AGAR KRUMPIRA DEKSTROZE: RACIONALNOST, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2025

Krumpir dekstroza agara je medij krutina ne - selektivni hranjiva kulture. U njemu mogu rasti bakterijske i gljivične vrste, ali njegova upotreba posebno je indicirana za izolaciju vlaknastih gljivica i kvasca. Poznat je i kao PDA medij za engleski izraz Potato Dextrose Agar.

Posebno je korisno za izoliranje fitopatogenih gljivica, odnosno onih koje utječu na biljke. Za sijanje uzoraka iz zaraženih povrća mogu se koristiti druga sredstva poput Sabouraud agar ili malta-agar, međutim, za rutinsku upotrebu, agar krumpira dekstroze poželjan je zbog dobivanja veće sporporacije.

Aspergillus niger i Sinemas na agaru krumpira dekstroze. Izvor: Alextrevelian 006 na engleskoj Wikipediji / Joselrojas

Također se koristi za brojanje gljivičnih kolonija u uzorcima kozmetike, farmaceutskih proizvoda i neke mliječne hrane. Isto tako, pogodno je za sjetvu uzoraka otpadaka kože u potrazi za dermatofitima, koji u ovom mediju vrlo dobro rastu, razvijajući svoje karakteristične pigmente.

Sredstvo krumpira dekstroze vrlo je jednostavno i lako sredstvo za pripremu u laboratoriju. Sadrži, kao što mu ime govori, infuziju krumpira, dekstrozu i agar-agar. Uz to, mogu se dodati inhibitorne tvari za sprečavanje rasta bakterija i povećavanja selektivnosti za gljivične vrste.

osnova

Kamera dekstroza agar je medij kulture koji osigurava prehrambene elemente potrebne za razvoj nitastih gljivica i kvasca.

Kombinacija infuzije krumpira i glukoze pruža savršen izvor energije za zadovoljavajući rast gljiva. Dok je agar onaj koji daje konzistenciju mediju.

Sam medij ne inhibira rast bakterija, stoga je neselektivni medij. Da bi bio selektivan, treba mu dodavanje inhibicijskih tvari poput vinske kiseline ili antibiotika.

priprema

-Domaća (nekomercijalna) priprema agar krumpira dekstroze

Petrijeve posude

Priprema se na sljedeći način:

Na prvom mjestu krumpir se dobro opere, uklanjajući tlo koje posjeduje. Izrežu se na tanke kriške sa svime i ljuskom. 200 grama krumpira izvaga se i kuha u litri destilirane vode pola sata.

Na kraju vremena filtrirajte ili procijedite sav pripravak kroz gazu.

Dobivena tekućina se dovršava destiliranom vodom do litre. Infuziji se doda 20 g agar-agara i 20 g dekstroze, dobro se pomiješa i autoklavira na 121 ° C, pod pritiskom od 15 kilograma tokom 15 minuta.

Ostavite da se ohladi na 50 ° C i poslužite u sterilnim Petrijevim posudama. Pripremljeni tanjuri čuvaju se u hladnjaku.

klinovi

Također se mogu pripremiti klinovi agruma od krompira dekstroze.

U tom slučaju, prije sterilizacije u autoklavu, 12 do 15 ml medija se stavi u epruvete, kasnije se autoklavira, a nakon izlaska leže na posebnim nosačima dok se ne stvrdne. Čuvati u hladnjaku.

Medij ostaje na pH od 5,6 ± 0,2, međutim, neki laboratoriji dodaju 10% vinske kiseline kako bi snizili pH na 3,1 ± 0,1 kako bi inhibirali rast bakterija.

U tom istom smislu, drugi laboratoriji radije dodaju antibiotike kako bi ga učinili selektivnim za uzgoj gljivica i spriječili rast bakterija.

-Komercijalna priprema agenta dekstroze krumpira

Odmjeriti 39 g komercijalno dostupnog dehidriranog medija i otopiti u jednoj litri destilirane vode. Ostavite da odmara 5 minuta.

Smjesa se zagrijava uz često miješanje dok se potpuno ne otopi. Nakon toga, sterilizira se u autoklavu na 121 ° C 15 minuta.

Mogu se pripremiti ploče ili klinovi. Postupak kao što je gore opisano.

PH ostaje na 5,6 ± 0,2. Ako se želi pH od 3,1, prije posluživanja u tanjure treba dodati 14 ml sterilne 20% vinske kiseline.

Sirovi medij je bež, a pripremljeni medij svijetlo je jantarne boje, blago mutnog ili opalescentnog izgleda.

Prijave

Postupak sjetve biljnih uzoraka na agar krumpira dekstroze

-Za mrlje lišća

Listovi su izrezani na komade.

U čašu od 50 ccm sa 50% alkohola stavite komade lišća (obojene i zdrave komade) kako biste površinu dezinficirali 20 do 30 sekundi. Bacite alkohol i dodajte 20% natrijevog hipoklorit za 40 do 50 sekundi ako su tanki listovi i povećajte vrijeme na 80 sekundi ako je kora i trupci.

Odbacite natrijev hipoklorit i uzmite dezinficirane komade sterilnim pincetama i stavite ih na površinu medija (najviše 10 komada). Postavite datum i inkubirajte na 20-30 ° C.

-Za voće i gomolje

Ako je plod mesnat, otvorite plod zahvaćen gljivicom i izvadite komade sterilnim skalpelom s obolelih i zdravih dijelova i stavite ih na površinu agara.

