XLD AGAR: OBRAZLOŽENJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2025

XLD agara ili ksiloza lizin desoksikolat agar mediju je selektivno i diferencijal krutina kulture za izolaciju enteropathogens. Taylor je dizajnirala formulu XL agar (Xylose, Lysine) kako bi poboljšala izolaciju roda Shigella.

Primijetio je da je ovaj rod inhibiran u većini medija namijenjenih izolaciji enteropatogena. Potom su dodani natrijev deoksilat, natrijev tiosulfat i željezni amonijev citrat da bi se povećala njegova selektivnost. Dokazala se da je ova formula korisna i za izolaciju šigele i salmonele.

Razlike kolonija Shigella, Salmonella i coliforms na XLD agaru. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Izvori: A. Napisala: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, doktor znanosti; Audra Marsh, ljubaznošću: Biblioteka slika javnog zdravlja B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Napisao: CDC / Dr. JJ farmer, ljubaznošću: Biblioteka slika javnog zdravlja

XLD agar sastoji se od ekstrakta kvasca, natrijevog deoksiholata, ksiloze, lizina, laktoze, saharoze, natrijevog tiosulfata, željeznog amonijevog citrata, natrijevog klorida, fenola crvenog i agara. U većini bakterioloških laboratorija duo XLD agar i SS agar koriste se za ispitivanje uzoraka fekalija na Shigella i Salmonella.

Ostali laboratoriji preferiraju kombinaciju CHROMagar Salmonella i XLD agara, između ostalih dostupnih opcija. Ovi dvojac mogu se pripremiti u dvostrukim Petrijevim posudama. S jedne strane postavljaju XLD agar, a na suprotnoj strani drugi odabrani medij.

osnova

-Nutritivna snaga

XLD agar ima ekstrakt kvasca koji služi kao izvor hranjivih tvari za mikroorganizme koji rastu na ovom agaru. Uz to, prisutnost ugljikohidrata (ksiloza, saharoza i laktoza) osigurava energiju bakterijama koje ih mogu fermentirati.

-Selektivnost medija

Kao supstanca koja inhibira, predstavlja natrijev deoksiholat; Ovo sprječava rast Gram pozitivnih bakterija, dajući mediju selektivni karakter.

-Diferencijalna snaga

Tipične kolonije Shigella

Kao što je već spomenuto, XLD agar sadrži ksilozu; Ovaj ugljikohidrat fermentira sve bakterije koje rastu u ovom mediju s izuzetkom roda Shigella.

Ovo je jedna od karakteristika koja joj daje svoj različit karakter, budući da se kolonije Shigella od ostalih razlikuju razvijanjem crvenih kolonija, dok ostale bakterije stvaraju žute kolonije.

Tipične kolonije salmonele

Rod Salmonella također fermentira ksilozu, u početku stvarajući žute kolonije. Međutim, nakon što iscrpi ksilozu ugljikohidrata, napada lizin zbog svog enzima lizin dekarboksilaza. Dekarboksilacija lizina stvara lužine koje boju kolonije i okolnog medija pretvaraju u izvorno crvenu.

Ovo ponašanje provodi samo Salmonella, jer koliformi koji dekarboksilatni lizin ne mogu alkalizirati medij. To je zato što koliformi također fermentiraju prisutnu laktozu i saharozu; prema tome, proizvodnja kiselina je vrlo visoka, što ostavlja žuta kolonija u tim bakterijama.

Treba napomenuti da rod Salmonella ne fermentira saharozu ili laktozu.

Proizvodnja H

XLD agar omogućava detekciju H ₂ S- proizvodnju Salmonella vrste; U tu svrhu se oslanja na izvor sumpora kojeg predstavlja natrijev tiosulfat i razvijač reakcije, a to je željezni amonijev citrat.

Potonji reagira s H ₂ S (plin) u obliku bezbojnog i oblici vidljivo netopljivi crni talog željeznog sulfata. U tom smislu karakteristike kolonije salmonele bit će crvene s crnim središtem.

Treba primijetiti da je za H ₂ S reakcija formiranja pojaviti, alkalni pH je potrebno. To je razlog zašto druge enterobakterije koje od H ₂ S ne može ili ne tako loše u ovom okruženju, jer visoki kiselosti vrenjem ugljikohidrata prisutni usporava ili ometa reakciju.

