ORCEIN: TEMELJ I PRIPREMA - KEMIJA - 2026

Orceína je prirodni obojena ljubičasto, ekstrahira iz različitih lišaja kao orchilla ili archill, fruticose lišaj Rocella tinctoria i Lecanora parella uglavnom. Rocella tinctoria nalazi se na afričkom i američkom kontinentu, iako ga mogu zamijeniti druge vrste koje se nalaze u Europi.

Ova mrlja široko se koristi u citogenetskim studijama od davnina. U tom smislu, orceinski pripravak koji uključuje octenu kiselinu uveo je LaCourt 1941. godine, zbog čega se u početku zvao LaCourt tehnika.

Kemijska struktura orceina i otopine orceina. Izvor: Wikipedia.org/ Oguenther na de.wikipedia (Dr. Guenther)

Isto tako, zbog svoje jednostavnosti i niske cijene, koristio se za proizvodnju lakmusa (mrlja izvađena iz lišajeva) i u histološkim studijama (bojenje stanica i tkiva).

Nekoliko studija koristilo je to bojenje u kombinaciji s drugim kemikalijama, kao što je amonijak pikarkarminat i octena kiselina, za bojenje elastičnih vlakana i kromosoma. Trenutno se orcein i dalje koristi u citogenetskim istraživanjima na životinjama i biljkama.

Nedavno su Silva i sur. 2017. uspješno je koristila ovu mrlju za promatranje različitih promjena koje se događaju u elastičnim vlaknima kože palca kod čileanskih starijih odraslih osoba. Ova studija otkrila je kako se vlakna palca mijenjaju sa starenjem.

U tom smislu, opaženo je da su elastična vlakna smeđe-crne boje kod osoba starijih od 80 godina; dok se kod najmlađih (od 60 godina) vide crvenkasto-smeđe boje. Citoplazma i ostale stanične strukture postaju žutosmeđe boje.

To je omogućilo potvrdu prisutnosti i stanju elastičnih vlakana, s obzirom na njihov položaj, količinu i cjelovitost. S druge strane, također je pokazano da orcein može biti od velike pomoći u identificiranju aneurizmi i dijagnosticiranju arteritisa, između ostalih stanja.

osnova

Orcein je dio oksazinske skupine boja, a bojenje se temelji na njegovom afinitetu prema DNK. Boja se veže na negativni naboj ove molekule, koji je predstavljen fosfatnom skupinom. Zbog toga su kromosomi obojeni ljubičasto.

Međutim, ostatak ćelijskih struktura poprima drugačiju boju. Točnije, u slučaju elastičnih vlakana, obojena su crvenkasto smeđim, stanične jezgre od plave do tamno ljubičaste boje, dok se kolagen ne mrlja.

Iz tog razloga, orcein se koristi za bojenje kromatina i razlikovanje spola u nekim vrstama muha. Isto tako, mogu se obojati jezgre i neke jetrene inkluzije koje proizvode antigeni hepatitisa B.

Orceinova rješenja imaju specifične funkcije u bojenju. Orcein A ima funkciju omekšavanja membrane stanica, izazivajući njihovu smrt i paralizirajući proces njihove podjele. U međuvremenu je orcein B odgovoran za dovršavanje bojenja adhezijom na kromosome.

priprema

Aceto-orceinska otopina 1%

Za pripremu 1% -tne otopine aceto-orceina, 2 grama orceina otopi se u 45 ml ledene octene kiseline, po mogućnosti vruće, a na sobnu temperaturu se doda 55 ml destilirane vode.

Potom se neprestano miješa kako bi se otopina homogenizirala, da bi se kasnije ostavila dok se ne ohladi. Konačno se čuva na 4 ° C u tamnim staklenkama. Flores 2012, ovaj je preparat upotrijebio za promatranje faza sazrijevanja kravljih oocita.

U ovom slučaju, na primjer, otopina aceto-orceina se stavi na tkivo prethodno učvršćeno u octenoj kiselini-etanolu tijekom 24 sata. Taj se postupak bojenja provodi 30 minuta, a tkivo se naknadno promijeni.

Isto tako, može se koristiti za identifikaciju organela u višećelijskim tkivima. U tom se slučaju mrlja bučne sluznice oboji kapljicom otopine aceto-orceina, pokrivač se stavi na tobogan i može se odmah uočiti jezgra stanice s njenim podstrukturama.

Laktoproponska otopina orcein 1%

Pored toga, orcein se može pripremiti s drugim kemikalijama kao što su mliječna kiselina i propionska kiselina. Da biste to učinili, jedan gram orceina se otopi u prethodno miješanoj otopini, na sobnoj temperaturi od 23 ml mliječne kiseline i 23 ml propionske kiseline; dopunjavanjem volumena destiliranom vodom do 100 ml.

