- osnova
- Oprema
- HPLC tipovi
- Normalna fazna kromatografija
- Kromatografija reverzne faze
- Kromatografija s izmjenom jona
- Kromatografija za isključivanje veličine
- Prijave
- Reference
Tekućinska kromatografija visoke performanse je instrumentalna tehnika u kemijskim analizama koje su odvojene smjesa ostavljena, pročistiti i kvantificirati njegove dijelove, a daljnja istraživanja. Poznata je po kratici HPLC, izvedenoj iz engleskog: High Performance Liquid Chromatography.
Tako, kao što mu ime govori, djeluje manipuliranjem tekućinama. Oni se sastoje od mješavine koja se sastoji od analita ili uzorka koji nas zanima te jednog ili više otapala koja djeluju kao pokretna faza; to jest onaj koji provlači analit kroz svu HPLC opremu i stupac.
HPLC oprema. Izvor: Dqwyy
HPLC široko koriste laboratoriji za analizu kvalitete u mnogim tvrtkama; kao što su lijekovi i hrana. Dotični analitičar mora pripremiti uzorak, mobilnu fazu, provjeriti temperaturu i druge parametre, a bočice staviti unutar kotača ili vrtilja kako bi oprema automatski izvršila injekcije.
HPLC oprema povezana je s računalom preko kojeg se mogu promatrati generirani kromatogrami, te pokrenuti analize, kontrolirati brzina protoka mobilne faze, programirati vrstu elucije (izokratsko ili gradijentno) i uključiti detektore (UV -Vis ili maseni spektrofotometar).
osnova
Za razliku od konvencionalne tekuće kromatografije, poput papirne ili silikagelske kolonske kromatografije, HPLC ne ovisi o gravitaciji tečnosti za vlaženje stacionarne faze. Umjesto toga, djeluje s visokotlačnim pumpama, koje navodnjavaju pokretnu fazu ili eluiraju kroz kolonu s većim intenzitetom.
Na ovaj način, nije potrebno svako toliko prolijevati mobilnu fazu kroz stup, već sustav to radi kontinuirano i s većim protocima.
No, učinkovitost ove tehnike nije posljedica isključivo ovog detalja, već i sitnih čestica punila koje čine stacionarnu fazu. Što je manje, njegovo je kontaktno područje s pokretnom fazom veće, tako da će bolje komunicirati s analitom i njegove će se molekule više odvojiti.
Ove dvije karakteristike, plus činjenica da tehnika omogućava spajanje detektora, čine HPLC daleko superiornijom u tankoslojnoj ili papirnoj kromatografiji. Razdvajanja su učinkovitija, pokretna faza putuje bolje kroz stacionarnu fazu, a kromatogrami mogu otkriti svaki neuspjeh u analizi.
Oprema
Pojednostavljeni dijagram rada HPLC opreme. Izvor: Gabriel Bolívar.
Gore je pojednostavljeni dijagram rada HPLC opreme. Otapala su u njihovim odgovarajućim spremnicima, a cijevi su raspoređene tako da pumpa zapre mali volumen u opremu; tako imamo mobilnu fazu.
Mobitelsku fazu ili eluent prvo treba otpliniti na način da mjehurići ne utječu na odvajanje molekula analita koji se miješa s pokretnom fazom nakon što oprema napravi injekcije.
Kromatografska kolona smještena je unutar pećnice koja omogućava regulaciju temperature. Dakle, za različite uzorke postoje odgovarajuće temperature za postizanje razdvajanja visokih performansi, kao i širok katalog stupaca i vrsta ispuna ili stacionarnih faza za specifične analize.
Pokretna faza s otopljenim analitom ulazi u kolonu i iz nje se prvo molekule molekule koje "osjećaju" manji afinitet prema stacionarnoj fazi, dok se one koje je zadržava više eluiraju kasnije. Svaka eluirana molekula stvara signal prikazan na kromatogramu, gdje se promatraju vremena zadržavanja odvojenih molekula.
A s druge strane, mobilna faza nakon prolaska kroz detektor završava u spremniku za otpad.
HPLC tipovi
Postoji mnogo vrsta HPLC-a, ali među svima njima najistaknutije su sljedeće četiri.
Normalna fazna kromatografija
Kromatografija normalne faze odnosi se na onu u kojoj je stacionarna faza polarne naravi, dok je pokretna faza nepolarna. Iako se naziva normalnim, u stvari se najmanje koristi, pri čemu je obrnuta faza najrasprostranjenija i najučinkovitija.
Kromatografija reverzne faze
Budući da je inverzna faza, sada je stacionarna faza apolarna, a pokretna faza polarna. Ovo je posebno korisno u biokemijskoj analizi jer se mnoge biomolekule bolje otapaju u vodi i u polarnim otapalima.
Kromatografija s izmjenom jona
Kod ove vrste kromatografije analit se s pozitivnim ili negativnim nabojem kreće kroz kolonu zamjenjujući ione u kojima živi. Što je naboj veći, to je veće njegovo zadržavanje, zbog čega se široko koristi za odvajanje ionskih kompleksa prijelaznih metala.
Kromatografija za isključivanje veličine
Ova kromatografija, umjesto da se odvaja, zadužena je za pročišćavanje dobivene smjese. Kao što mu ime govori, analit se više ne odvaja ovisno o tome koliko je usko povezan sa stacionarnom fazom, već prema veličini i molekularnoj masi.
Manji molekuli zadržavat će se više od velikih molekula, jer se ove ne nalaze zarobljene između pora na polimernim stupovima.
Prijave
HPLC omogućava kvalitativnu i kvantitativnu analizu. S kvalitativne strane, usporedbom vremena zadržavanja kromatograma u određenim uvjetima, može se otkriti prisutnost određenog spoja. Takva prisutnost može ukazivati na bolest, preljubu ili uporabu lijekova.
Stoga je računalni dio dijagnostičkih laboratorija. Isto tako, nalazi se unutar farmaceutske industrije, jer omogućava provjeru čistoće proizvoda kao i njegove kvalitete s obzirom na otapanje u želučanom okruženju. Početni materijali također su podvrgnuti HPLC da bi se pročistili i osigurali bolji učinak u sintezi lijekova.
HPLC omogućava analizu i odvajanje složenih mješavina proteina, aminokiselina, ugljikohidrata, lipida, porfirina, terpenoida i u osnovi je izvrsna opcija za rad s biljnim ekstraktima.
I na kraju, kromatografija molekularne isključenosti omogućuje vam odabir polimera različitih veličina, jer neki mogu biti manji ili veći od drugih. Na taj se način dobivaju proizvodi s niskom ili visokom prosječnom molekularnom masom, što je presudan faktor njihovih svojstava i buduće primjene ili sinteze.
Reference
- Day, R., i Underwood, A. (1989). Kvantitativna analitička kemija. (peto izd.). Dvorana PEARSON Prentice.
- Bussi Juan. (2007). Tekuća kromatografija visokog učinka., Oporavak od: fing.edu.uy
- Wikipedia. (2019). Tekuća kromatografija visokog učinka. Oporavilo sa: en.wikipedia.org
- Clark Jim. (2007). Tekuća kromatografija visokog učinka. Oporavak od: chemguide.co.uk
- Matthew Barkovich. (05. prosinca 2019.). Tekuća kromatografija visokog učinka. Kemija LibreTexts. Oporavak od: chem.libretexts.org
- GP Thomas. (15. travnja 2013.). Tekuća kromatografija visoke performanse (HPLC) - metode, koristi i primjene. Oporavak od: azom.com