Ako je voće agrumi, poput limuna ili naranče, treba ga otvoriti i posijati sjeme.

Kada je zahvaćena površina ploda i opažene spore, idealno je korištenje metode rešetka na ploči; To se sastoji od dodirivanja spora sterilisanom i ohlađenom lopaticom u obliku slova „L“, a zatim se izrađuje cik-cak 2 do 3 puta na agaru.

-Za žitarice

Dezinficiraju se kako je opisano u lišću i kasnije se stavljaju na agar.

-Za grane i stabljike

Kora se ostruže, a kasnije se komadići zdravog i bolesnog dijela izvade i posijaju izravno na agar.

Zasijane ploče se 72 sata inkubiraju aerobno na 20-30 ° C.

Postupak za sjetvu uzoraka kože, kose ili noktiju na agaru krumpira dekstroze

Uzorak treba uzeti uzorkom noža za skalpel broj 11, bilo za rezanje zahvaćene kose, ljuske kože ili noktiju u potrazi za dermatofitima. Prije uzimanja uzorka područje treba dezinficirati 70% alkoholom.

-Uzorak kože

U ljuskavim lezijama treba obrisati rub lezije, jer je gljiva tamo vjerojatnija.

Kod eksudativnih lezija uzorak se uzima suhim ili mokrim brisom. Sijte odmah na agar krumpira dekstroze ili na agar Sabouraud. Izbjegavajte prijevozna sredstva.

Druga metoda uzorkovanja je kroz tehniku ​​kvadratnih tepiha Mariat i Adan Campos. U tom se slučaju zahvaćeno područje trlja 5 puta komadom sterilne vune za naknadno uzgoj.

Uzorak se može smjestiti izravno u medij za kulturu.

-Uzorak dlake

Ovisno o patologiji, zahvaćeni dio može se odrezati ili ukinuti. Stavite uzorak u medij za kulturu.

-Uzorak nokta

Specifični dio zahvaćenog nokta može se strugati ili rezati. Ovisit će o vrsti ozljede.

Izrežite uzorak na komade od 1 mm prije sjetve kako biste povećali vjerojatnost dodira gljive s medom za uzgoj.

Postupak identifikacije

Kolonije dobivene na ploči izolirane su u epruvetama koje sadrže agar krumpira dekstroze za provođenje makroskopskog ispitivanja kolonija (izgled, boja, konzistencija, stupanj razvoja).

Mikroskopska studija (promatranje struktura i njihovih formacija) može se provesti mikrokulturama ili izravno promatranje pod mikroskopom između klizača i klizača.

Broj kolonija

Ovaj medij se također može koristiti za određivanje gljivicnog i kvasnog opterećenja prisutnog u uzorcima biljaka, hrane, kozmetike ili lijekova. U tu svrhu koristi se agar dekstroze krumpira sa dodatkom antibiotika, kao što su: (kloramfenikol, klorotetraciklin ili oba).

Ulijte 1 ml uzorka, poželjno razrijeđenog - u sterilnu i praznu Petrijevu posudu, zatim otopite čep agarja dekstroze krumpira i ostavite da se ohladi na 45 ° C. Izlijte na Petrijevu posudu i rotirajte dok se homogenizira. Ostavite da odmara dok se ne stvrdne.

Inkubirajte aerobno na 20-25 ° C (plijesni) ili 30-32 ° C (kvasci) 5 do 7 dana ili više, ovisno o vrsti gljive i vrsti uzorka. Dvije ploče mogu se koristiti za inkubaciju u oba temperaturna područja.

Broj gljivičnih kolonija u uzorku hrane. Agar krumpira dekstroze upotpunjen antibioticima. Izvor: Pxhere.com foto / 777267

Održavanje sojeva gljivica

Agar krumpira može se koristiti za održavanje održivih sojeva gljiva nekoliko godina.

Za to se gljivica uzgaja na klinovima agarja dekstroze krumpira i nakon što gljiva naraste, prekriva se mineralnim uljem. Ulje treba sterilizirati u autoklavu 45 minuta i imati viskoznost od oko 300 do 330 Saybolt. Ulje treba biti 1 do 2 cm iznad vrha naklona.

QA

Iz svake pripremljene šarže uzmite 1 ili 2 ploče i inkubirajte ih na 25 ° C 48 sati ili na 20 ° C 96 sati. Dobra kontrola sterilnosti je ona u kojoj se ne opaža razvoj kolonija.

Poznati ili certificirani kontrolni sojevi se također mogu koristiti kao što su:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Dobar rast očekuje se u svim slučajevima.

Reference

1. Britannia Laboratories. Krumpir s glukoznim agarima. 2015. Dostupno na: britanialab.com
2. Neogeni laboratoriji. Agar krumpira dekstroze Dostupno na: foodsafety.neogen.com
3. Insumolab Laboratorij. Agar krumpira dekstroze Dostupno na: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
5. Casas-Rincón G. Opća mikologija. 1994. Drugo izdanje Središnjeg sveučilišta u Venezueli, izdanja biblioteka. Venezuela Caracas.
6. Aceituno M. Procjena mikrobiološke kvalitete sjenila, kompaktnog tipa praška nacionalnog proizvodnog laboratorija prema referentnoj metodi Pharmacopea Usp 2005. Teza se kvalificirati za naziv farmaceutski kemičar. Sveučilište San Carlos u Gvatemali.
7. Cuétara M. Obrada površinskih uzoraka. Iberoamerican časopis za mikologiju. 2007; str. 1-12