako se na ploči formiraju mjehurići, lakši plamen treba brzo proći preko mjehurića kako bi se uklonili.

Isto tako, posebna podloga može se pripremiti dodavanjem odgovarajućih aditiva kada smjesa dosegne temperaturu od 45 do 50 ° C.

Sredina ostaje trešnja crvena.

Prijave

Koristite bez dodataka

BHI agar bez aditiva koristan je kao primarna kultura i za sjetvu čistih sojeva nisko ili srednje zahtjevnih mikroorganizama za njihovu naknadnu identifikaciju.

Budući da je svijetlo obojeni medij, idealan je za promatranje pigmenata i, budući da ne sadrži ometajuće tvari, na njemu se mogu provesti neka biokemijska ispitivanja, poput oksidaze i katalaze, ili se iz tih kolonija mogu postaviti druga biokemijska ispitivanja iz kolonija agar.

Isto tako, BHI agar klinovi se široko koriste za održavanje sojeva određeno vrijeme u laboratoriju (bakterioteca).

Ploče ili klinovi zasađeni površinom bakterijskim sojevima inkubiraju se na 37 ° C tokom 24 do 48 sati. U međuvremenu, u gljivicama temperatura i vrijeme inkubacije ovisit će o vrsti gljive koja se traži.

Kao bazni agar za pripremu drugih medija

Uz pomoć ove baze mogu se pripremiti obogaćeni i selektivni mediji.

Obogaćen

Njegova glavna funkcija je služiti kao osnova za pripremu krvnog agara za rutinsku upotrebu u mikrobiološkim laboratorijima. Posebno, baza BHI pogoduje izolaciji Streptococcus sp. Međutim, nedostatak je što nije prikladan za promatranje obrazaca hemolize jer sadrži glukozu.

Upotrebljava se i u pripremi zečjeg ili konjskog agarskog krvi za izolaciju Haemophilus sp. Za najbolje rezultate, može se dodati dodatak za obogaćivanje (IsoVitaleX).

Ako uzorci potječu iz respiratornog trakta, u agar se može dodati bacitracin koji inhibira prateću floru i povećava vjerojatnost oporavka Haemophilus sp.

Alternativno, može se pripremiti krvni agar (janjetina ili čovjek) s cistinskim teluritom za izoliranje Corynebacterium diphtheriae. Isto tako, korisno je pripremiti agar zečjeg krvi, uz dodatak cistina i glukoze za izolaciju Francisella tularensis.

Taloženje krvi agar ploče vrši se iscrpljenosti i inkubira na 35-37 ° C tijekom 24-48 sati (5-10% microaerophilicity CO ₂).

selektivan

Ovaj medij s dodatkom antibiotika može zamijeniti agar Sabouraud za izolaciju gljivica.

Kombinacija BHI agara s kloramfenikolom - gentamicinom ili penicilinom - streptomicinom i konjskom krvlju idealna je za izolaciju Histoplasma capsulatum.

Ovisno o mikroorganizmu koji se mora izolirati, preporučuje se inkubacija na 35-37 ° C ili na sobnoj temperaturi u aerobiozi. Ponekad je inkubacija potrebna u oba temperaturna područja, za to koriste 2 ploče.

Neke gljive poput Trichophyton mentagrophytes moraju se inkubirati na sobnoj temperaturi do 7 dana.

QA

Iz svake pripremljene šarže preporučuje se 24 sata inkubirati 1 ploču ili klin na 37 ° C i provjeriti da nema rasta; Posebno je važan pri pripremi agar u krvi, jer je lako kontaminiran medij.

S druge strane, kvaliteta medija može se procijeniti inokulacijom poznatih ili certificiranih standardnih sojeva i promatranjem njihovog razvoja.

U tom smislu, za procjenu BHI-agara bez aditiva mogu se koristiti sojevi Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 ili Candida albicans ATCC 10231. Inkubiraju se na 37 ° C u aerobiozi 24 do 48 sati. U svim se slučajevima očekuje zadovoljavajući rast.

Sojevi Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ili Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 mogu se sijati za procjenu krvnih agar ploča.

Bakterijski sojevi se inkubiraju na 37 ° C u mikroaerofilnosti 24 sata, dok se gljivica inkubira na sobnoj temperaturi u vlažnoj komori do 7 dana. U svim slučajevima očekuje se zadovoljavajući rast.

Reference

1. Britannia Laboratories. Infuzija mozga srca Agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com.
2. BD Laboratoriji. Infuzija mozga srca (BHI) Agar. 2013. Dostupno na: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Infuzija mozga srca Agar. 2009.
4. Neogeni laboratorij. Infuzija mozga srca Agar. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Krvni agar: osnova, upotreba i priprema. 2018. Dostupno na: lifeder.com.
6. Suradnici na Wikipediji. Infuzija mozga srca. Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 19. rujna 2018., 03:58 UTC. Dostupno na: wikipedia.org. Pristupljeno 2. ožujka 2019. godine.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.