BENGALSKA RUŽA: OBRAZLOŽENJE, POSTUPAK, KONTROLA KVALITETE - LIJEK - 2025

Rose Bengal je laboratorijski test koji se temelji na reakciji antigen-antitijelo za dijagnozu bruceloze. Tehnika omogućava otkrivanje specifičnih antitijela protiv bakterije Brucella abortus u uzorcima ljudskog seruma. Rezultat se može izvijestiti kvalitativno ili polukvantitativno.

Kvalitativni oblik izražava je li pacijent pozitivan ili negativan na test, odnosno postoji li antitijelo ili ne. U međuvremenu, polu-kvantitativno izvješće navodi se u IU / ml i ukazuje na približnu količinu prisutnih antitijela. Treba napomenuti da će se antitijela proizvesti samo ako je pacijent bio u kontaktu s mikroorganizmom.

Rose Bengal reakcija u ploči s aglutinacijom. Izvor: preuzeto iz videa

Zbog svoje velike jednostavnosti, visoke osjetljivosti i specifičnosti, jedna je od seroaglutinacijskih tehnika koja se u medicini najviše koristi kao početni test za dijagnozu ove bolesti.

Neki istraživači uspoređivali su djelotvornost Rose Bengal testa s drugim tehnikama, poput seroaglutinacije (febrilnih antigena) i primijetili da, iako postoji dobra povezanost, vidjeli su izolirane slučajeve u kojima je test febrilnih antigena bio negativan i Rose de Pozitivni bljesak.

Dobivena razlika nastala je iz činjenice da su ovi pacijenti imali potklasu IgG antitijela protiv Brucella abortus bolje sposobnosti vezanja pri kiselom pH, pa su mogli reagirati s reagensom Rose Bengal, ali ne s febrilnim antigenima.

U tom smislu, oni su predložili da se reagensi tehnike febrilnog antigena modificiraju na kiseli pH, tako da mogu detektirati ovu vrstu slučaja.

osnova

Rose Bengal reagens sastoji se od antigene suspenzije. Sastoji se od soja S99 Brucella abortus, razrijeđenog u kiselom laktatnom puferu (pH 3,6), plus fenola i Rose Bengal boje.

Prema tome, u uzorku koji se traži su antitijela protiv Brucella, ako su prisutna, oni će reagirati s antigenom reagensa i primijetit će se makroskopski vidljiva reakcija aglutinacije. Test otkriva ili IgM antitijela ili IgG antitijela.

To znači da može otkriti bolest i u svom akutnom stadiju u kojem prevladavaju IgM antitijela ili u kroničnom stadiju u kojem prevladavaju IgG antitijela.

To predstavlja prednost jer povećava osjetljivost testa, ali je u isto vrijeme i njegov nedostatak, jer ne razlikuje jednu fazu i drugu, jer su reakcije s IgM i IgG protutijelima identične.

Ispitivanje se mora uvijek izvoditi zajedno s negativnom kontrolom i pozitivnom kontrolom. Negativna kontrola sadrži životinjski serum bez antitijela, a pozitivna kontrola sadrži serum životinjskog podrijetla sa 50 IU / ml anti-Brucella protutijela.

Koristiti

Bruceloza je ozbiljna bolest koja ima tendenciju da bude kronična i opasna, pa je vrlo važno da se dijagnosticira rano. To je zoonoza i ljudi se mogu zaraziti izravnim kontaktom s kontaminiranim materijalom, a najugroženije su veterinari i skrbnici životinja.

Do infekcije može doći i jedenjem zaraženog sirovog mesa, među ostalim oblicima zaraze.

Ova bolest napada lokalno ili sistemski. Sistemski oblik je najozbiljniji, jer mogu biti pogođeni različiti organi, uključujući retikulumski endotelni sustav (jetra, slezina, koštana srž), koža (celulitis i limfadenopatija), respiratorni sustav (upala pluća), mišićno-koštani sustav (artritis, sakroiliitis i spondilitis), između ostalih.

Rose Bengal test vrlo je korisna tehnika za obavljanje početnog probira, jer je vrlo jeftin, jednostavan za upotrebu i ima veliku specifičnost i osjetljivost.

Slučajevi lažnih negativa i lažnih pozitivnih reakcija su vrlo rijetki i mogu se pojaviti kod ljudi s vrlo niskim titrima antitijela (<25 IU / ml) ili izrazito visokim (> 1000 IU / ml).

Postupak

materijali

-Krugi Bengalski komplet

-Aglutinacijska ploča bijela pozadina

-50 µl pipeta

-Rotator (neobavezno)

-Vrtlog

Tehnika (kvalitativna metoda)

Komercijalni setovi Rose Bengal dolaze s gotovim reagensima.