Pomoću ove laktopropionske orceinske otopine moguće je promatrati različite faze mejotske podjele biljnih stanica. U tom se slučaju unaprijed fiksirani i hidrolizirani uzorak stavlja 15 minuta u laktopropionsku orceinsku otopinu, a zatim se tkivo širi na dijapozitive mikroskopa.

U studiji Duque 2016 o poligenim kromosomima koristio je pripravak od 2 grama orceina razrijeđenog u octenoj kiselini i 85% mliječne kiseline, razrijedivši 65% -tnom otopinom octene kiseline. Napokon je pogledao kromosome u pljuvačnim žlijezdama drosophila melanogaster.

Orcein A i Orcein B

Važno je napomenuti da se, ovisno o uzorku i što se procjenjuje, priprema odgovarajuća orceinska otopina. Tako se, na primjer, u otopinu orceina A dodaje 1N klorovodična kiselina radi promatranja dijeljenih stanica.

Dok se otopina orceina B otopi u 45% octenoj kiselini. Ova je tehnika skraćena metoda bojenja i općenito se koristi kao dodatak bojenju kromosomskih struktura.

Završne misli

Od stoljeća prije, lišajevi poput Lecanora, Parmelia i Umbilicaria mogu se naći u zemljama američkog kontinenta poput Argentine, koje su sjajni izvori orkeina. Europska područja poput Kanarskih otoka bila su u to vrijeme veliki proizvođači orhideje.

Izvozilo se u druge gradove istog kontinenta poput Genove i zemalja poput Engleske, dok je Holandija monopolizirala proizvodnju lakmusa iz orhideje. Stoga se ovaj lišajevi kasnije smanjio sve dok nije trebao izumrijeti.

To je dovelo do toga da su orhilu zamijenjene drugim biljkama koje imaju svojstva boje. Međutim, pojava sintetičkih boja doprinijela je prekidu trgovine ovim lišajevima iz orkeinskog izvora.

To je bilo moguće zahvaljujući Cocqu koji je 1812. godine opisao sintezu orceina, znajući tada da ga sintetizira fenolni spoj zvan orcinol. Međutim, unatoč tome, prirodni orcein i danas je preferirani.

To može biti zbog toga što je orcinol vrlo jak miris, a njegova produljena izloženost mogla bi nositi rizike po zdravlje, poput gubitka sposobnosti otkrivanja mirisa. Ova oštećenja hipofize mogu prelaziti iz privremene u trajnu što je veća izloženost.

Reference

1. Ortega L, García R, Morales C. «Primjena laka koji se stvara u gljivama za razgradnju mikrobioloških boja (orkeina i kristalne ljubičice).» Mladi u znanosti 2. 2015; 633-637. Dostupno na: jovenesenlaciencia.ugto.mx.
2. Barcat J. Orceína i elastična vlakna. Medicina (Buenos Aires) 2003.; 63: 453-456. Dostupno na: Medicinabuenosaires.com.
3. Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. Histološke karakteristike leteće kože lica palca kod čileanskih pojedinaca sa blijeđenjem daktilograma. J. Morphol. 2017; 35 (3): 1107-1113. Dostupno na: scielo.conicyt.
4. Orrillo M, Merideth B. "Reproduktivna biologija i citogenetika krumpira." International Potato Center (CIP). Tehnički priručnik. Dostupno na: research.cip.cgiar.org/
5. Flores F. «Zbirka, kultura i in vitro sazrijevanje kravljih oocita (bos taurus) u bolivijskom gorju.", Nacionalno sveučilište Altiplano, Puno-Peru; 2012. Dostupno na: repositorio.unap.edu.pe.
6. Duque C. Politenski kromosomi: pogled na fenomen endoreduplikacije. Nacionalno sveučilište Kolumbije, Medellín; 2016. Dostupno na: edu.
7. Camarena F. Stanična i molekularna biologija. Priručnik za vježbanje. Autonomno sveučilište Baja California. 2017. Dostupno na: pez.ens.uabc.mx.
8. FAO / IAEA. 2018. Priručnik za razlikovanje divljih i uzgajanih muha Anastrepha ludens (Loew) iz normalnog soja („bi-seksualni“) i genetski spolovilnog soja (Tapachula-7), ozračen i bez ozračenja. Guillen Aguilar JC, López Muñoz L, López Villalobos EF i Soto García DN Organizacija Ujedinjenih naroda za hranu i poljoprivredu. Rim, Italija, 95 str.
9. Orcein. (2018., 30. studenog). Wikipedia, Slobodna enciklopedija. Datum savjetovanja: 03:38, 31. srpnja 2019. es.wikipedia.org.
10. Merck Millipore. (2018., 16. srpnja). Orceinova mikroskopija za Certistain mikroskopiju. Dostupno na: merckmillipore.com