-Natrijum-klorid, agar i fenol crveni

Konačno, natrijev klorid održava osmotsku ravnotežu; agar je sredstvo za učvršćivanje i fenol crveno otkriva promjene pH, okrećući boju kolonija i medija.

priprema

Odmjerite 55 g dehidriranog XLD medija i otopite u 1 litri vode. Zagrijte i miješajte smjesu dok ne dosegne točku ključanja. Ne pregrijavajte se jer toplina oštećuje medij i stvara talog koji mijenja morfologiju tipičnih kolonija.

Taj se medij ne smije autoklavirati. Pri otapanju mora se prenijeti u vodenu kupelj na 50 ° C. Kad se hladi, treba je služiti izravno na sterilnim Petrijevim posudama. Mogu se sipati u pojedinačne ploče ili dvostruke ploče. Ostavljeni su da se stvrdne i čuvaju se u hladnjaku do upotrebe.

Temper prije upotrebe. Kako se radi o nesterilnom mediju, preporučuje se pripremiti ga blizu datuma uporabe.

Konačni pH medija trebao bi biti 7,4 ± 0,2. Boja pripremljenog medija je narančasto-crvena, prozirna, bez taloga.

Ako imate bazni agar Xylose Lysine (XL), možete dodati natrijev deoksilat, natrijev tiosulfat i željezni amonijev citrat. Na taj se način dobiva XLD agar formula.

Prijave

XLD agar koristi se za oporavak enteropatogena, uglavnom iz roda Shigella i sekundarno iz roda Salmonella. Korisno je za procjenu uzoraka stolice, vode i hrane.

Vrste uzoraka

Izmet

Uzorci stolice mogu se sijati izravno na XLD agar, čineći tako dobru raspodjelu materijala da se dobiju izolirane kolonije.

Da bi se poboljšao oporavak od salmonele, XLD agar se može očistiti iz medija za obogaćivanje salmonele.

Hrana

U slučaju hrane mogu se koristiti juhe za obogaćivanje salmonelom i šigelom. Za salmonelu, između ostalog, možete koristiti selenitni cistinski bujon, svijetlo zeleni tetrationati juhu.

U slučaju Shigelle, može se obogatiti bujonom Shigella s 0,5 u / ml novobiocina, inkubirati 16-20 sati na 42 ° ± 1 ° C.

Voda

U analizi vode preporučuju se, između ostalog, tehnika filtracije membrane i uporaba XLD-agara.

Uvjeti sadnje i identifikacija

Zasijani medij se inkubira aerobno na 35 ° C tijekom 24 do 48 sati.

Promatraju se tipične kolonije svakog roda, sumnjive kolonije trebaju proći biokemijske testove za njihovu identifikaciju.

QA

Za ocjenu kontrole kvalitete medija mogu se upotrijebiti sljedeći bakterijski sojevi: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis 4, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Za rod Salmonella karakteristično je predstavljanje crvenih kolonija s crnim središtem ili potpuno crnim kolonijama na ovom mediju. Dok u rodu Shigella kolonije moraju biti crvene, to jest boje medija.

U slučaju Escherichia coli očekuje se da ga potpuno ili djelomično inhibira; ako raste kolonije su žute. Za Proteus mirabilis očekuje se slab rast s ružičastim kolonijama sa ili bez crnog središta. Na kraju će rod Klebsiella rasti kao žute kolonije.

Završne misli

XLD agar se široko koristi u bakteriološkim laboratorijima zbog njegove visoke učinkovitosti za oporavak Shigella i također ima dobar oporavak roda Salmonella.

Rall i suradnici (2005) u svom radu pod nazivom "Evaluacija triju brodova za obogaćivanje i pet čvrstih medija za otkrivanje salmonele u peradi" pokazali su da su testirana 3 klasična medija (svijetlo zeleni agar, SS agar i XLD agar), XLD agar imao je najbolju stopu oporavka.

Postoci oporavka su sljedeći: 13,8% za svijetlo zeleni agar, 27,6% za SS i 34,5% za XLD. Rambach agar sa 48% oporavka i CHROMagar sa 79,3% nadmašili su samo kromogeni medij.

Reference

1. Bolesti koja se prenose hranom. Shigellosa. Dostupno na: anmat.gov.ar
2. "XLD agar." Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 9 veljače 2019., 11:46 UTC. 10 tra 2019, 19:25 wikipedia.org
3. BBL Laboratoriji. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate). 2013. Dostupno na: bd.com
4. Laboratorij. XLD agar. Dostupno na: foodsafety.neogen
5. Francisco Soria Melguizo Laboratorij. XLD Agar. Dostupno na:
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Procjena tri podloge za obogaćivanje i pet podloga za otkrivanje salmonele u peradi. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Dostupno od: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.