-Ugasite reagense prije početka rada.

-Aglutinacijske pločice imaju nacrtane krugove, svaka za drugi uzorak. Koristite 3 kruga, prvi za negativnu kontrolu, drugi za uzorak i treći za pozitivnu kontrolu.

- Stavite kap ili 50 ul kontrolne skupine i uzorka u odgovarajući krug.

-Miješajte Rose Bengal reagens koristeći vrtlog. Stavite kap pored prethodno postavljenih.

-Miješajte s drvenim čačkalicama (koristite jedan za svaki uzorak ili kontrolu). Napravite kružne pokrete i raširite ih tako da pokrijete cijeli krug.

Izvor: slike preuzete s Video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Uređen izgled slike.

-Položite ploču na automatski rotator na 80 do 100 okretaja u minuti ili ručno zakrenite 4 minute. Pročitajte dokaz na kraju ovog vremena.

-Ovjerite da su kontrole dale kako se i očekivalo. Usporedite reakciju ispitnog uzorka s kontrolama. Prijaviti kao pozitivno ako se primijeti aglutinacija i kao negativno ako nema aglutinacije.

Pozitivan test pokazuje da pacijent ima količinu jednaku ili veću od 25 IU / ml anti-Brucella protutijela.

Tumačenje pozitivne (s aglutinacijom) i negativne (bez aglutinacije) reakcije. Izvor: Citrulline. Uređena slika.

Tehnika (polukvantitativna)

Ako je u kvalitativnoj reakciji uzorak snažno pozitivan, može ga se polukvantificirati. Za to su napravljena serijska dvostruka razrijeđenja uzorka fiziološkom fiziološkom otopinom. Prethodno opisani postupak provodi se sa svakim razrjeđivanjem.

Također se tumači promatranjem aglutinacije makroskopski. Rezultat će biti titar najvećeg razrjeđenja u kojem je opažen pozitivan rezultat.

Za izračunavanje približne vrijednosti protutijela na Brucella koristi se sljedeća formula:

25 IU / ml x titra reakcije = IU / ml

Primjerice, ako pacijent koji je u polukvanitativnom ispitnom testu pozitivan nakon ½, ¼ i 1/8 razrjeđenja i počne biti negativan od razrjeđenja 1/16 nadalje, to znači da pacijent ima titar od 8, Primjena formule:

25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml

QA

-Taktima je istekao rok trajanja i moraju ih se poštovati. Ne smije se koristiti ako je reagens istekao.

- Tijekom uporabe pazite da reagens ne sadrži krute čestice, jer je to znak propadanja.

-Državajte između 2 i 8 ° C.

-Ne zamrzavajte, ovim činom se štetno uništava reagens.

-Uvijek provedite ispitivanje zajedno s negativnim i pozitivnim kontrolama.

- Tehnika tolerira uzorke seruma s određenim stupnjem lipemije i hemolize, no ne preporučuje se upotreba pretjerano lipemičnih i hemoliziranih seruma, oba uvjeta mijenjaju rezultate ispitivanja.

-Uvijek dovedite reagense na sobnu temperaturu prije nego što započnete analizu.

-Ne interpretirajte reakcije koje traju duže od preporučenog vremena, jer se time stvara izvještaj o lažnom pozitivnom stanju, jer nakon određenog vremena reagens se taloži, simulirajući pozitivnu reakciju.

-Tehnika je 100% osjetljiva i ima specifičnost od 98%.

-Nakon polukvantitacije od 1000 IU / ml, postoji mogućnost promatranja efekta prozona (lažno negativan zbog viška antitijela u usporedbi s količinom antigena).

Reference

1. Rubio M, Barrio B i Díaz R. Vrijednost testova Rosa de Bengala, Coombs i protuimunoelektroforeze kako bi se dijagnosticirali slučajevi ljudske bruceloze u kojima je serumska aglutinacija negativna. Odjel za mikrobiologiju. Služba kliničke mikrobiologije. Sveučilišna klinika. Sveučilište u Navarri. 406-407. Dostupno na: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
2. „Bruceloza”. Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 6 pro 2019, 14:37 UTC. 18 pro 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
3. Monlab Laboratories. Monlab Bengal Rose - test. 2016. Dostupno na: monlab.es/
4. Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Vlč. Peru. Med. Javno zdravstvo 1997.; 14 (1): 63-66. Dostupno na: scielo.org
5. Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Klinička, serološka i polimerazna lančana reakcija praćenja obitelji s brucelozom. Rev. chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. Dostupno na: scielo.conicyt.